检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2024年第1期44卷 156-163,191页

作者：仲伟吴瑗王海涛阮胜钢陈琳喆郭美君宋厚辉杜静王晓杜浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 金华职业技术学院农学院浙江金华321007 绍兴咸亨绍鸭育种有限公司浙江绍兴312000

为了探讨翁芩复方(WQ)对雏鸭感染禽多杀性巴氏杆菌(Pm)的预防效果及其作用,本研究采用肉汤二倍稀释法体外测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);灌胃氟苯尼考(FF)及不同剂量WQ预处理雏鸭7 d后口服感染Pm,通过比较日增质量和成活率... 详细信息

为了探讨翁芩复方(WQ)对雏鸭感染禽多杀性巴氏杆菌(Pm)的预防效果及其作用,本研究采用肉汤二倍稀释法体外测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);灌胃氟苯尼考(FF)及不同剂量WQ预处理雏鸭7 d后口服感染Pm,通过比较日增质量和成活率评价WQ对Pm感染雏鸭的预防效果,RT-PCR和细菌计数检测Pm入侵和定植肝脏程度,全血细胞计数(CBC)检测血液中血细胞变化,RT-qPCR检测十二指肠白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)、白介素4(IL-4)表达。结果表明:WQ对Pm有明显的体外抑菌效果;WQ干预后雏鸭成活率提高,日增质量提高;WQ组肝脏的Pm数量减少;WQ能显著改善血红蛋白浓度(HGB)和红细胞压积(HCT);WQ降低Pm诱导的IL-10和IL-4水平。因此,WQ可有效预防Pm感染,为临床防控该菌大规模流行提供了技术支撑。

关键词：多杀性巴氏杆菌翁芩复方全细胞计数细胞因子

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牛分枝杆菌Mb0869c抑制外源性细胞凋亡的研究

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 729-736页

作者：梁秋韵孟祥苗杨可黄蓓宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为探究与人受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1)存在互作的牛分枝杆菌(***) Mb0869c蛋白对细胞凋亡的作用机制,本研究通过PCR从*** DNA中扩增Mb0869c基因片段后构建重组质粒p MN437-Mb0869c并经PCR和测序鉴定正确后,利用电转化法将重组质粒... 详细信息

为探究与人受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1)存在互作的牛分枝杆菌(***) Mb0869c蛋白对细胞凋亡的作用机制,本研究通过PCR从*** DNA中扩增Mb0869c基因片段后构建重组质粒p MN437-Mb0869c并经PCR和测序鉴定正确后,利用电转化法将重组质粒电转入耻垢分枝杆菌(MS)中,并经western blot鉴定Mb0869c蛋白的表达情况。结果显示,重组菌株中出现约55 ku的特异性条带,表明获得了表达Mb0869c的重组菌MS_Mb0869c。将MS_Mb0869c株和对照菌株MS_Vec分别感染人单核巨噬细胞(THP-1),通过PI和AnnexinⅤ/FITC染色,经流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,结果显示,MS_Mb0869c感染细胞的凋亡率显著低于MS_Vec感染组,这表明Mb0869c可以抑制MS诱导的细胞凋亡。将上述获得的Mb0869c基因片段克隆于p LVX-IRES-Puro-3×Flag中,构建的重组质粒经测序鉴定正确后,转染HEK293T细胞中,利用嘌呤霉素筛选表达Mb0869c的细胞并经western blot鉴定。结果显示,构建的HEK293T细胞中出现约55 ku的特异性条带,且随着细胞传代次数的增加,蛋白表达量未减少,这表明稳定表达Mb0869c的细胞系HEK293T/Mb0869c正确构建。利用不同浓度的肿瘤坏死因子α (TNF-α)和IAP抑制剂(SM164)作用于HEK293T细胞,通过检测细胞内ATP的含量确定细胞凋亡发生情况。结果显示,100 ng/mL TNF-α和25 nmol/L SM164在作用细胞24 h后,诱导细胞凋亡的效果最佳。以该浓度分别作用于HEK293T/Mb0869c和对照组HEK293T/Con细胞24 h后,统计细胞的存活率。结果显示前者的存活率极显著高于后者(P<0.01),表明Mb0869c能够抑制细胞凋亡。通过PCR扩增人RIPK1的3个结构域片段,并分别克隆至p CMV-Myc中构建真核表达重组质粒并经菌落PCR和测序鉴定正确后分别转染HEK293T/Mb0869c细胞,通过免疫共沉淀法(Co-IP)检测RIPK1结构域与Mb0869c的互作。结果显示Mb0869c和RIPK1的激酶结构域(KD)和中间结构域(ID)存在相互作用。上述结果表明,Mb0869c蛋白在***抑制细胞凋亡中具有重要的作用,且这种抑制作用是通过RIPK1实现的。本研究为***蛋白通过RIPK1调节细胞凋亡作用机制的研究提供实验依据。

