检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2025年

作者：刘郁匆杨立锋任耿佳桑琴嘉宋厚辉孙静江玲丽程昌勇陈绵绵浙江农林大学动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地同一健康和食品安全“一带一路”国际联合实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室宁波卫生职业技术学院

【目的】利用单核增生李斯特氏菌野生株、脂蛋白基因pplA缺失株和回补株探究PplA在单核增生李斯特氏菌感染功能中的作用。【方法】比较野生株、缺失株和回补株在细胞溶血能力、细胞黏附与侵袭、胞内增殖能力、胞间迁移能力、小鼠脏器定... 详细信息

【目的】利用单核增生李斯特氏菌野生株、脂蛋白基因pplA缺失株和回补株探究PplA在单核增生李斯特氏菌感染功能中的作用。【方法】比较野生株、缺失株和回补株在细胞溶血能力、细胞黏附与侵袭、胞内增殖能力、胞间迁移能力、小鼠脏器定殖能力、小鼠脏器内的细菌毒力因子转录水平和群体感应相关基因转录水平等方面的差异，从而解析PplA在单核增生李斯特氏菌感染宿主中的作用。【结果】缺失pplA基因后，单核增生李斯特氏菌的胞内增殖能力和胞间迁移能力无显著差异，但溶血能力，细胞黏附和侵袭能力、小鼠脏器定殖能力和小鼠脏器内的细菌毒力因子inlB、plcA、plcB、hly和prfA转录水平降低，此外，群体感应相关基因agrA、agrB、agrC和luxS的转录水平发生了变化。【结论】研究表明单核增生李斯特氏菌脂蛋白PplA参与细菌毒力调控过程，影响细菌的致病力。

关键词：单核增生李斯特氏菌脂蛋白PplA 细胞感染毒力调控

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镉诱导大鼠肝细胞BRL-3A铁死亡及其作用机制

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中国兽医学报 2023年第6期43卷 1234-1241页

作者：李卓悦罗通旺郁孝强王晓杜宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

用4μmol/L氯化镉处理大鼠肝脏细胞BRL-3A 12,24,36 h后,通过CCK-8法测定细胞活力,比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测细胞中活性氧(ROS)的含量及线粒体膜电位水平,比色法检测细胞中氧化还原相关指标丙二醛(MDA... 详细信息

用4μmol/L氯化镉处理大鼠肝脏细胞BRL-3A 12,24,36 h后,通过CCK-8法测定细胞活力,比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测细胞中活性氧(ROS)的含量及线粒体膜电位水平,比色法检测细胞中氧化还原相关指标丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量的变化,Western blot检测铁死亡相关蛋白的表达,荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))的含量,电子显微镜观察细胞的超微结构。结果显示,镉(Cd)处理后,BRL-3A细胞活力下降,LDH水平显著升高;ROS、MDA、GSH、GSSG和Fe^(2+)含量极显著增加(P<0.01),FTH1、TfR1、HO-1蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),GPX4蛋白表达水平极显著下降(P<0.01),SLC7A11蛋白水平变化不显著,细胞线粒体萎缩变小、嵴减少或消失。结果表明,Cd处理可致BRL-3A细胞发生脂质过氧化物和Fe^(2+)的蓄积,GPX4水平下降,从而介导细胞发生铁死亡。

关键词：镉大鼠 BRL-3A 铁死亡亚铁离子

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LncRNA调控病毒感染与复制机制进展

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中国动物传染病学报 2022年第5期30卷 231-236页

作者：王磊牟泓烨祝徐航胡灵子郑谋凤董婉玉周莹珊王晓杜宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽生态绿色健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

长链非编码RNA(lncRNA)是一类核酸片段200 bp~100 kb、无典型开放阅读框、不编码蛋白质、具有调节功能的非编码RNA,它广泛存在于各种生命体中,数量大,种类多。其调控细胞内生物学功能包括:参与DNA甲基化、基因组印记及染色质修饰、调控... 详细信息

