检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2023年第9期43卷 1828-1836页

作者：段明媚曹唱唱赵心怡陈斐周彬姜胜邵春艳周莹珊董婉玉杨杨王晓杜宋厚辉宋泉江浙江农林大学动物科技学院/动物医学学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 山东省烟台市招远市辛庄畜牧兽医站山东烟台265400

为了探究致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhealvirus,BVDV)对小鼠巨噬细胞IFN-β相关信号分子的影响,以0.1和3 MOI感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过RT-qPCR、Western blot、ELISA等方法检测小鼠巨噬细胞中TLR37/TLR7、IRF3/IRF7、STAT1、IFN-β、ISG15/OAS1和USP18/SOCS1等因子的转录和表达水平差异,并对巨噬细胞中BVDV拷贝数进行检测。结果显示BVDV可以进入巨噬细胞细胞内,但病毒拷贝数不能随时间而增长。BVDV进入小鼠巨噬细胞先后上调TLR3和下调TLR7的转录水平,继而显著上调IRF3和IRF7转录水平,并呈现一定的剂量依赖性。STAT1和IFN-β的转录和表达也随BVDV感染而显著升高,而且IFN-β表达量随BVDV的病毒量和感染时间而增加。发挥抗病毒活性的ISG15和OAS1转录水平在BVDV感染前期出现显著升高,感染后期恢复正常,同时在感染后期干扰素负性调节因子USP18和SOCS1转录水平显著升高。所以致细胞病变型BVDV可以感染小鼠巨噬细胞,但不能复制,但可以通过TLR3/7-IRF3/7激活IFN相关信号通路,并接受负性调节因子的调控。

关键词：牛病毒性腹泻病毒小鼠巨噬细胞复制干扰素

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多重连接探针扩增技术(MLPA)在病原微生物检测与疾病诊断中的应用

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农业生物技术学报 2021年第10期29卷 2031-2042页

作者：王雨萌周柯邵春艳杨永春周莹珊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室

多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是一种可以在单个反应中同时对50个靶基因进行定性和半定量分析的检测方法。其主要步骤包括靶序列DNA变性、探针和靶序列DNA杂交、连接酶连接探针、PCR... 详细信息

多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是一种可以在单个反应中同时对50个靶基因进行定性和半定量分析的检测方法。其主要步骤包括靶序列DNA变性、探针和靶序列DNA杂交、连接酶连接探针、PCR扩增、毛细管电泳及数据分析。多重连接探针扩增技术已广泛应用于肿瘤的诊断与预后、遗传性疾病的基因检测、产前检测等领域。鉴于混合感染现象增加,敏感、特异和高通量检测方法是当前动物疾病检测中的急需,多重连接探针扩增技术在病原微生物的高通量检测领域显示出良好的应用前景。本文从多重连接探针扩增技术的原理和步骤、在病原微生物检测、肿瘤诊断和遗传性疾病诊断中的应用、优势和不足以及应用前景展望等方面进行综述,以期为MLPA技术在动物病原检测和疾病诊断中的应用和改良提供参考。

关键词：多重连接探针扩增技术(MLPA) 甲基化特异性MLPA(MS-MLPA) 病原体检测肿瘤诊断遗传疾病诊断

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单增李斯特菌plcB缺失株的生物学特性及酵母双杂交诱饵载体构建

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中国兽医学报 2021年第7期41卷 1328-1334页

作者：黄怡芳吕洁婷陈绵绵程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

为探究单增李斯特菌磷脂酶PlcB在细菌感染过程中的作用及挖掘可能与宿主互作的相关蛋白,本试验利用李斯特菌遗传操作系统构建了plcB缺失回补株及基于PlcB为诱饵的酵母双杂交系统,并通过体外生长曲线、细胞内增殖试验、空斑形成能力等试... 详细信息