长链非编码RNA(lncRNA)是一类核酸片段200 bp~100 kb、无典型开放阅读框、不编码蛋白质、具有调节功能的非编码RNA,它广泛存在于各种生命体中,数量大,种类多。其调控细胞内生物学功能包括:参与DNA甲基化、基因组印记及染色质修饰、调控转录激活、干扰细胞核内物质运输、核酸降解等重要过程。lncRNA与病毒感染复制的关系主要表现为:一方面病毒抑制胞内lncRNA的表达,借助lncRNA的转录激活调控功能,引起靶细胞凋亡通路的激活,促进病毒复制;另一方面病毒利用胞内lncRNA表达,调控先天免疫、NF-κB信号、炎症信号通路,进而促进病毒复制和感染。本文总结lncRNA与病毒感染和复制之间的研究最新进展,为研究病毒致病或者免疫逃逸机制提供新的视角。

关键词： lncRNA 调控机制病毒感染复制

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镉胁迫下α-硫辛酸对大鼠肾细胞MAPK信号通路的影响

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 1051-1058页

作者：罗通旺李卓悦王晓杜邵春艳宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了探究α-硫辛酸(α-LA)在镉(Cd)暴露的情况下对大鼠肾细胞MAPK通路的影响,以SD大鼠、大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E)和大鼠原代肾小管上皮细胞(rPT)为试验模型,设置对照组、Cd暴露组、Cd+α-LA组以及α-LA组。采用透射电镜观察细胞... 详细信息

为了探究α-硫辛酸(α-LA)在镉(Cd)暴露的情况下对大鼠肾细胞MAPK通路的影响,以SD大鼠、大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E)和大鼠原代肾小管上皮细胞(rPT)为试验模型,设置对照组、Cd暴露组、Cd+α-LA组以及α-LA组。采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,用光学显微镜观察肾脏组织病理学的变化,通过Western blot检测MAPK信号通路相关蛋白的相对表达水平。结果显示,与对照组相比,Cd暴露组多数细胞出现细胞核固缩、变形、染色质边聚甚至溶解,细胞内出现大量空泡;HE染色可见细胞变性、细胞管型、管壁变薄甚至破裂的现象;ERK1/2、JNK1/2和p38的磷酸化水平显著或极显著升高。与Cd暴露组相比,Cd+α-LA组细胞核皱缩轻微,染色质分布相对均匀;肾小球毛细血管充血和肾小管变性明显改善;ERK1/2、JNK1/2和p38的磷酸化水平显著或极显著降低。α-LA组与对照组相比无明显差异。结果表明,Cd暴露可诱导大鼠肾细胞损伤并激活MAPK信号通路,而α-LA通过抑制MAPK信号通路的活化缓解Cd诱导的细胞损伤。

关键词：镉 α-硫辛酸 MAPK 肾小管上皮细胞

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2021年浙江省部分地区猪圆环病毒2型及3型的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2023年第6期45卷 643-648页

作者：于浩然甘诗琪刘雅琦董婉玉杜静周兴东周莹珊王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了解2021年中国浙江省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,本研究采用PCR技术对不同地区来源的702份病料样品检测。选取10个PCV2阳性样品进行全基因序列扩增和同源性及遗传演化分析。同时对已测序的26个PC... 详细信息