为探究单增李斯特菌磷脂酶PlcB在细菌感染过程中的作用及挖掘可能与宿主互作的相关蛋白,本试验利用李斯特菌遗传操作系统构建了plcB缺失回补株及基于PlcB为诱饵的酵母双杂交系统,并通过体外生长曲线、细胞内增殖试验、空斑形成能力等试验研究PlcB介导的生物学功能;通过酵母双杂交诱饵质粒自激活及毒性试验和诱饵蛋白表达检测等方法鉴定可以用于后续互作蛋白筛选的酵母双杂交诱饵质粒。结果显示,缺失plcB基因不影响李斯特菌的体外生长,但缺失株在RAW264.7巨噬细胞内的生存能力相较野生株显著减弱(P<0.01),在L929成纤维细胞中感染形成的空斑较野生株和回补株极显著下降(P<0.001)。将含有pGBKT7-BD-PlcB诱饵质粒的Y2HGold酵母菌株涂布于缺陷培养基中,未发现毒性及自激活现象;通过Western blot能够检测到酵母载体中诱饵蛋白PlcB的稳定表达,说明酵母双杂交系统构建成功,并证实磷脂酶PlcB在李斯特菌宿主内感染和迁移等过程中发挥了重要作用,且基于PlcB的酵母双杂交体系可以为将来深入挖掘PlcB在感染过程中与宿主重要生物学过程及相关分子的互作交流机制奠定了基础。

关键词：单增李斯特菌磷脂酶B 缺失株酵母双杂交诱饵载体胞内感染细胞间迁移

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朱鹮大肠杆菌分离鉴定及耐药性与喹诺酮类耐药基因分子特征分析

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中国畜牧兽医 2023年第10期50卷 4231-4242页

作者：张辉邵乐乐杨永春季艺马武林翟祎梦白洪青周莹珊雷蕾郑亚东宋厚辉邱国强浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 德清县生态林业综合服务中心德清313200 德清县自然资源规划局德清313200

【目的】掌握浙江省德清县驯养朱鹮大肠杆菌的耐药性、耐药基因与分子特征,为治疗朱鹮大肠杆菌感染提供基础数据。【方法】采集该地驯养朱鹮新鲜粪便样本,采用分离培养、形态观察、生化鉴定及16S rDNA序列分析鉴定大肠杆菌;进而采用肉... 详细信息

【目的】掌握浙江省德清县驯养朱鹮大肠杆菌的耐药性、耐药基因与分子特征,为治疗朱鹮大肠杆菌感染提供基础数据。【方法】采集该地驯养朱鹮新鲜粪便样本,采用分离培养、形态观察、生化鉴定及16S rDNA序列分析鉴定大肠杆菌;进而采用肉汤稀释法检测环丙沙星、庆大霉素、丁胺卡那等7种抗菌药对源自不同朱鹮的大肠杆菌分离株菌株的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);选择代表性菌株,通过PCR和测序鉴定其携带qnrS 1、gyrA、gyrB等9种喹诺酮类耐药基因的情况,并分析其蛋白关键氨基酸位点突变与耐药性的关系,采用接合转移分析耐药质粒水平转移情况及其与耐药性的关系,应用卡方检验(Chi-square test)和费歇尔精确检验(Fisher exact test)分析分离株耐药表型与朱鹮年龄、耐药基因的相关性。【结果】本研究共采集了98只朱鹮的粪便,经分离鉴定均获得了大肠杆菌;源自不同朱鹮的98株大肠杆菌对喹诺酮类环丙沙星呈现高度耐药(耐药率为65.3%,64/98),对其余6种药物高度敏感(敏感率均>90%),朱鹮年龄与环丙沙星耐药性极显著相关(P<0.01);选取的31株分离株喹诺酮类耐药基因marR、gyrA、parC和gyrB的突变株占比在3.2%~80.6%之间,携带质粒耐药基因qnrS 1的菌株占比22.6%(7/31);耐药基因阳性菌株占比93.5%(29/31)并分布于6个耐药基因型,其中,marR/gyrA/parC 10株、marR/qnrS 16株、marR 6株、gyrA/parC 3株、marR/gyrA 3株、marR/gyrB/qnrS 11株;环丙沙星耐药表型与耐药基因显著相关(P=0.026),gyrA和parC单基因或联合突变均与喹诺酮耐药显著相关(P=0.038);大肠杆菌分离株qnrS 1基因一次接合成功率为28.6%(2/7),并可导致受体菌对喹诺酮类药物的耐药性增加。【结论】本研究鉴定了朱鹮群体大肠杆菌耐药性,并明确了朱鹮源大肠杆菌对喹诺酮类耐药的主要原因是gyrA和parC单基因或联合突变并携带可水平转移的耐药基因qnrS 1,本研究结果为人工驯养朱鹮救护和耐药性监测提供参考依据,提示应重视朱鹮大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药性。

关键词：朱鹮喹诺酮耐药基因分子特征

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替米考星原粉和可溶性粉在单次给药肉鸡的药代动力学研究

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延边大学农学学报 2022年第2期44卷 55-60页

作者：宋圣哲王俊豪童照寒黄心河杨彩梅金庆日浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江临安311300

该试验评估了替米考星原粉和37.5%替米考星可溶性粉在肉鸡体内的药代动力学行为。将8只肉鸡随机分组,以30 mg/kg灌服替米考星原粉和37.5%替米考星可溶性粉,用UPLC-MS/MS检测血浆中替米考星的质量浓度,采用Winnonlin软件计算其药动学参... 详细信息

该试验评估了替米考星原粉和37.5%替米考星可溶性粉在肉鸡体内的药代动力学行为。将8只肉鸡随机分组,以30 mg/kg灌服替米考星原粉和37.5%替米考星可溶性粉,用UPLC-MS/MS检测血浆中替米考星的质量浓度,采用Winnonlin软件计算其药动学参数。结果表明:37.5%替米考星可溶性粉的峰浓度显著高于原粉(10.3±2.0μg/mL vs 1.4±0.4μg/mL),由此结果可推测肉鸡吸收可溶性粉的速度快于原粉。替米考星可溶性粉的AUC_(all)和AUC_(inf)均大于原粉的AUC_(all)和AUC_(inf)(31.2±9.2μg·h·mL^(-1)vs 11.7±3.2μg·h·mL^(-1);36.7±11.7μg·h·mL^(-1)vs 15.8±3.4μg·h·mL^(-1)),表明替米考星可溶性粉到达全身血液循环的量多于原粉。

关键词：替米考星可溶性粉肉鸡药代动力学超高效液相色谱-质谱联用仪

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反向遗传学技术在PRRSV基础与应用领域中的研究进展

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中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 895-901页

作者：祝徐航胡灵子牟泓晔宋厚辉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种球形、带囊膜的病毒。其基因组为单股正链、不分节段的RNA,大小约为15 kb[1-3],包含10个开放阅读框。PRRSV主要造成妊娠母猪流产、死胎和仔猪... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveand respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种球形、带囊膜的病毒。其基因组为单股正链、不分节段的RNA,大小约为15 kb[1-3],包含10个开放阅读框。PRRSV主要造成妊娠母猪流产、死胎和仔猪呼吸道疾病,高致病性PRRSV(HP-PRRSV)甚至能引起各日龄的猪发病。根据病毒基因组和GP5的抗原性差异,可将PRRSV分为PRRSV-I和PRRSV-II,我国常见的是以NADC30-like、 HP-PRRSV为代表的PRRSV-II[4]。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒妊娠母猪流产高致病性PRRSV 抗原性差异猪呼吸道疾病病毒基因组 GP5 反向遗传学技术

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17β-雌二醇抑制LPS诱导Raw264.7细胞炎症反应及其作用机制

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中国兽医学报 2022年第4期42卷 756-762,769页

作者：余紫薇王晓杜罗通旺姜胜巴少波王磊宋泉江周彬宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为探究雌二醇(17β-E2)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠Raw264.7细胞炎症反应的影响及作用机制,使用LPS刺激Raw264.7诱导细胞炎症为模型,试验分为Mock、LPS、E2和E2+LPS组,分别用qRT-PCR方法检测各组TLR4、IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA表达水平,... 详细信息

为探究雌二醇(17β-E2)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠Raw264.7细胞炎症反应的影响及作用机制,使用LPS刺激Raw264.7诱导细胞炎症为模型,试验分为Mock、LPS、E2和E2+LPS组,分别用qRT-PCR方法检测各组TLR4、IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA表达水平,用ELISA法检测各组细胞上清中IL-1β分泌量变化,用Western blot法检测各组细胞中IL-1β、NF-κB p65、p-IκBα和IκBα的蛋白表达水平,用免疫荧光法观察NF-κB p65在细胞内的表达和定位。结果显示,17β-E2可以不同程度的抑制LPS诱导的Raw264.7细胞TLR4、IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA的表达,差异显著(P<0.05),抑制细胞内IL-1β的蛋白表达量和细胞上清中IL-1β的分泌量,差异极显著(P<0.01);Western blot结果显示17β-E2可以降低LPS诱导的IκBα的磷酸化水平,差异极显著(P<0.01),抑制NF-κB p65进入细胞核;免疫荧光结果显示17β-E2主要通过ERβ抑制p65入核。综上所述,17β-E2主要通过ERβ抑制NF-κB p65入核,从而发挥抑制LPS诱导的Raw264.7细胞炎症反应的作用。