为了解2021年中国浙江省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,本研究采用PCR技术对不同地区来源的702份病料样品检测。选取10个PCV2阳性样品进行全基因序列扩增和同源性及遗传演化分析。同时对已测序的26个PCV2 ORF2基因和24个PCV3 ORF2基因分别进行同源性分析,以及对Cap蛋白氨基酸序列进行比对分析。结果显示,病料样品中PCV2的总阳性率为32.8%(230/702),PCV3的总阳性率为15.0%(105/702)。其中PCV2在血清样品中的检出率最高,而PCV3在粪便样品中的检出率较高。PCV2和PCV3混合感染血清阳性率为6.1%(33/539),且仅在血清样品中有混合感染。测序筛选后共获得6个PCV2全基因序列,其中5个全基因序列为1767 bp,1个为1708 bp。PCV2全基因序列与24个国内外PCV2参考株全基因序列相比,同源性为94.1%~98.9%。通过全基因遗传进化树显示,6个PCV2全基因有5个PCV2d亚型和1个PCV2b亚型。ORF2基因序列的同源性结果显示,PCV2与PCV2疫苗株的同源性为90.2%~95.3%;PCV3与PCV3参考株的同源性为99.2%~99.4%,与PCV2疫苗株的同源性仅为32%,可能影响PCV2疫苗的保护效力。通过ORF2编码的Cap蛋白氨基酸序列比对结果显示,本研究中的PCV2 Cap蛋白氨基酸序列有20处变异,其中R^(59)K、K^(63)R、A^(68)N、R^(89)L、S^(90)T、S^(121)T、T^(134)N、S^(169)R、E^(210)D的变异揭示了该地区PCV2b亚型正逐渐向PCV2d亚型转变。上述结果表明,浙江省部分地区的PCV2d亚型已成为主要的流行基因型,且PCV3与PCV2疫苗株同源性较低。本研究结果丰富了浙江省PCV的分子流行病学资料,为相应疫病的防控提供一定的参考依据。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型 ORF2基因序列分析

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农业生物技术学报 2023年第11期31卷 2367-2376页

作者：刘晨宋亚雯蒋昕孙静江玲丽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室宁波卫生职业技术学院

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)可诱导机体产生强烈的免疫反应，作为递呈载体在各种癌症和传染病免疫治疗中的研究越来越多，是一种生物安全性高的肿瘤免疫治疗疫苗研发载体。本研究在实验室前期减毒单增李斯特菌LM基础上，构建... 详细信息

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)可诱导机体产生强烈的免疫反应，作为递呈载体在各种癌症和传染病免疫治疗中的研究越来越多，是一种生物安全性高的肿瘤免疫治疗疫苗研发载体。本研究在实验室前期减毒单增李斯特菌LM基础上，构建与李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)抗原Ag85B (Antigen 85B)和ESAT6 (6 kD early secreted antigen target)的肿瘤疫苗菌株LM-Ag85B和LM-ESAT6；通过Western blot确定抗原能与LLO融合表达和正常分泌；利用细菌感染生物学方法研究LM-Ag85B和LM-ESAT6的体外生长能力及溶血活性；利用小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型评价LM-Ag85B和LM-ESAT6与LM-E7 (表达宫颈癌相关抗原E7)联合应用在小鼠宫颈癌模型中的治疗效果。结果显示，LM-Ag85B和LM-ESAT6能分别正常表达分泌携带的Ag85B和ESAT6抗原；LM-Ag85B、LM-ESAT6在体外生长能力与野生型无显著差异，溶血活性低于野生型；在小鼠宫颈癌治疗模型中，LM-Ag85B、LM-ESAT6和LM-E7联合应用试验组较对照组显著抑制肿瘤生长，治疗效果良好。本研究证实了结核分枝杆菌抗原能够增强抗肿瘤效果，为推动基于减毒细菌为载体的肿瘤免疫治疗研究提供了科学依据。

关键词：减毒单增李斯特菌结核分枝杆菌相关抗原宫颈癌疫苗载体

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氯胺酮通过抑制谷氨酸受体和蛋白激酶损害孕鼠子代的学习记忆能力

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 1005-1012页

作者：赵菁华姜胜张儒新李沫萱杨玙秦潜高利曾欢王巍宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江杭州311300 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

氯胺酮是常见的临床麻醉剂,具有较好的镇静、镇痛与麻醉效果。怀孕动物注射氯胺酮是否会影响其子代认知功能仍然未知。本研究通过建立孕鼠暴露模型探究氯胺酮对子代行为学和神经系统的影响。在母鼠怀孕第14天,首先肌肉注射氯胺酮(80 mg/... 详细信息