关键词： 17β-E2 LPS Raw264.7 细胞炎症 NF-κB信号通路

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宿主cGAS-STING信号通路调控机制的研究进展

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中国预防兽医学报 2022年第12期44卷 1344-1351页

作者：胡燕萍许锦霞徐阿慧程昌勇宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

先天性免疫识别系统是机体抵御原病侵入的第一道屏障,对于病原微生物的免疫防御至关重要。机体依赖先天性免疫识别系统中的特异性模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)监视病原微生物。一旦病原微生物侵入,机体PRRs通过感... 详细信息

先天性免疫识别系统是机体抵御原病侵入的第一道屏障,对于病原微生物的免疫防御至关重要。机体依赖先天性免疫识别系统中的特异性模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)监视病原微生物。一旦病原微生物侵入,机体PRRs通过感知病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular pat-terns,PAMPs)或危险相关分子模式(Danger-associat-ed molecular patterns,DAMPs)识别病原并触发机体产生一系列的免疫保护反应[1]。

关键词： cGAS-STING 信号通路 STING

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中国动物福利现状分析及立法建议

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中国畜牧杂志 2022年第7期58卷 63-67页

作者：陆佳峰马永双高慧王翀杨金勇浙江农林大学集贤学院浙江杭州311300 浙江农林大学文法学院浙江杭州311300 浙江省畜牧技术推广与种畜禽监测总站浙江杭州310021 浙江农林大学动物科技学院•动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

动物福利是指为动物创设一定的环境条件,满足它们的基本生存需求。随着我国生态文明建设的新发展,关于动物福利制度及其立法的问题日益引起社会的广泛关注。而我国在这一层面依旧存在空白。本文通过梳理国外动物福利立法的发展历史,并... 详细信息

动物福利是指为动物创设一定的环境条件,满足它们的基本生存需求。随着我国生态文明建设的新发展,关于动物福利制度及其立法的问题日益引起社会的广泛关注。而我国在这一层面依旧存在空白。本文通过梳理国外动物福利立法的发展历史,并与国内现有的动物福利相关的法律法规进行比较,以明确保护动物福利的立法目的、扩大动物福利的范围、建立健全公众参与制度等,为完善我国动物福利立法提供思路与启示,以促进新时期生态文明建设的发展。

关键词：动物福利动物保护立法建议

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生物活性玻璃填充对犬拔牙后牙槽窝愈合的影响

生物活性玻璃填充对犬拔牙后牙槽窝愈合的影响

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中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十一次会员代表大会暨第26次学术研讨会

作者：孙宸周彬浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地

本试验旨在研究生物活性玻璃(倍骼生)对于犬拔牙后牙槽窝愈合的影响。试验选取8只成年中华田园犬,体重15-25 kg,将动物分为2组,每组4只,对动物下颌第三前臼齿进行闭合式拔牙,随后对牙槽窝进行填充,分别为不做填充、生物活性玻璃填充(试... 详细信息

本试验旨在研究生物活性玻璃(倍骼生)对于犬拔牙后牙槽窝愈合的影响。试验选取8只成年中华田园犬,体重15-25 kg,将动物分为2组,每组4只,对动物下颌第三前臼齿进行闭合式拔牙,随后对牙槽窝进行填充,分别为不做填充、生物活性玻璃填充(试验组)。试验过程中观察并记录手术后动物的全身炎症反应情况,动物的疼痛表现,动物术部黏膜的炎症反应情况,动物的饮食饮水情况,以及术部X线片监测骨再生情况。结果表明,术后两组动物均不会出现全身炎症反应;术后疼痛反应在两组都较轻微,组间无显著性差异;动物会出现局部黏膜炎症,但会在短时间恢复,黏膜炎症消退速度,生物活性玻璃组慢于不填充组且差异显著(P<0.05);拔牙窝骨组织再生速度生物活性玻璃组效果优于不填充组。本研究说明生物活性玻璃因其填充后安全且对牙槽窝的愈合有积极作用,可以作为犬拔牙后牙槽窝的填充物。

关键词：犬生物活性玻璃牙槽窝安全性有效性

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