氯胺酮是常见的临床麻醉剂,具有较好的镇静、镇痛与麻醉效果。怀孕动物注射氯胺酮是否会影响其子代认知功能仍然未知。本研究通过建立孕鼠暴露模型探究氯胺酮对子代行为学和神经系统的影响。在母鼠怀孕第14天,首先肌肉注射氯胺酮(80 mg/kg),每隔1 h按照40 mg/kg补药3次。子代幼鼠于出生后25~29 d进行Morris水迷宫试验。并应用透射电镜、尼氏染色和高尔基染色确定大脑海马区轴突、尼氏小体和树突棘密度的变化,同时分别通过RT-PCR和Western blot检测海马区离子型谷氨酸受体(GLuN1、GLuN2A、GLuN2B、GluR1和GluR2)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)基因的转录和蛋白表达水平。结果表明,氯胺酮麻醉会导致子代幼鼠花费更长的时间找到定位平台,海马区轴突数量、尼氏小体密度和树突棘密度下降,CaMKⅡ、PKA、PKC、GLuN2A、GLuN2B、GluR1和GluR2的蛋白表达显著下降。综上所述,孕鼠长时间氯胺酮麻醉会导致子代幼鼠蛋白激酶和谷氨酸受体发生变化,影响海马体突触可塑性,最终损害学习和记忆能力。

关键词：氯胺酮妊娠子代幼鼠谷氨酸受体蛋白激酶

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单增李斯特菌氧化还原蛋白系统研究进展

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微生物学报 2021年第2期61卷 346-356页

作者：韩月叶佳雯程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

单增李斯特菌是重要的食源性病原微生物,抗氧化应激是李斯特菌生存和致病的关键机制之一。活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度升高会破坏氧化还原平衡,使机体处于氧化胁迫的应激状态,进而导致生物大分子如蛋白质的损伤。蛋白质中... 详细信息

单增李斯特菌是重要的食源性病原微生物,抗氧化应激是李斯特菌生存和致病的关键机制之一。活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度升高会破坏氧化还原平衡,使机体处于氧化胁迫的应激状态,进而导致生物大分子如蛋白质的损伤。蛋白质中半胱氨酸等含硫氨基酸对ROS尤其敏感,半胱氨酸残基脱氢氧化生成二硫键,可以稳定蛋白质空间构象,增加蛋白质的半衰期,进而使蛋白质免受损坏。抗氧化修复通常指的是对半胱氨酸残基的氧化还原过程,即二硫键的形成与打开。硫氧还蛋白家族包含硫氧还蛋白、谷氧还蛋白和Dsb-样蛋白系统,是生物体中常见的氧化还原修复系统。本文根据现有的文献报道,结合本课题组的研究进展,对单增李斯特菌硫氧还蛋白家族进行综述,以期为完善单增李斯特菌硫氧还蛋白调控系统提供参考。

关键词：单增李斯特菌硫氧还蛋白家族硫氧还蛋白谷氧还蛋白 Dsb-样蛋白

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单增李斯特菌内化素家族蛋白Lmo1136生物学特性的研究

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中国预防兽医学报 2024年第10期46卷 997-1004页

作者：叶泽安杨立锋丁强宋厚辉孙静程昌勇陈绵绵浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

单增李斯特菌内化素家族蛋白通常在该菌感染及致病中起重要作用,为探究其内化素家族蛋白Lmo1136在李斯特菌感染致病机制中的作用,本研究以单增李斯特菌EGD-e基因组为模板,经PCR扩增lmo1136基因的上下游基因片段,经重叠延伸PCR将同源臂... 详细信息

单增李斯特菌内化素家族蛋白通常在该菌感染及致病中起重要作用,为探究其内化素家族蛋白Lmo1136在李斯特菌感染致病机制中的作用,本研究以单增李斯特菌EGD-e基因组为模板,经PCR扩增lmo1136基因的上下游基因片段,经重叠延伸PCR将同源臂连接后与温敏型穿梭质粒pKSV7连接构建重组质粒,利用同源重组技术使重组质粒与EGD-e同源片段发生交换,得到缺失株Δlmo1136并经PCR和测序鉴定;以单增李斯特菌EGD-e基因组为模板,PCR扩增lmo1136基因与启动子片段,并与整合型穿梭质粒pIMK2连接后电转化Δlmo1136感受态细胞,得到回补株CΔlmo1136并经PCR和测序鉴定。将单增李斯特菌EGD-e、Δlmo1136和CΔlmo1136分别接种96孔板,37℃培养12h后测定各菌株OD600nm值,并根据OD600nm值绘制各菌株的生长曲线。结果显示各菌株生长速度无显著差异(P>0.05)。将各菌株以感染复数(MOI)10感染人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)后30min和90min时收集细胞裂解物,接种于BHI培养基进行单菌落计数,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136的黏附性无显著差异(P>0.05),侵袭力显著下降(P<0.05),而CΔlmo1136的黏附性与侵袭力均无显著差异(P>0.05)。将各菌株均以MOI0.2感染小鼠巨噬细胞(RAW246.7细胞)后2h、5h和8h时收集细胞裂解物接种于BHI培养基,单菌落计数,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136和CΔlmo1136菌落数均无显著差异(P>0.05)。将各菌株均以1×10^(6) cfu/只经腹腔注射小鼠,48 h后取小鼠脾脏与肝脏研磨,接种于BHI培养基进行单菌落计数,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136的菌落数显著下降(P<0.05),CΔlmo1136的菌落数无显著差异(P>0.05)。将各菌株均以1×10^(6)cfu/只经腹腔注射小鼠,每隔24h记录小鼠存活情况,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136组小鼠存活率显著升高(P<0.05),CΔlmo1136组小鼠的存活率无显著差异(P>0.05)。上述结果首次表明lmo1136缺失后,单增李斯特菌的生长能力、细胞黏附性和胞内增殖能力均无显著变化,但对细胞侵袭力、小鼠脏器定植能力显著降低,小鼠存活率显著升高,阐明了内化素家族蛋白Lmo1136在单增李斯特菌细胞侵袭、脏器定植和对小鼠致病机制中发挥重要作用,本研究上述结果为进一步解析Lmo1136介导细菌的感染机制奠定了重要基础。

关键词：单增李斯特菌内化素家族蛋白侵袭力宿主感染

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单核细胞增多性李斯特菌谷胱甘肽还原酶GR的生物学特性

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微生物学报 2021年第3期61卷 714-728页

作者：吕洁婷孙静郑光辉韩月成炯泽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

【目的】本文旨在构建单核细胞增多性李斯特菌谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)基因lmo1433(gr)缺失株,并研究GR在细菌生长和运动过程中发挥的作用及与谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)系统间的调控关系,探究GR参与细菌抗氧化应... 详细信息

【目的】本文旨在构建单核细胞增多性李斯特菌谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)基因lmo1433(gr)缺失株,并研究GR在细菌生长和运动过程中发挥的作用及与谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)系统间的调控关系,探究GR参与细菌抗氧化应激和致病力的生物学功能,为阐明氧化还原蛋白介导细菌环境适应和宿主内感染的机制奠定分子基础。【方法】利用细菌遗传操作系统构建获得gr缺失株及回补株后,通过分子生物学和感染生物学手段,比较野生株和突变株的运动性、生长能力、抗氧化应激、细胞黏附、侵袭和增殖能力;利用整合型质粒构建带GR启动子的荧光报告系统,并结合荧光定量分析GR受Grx调控的情况。【结果】缺失gr后李斯特菌在体外培养基中的生长能力未受明显影响,但在半固体培养基中的运动能力却显著增强;缺失gr后细菌在铜离子、镉离子以及肼中抗氧化应激能力增强,在H_2O_2中无差异;缺失gr后细胞黏附、侵袭和增殖能力均显著增强;荧光报告系统定量分析发现grx缺失后gr的启动子活性显著增强,表明Grx参与对GR的转录负调控。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌谷胱甘肽还原酶GR能调控细菌的运动能力,并且缺失GR增强了李斯特菌的抗氧化应激和感染宿主能力;首次证实了GR的自身转录受Grx负调控,但具体分子机制有待于深入探究。本研究有助于深入理解单增李斯特菌氧化还原蛋白的调控关系以及通过参与诸多生物学过程介导细菌体外环境适应及宿主内感染的分子机制,为防控胞内菌感染提供了新策略。

关键词：单核细胞增多性李斯特菌谷胱甘肽还原酶运动性氧化应激耐受细菌感染

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