关键词：牛分枝杆菌细胞凋亡 Mb0869c 受体相互作用蛋白激酶1

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两种启动子拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒ZJ-JX-2015株效率的比较研究

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中国预防兽医学报 2023年第5期45卷 529-534页

作者：阚恩晞祝徐航张孝辉董婉玉宋厚辉周兴东王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为比较不同启动子驱动的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强毒株ZJ-JX-2015感染性克隆拯救的各重组病毒的效率,本研究将ZJ-JX-2015株全基因组引入无义突变位点(C-G,形成Bst B I酶切位点)作为后期鉴定标签并分成4段经PCR扩增后,分别克隆至... 详细信息

为比较不同启动子驱动的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强毒株ZJ-JX-2015感染性克隆拯救的各重组病毒的效率,本研究将ZJ-JX-2015株全基因组引入无义突变位点(C-G,形成Bst B I酶切位点)作为后期鉴定标签并分成4段经PCR扩增后,分别克隆至含CMV启动子的p SMART-BAC载体和含T7启动子的p WSK-29载体中构建感染性克隆质粒p SMART-BAC-CMV-r PRRSV和p WSK-29-T7-r PRRSV,经PCR及测序鉴定正确后将前者分别转染BHK-21和293T细胞;将后者转染BHK-21(T7)细胞。48 h后收集上述各细胞上清液接种Marc-145细胞并连续传10代。通过观察细胞病变(CPE),收集不同代次Marc-145细胞上清液经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定拯救的各重组病毒。将拯救的各重组病毒以MOI 0.1接种Marc-145细胞,通过测定不同时间各病毒上清液的病毒效价(TCID50)绘制生长曲线。结果显示,各细胞上清液[BHK-21、293T细胞及BHK-21细胞(T7)]在Marc-145细胞中传至第2代时均出现CPE;PCR及测序鉴定结果显示,各代次的各组Marc-145细胞上清液均能扩增到544 bp的目的片段,且均含遗传标记Bst B I酶切位点。IFA结果显示,上述各代次各组Marc-145细胞上清液接种的各细胞中均出现绿色荧光,对照Marc-145细胞无绿色荧光。上述结果表明,拯救了3株重组PRRSV:BHK-r JX15、293T-r JX15(分别转染BHK21及293T细胞所得)及T7-r JX15株[转染BHK-21(T7)细胞所得],且各病毒的遗传稳定性较强。测定各病毒TCID50并绘制各病毒生长曲线,结果显示,在各病毒的感染后期(感染后72 h),BHK-r JX15株的病毒效价显著高于亲本病毒(P<0.05),极显著高于T7-r JX15及293T-r JX15株(P<0.01);293T-r JX15的病毒效价极显著高于T7-r JX15株(P<0.01),但这两株病毒的效价又极显著低于亲本病毒(P<0.001)。且4株病毒的生长趋势基本一致。上述结果表明CMV启动子驱动的重组PRRSV(BHK-rJX15和293T-r JX15)复制水平高于T7启动子驱动的重组病毒(T7-rJX15),尤以CMV启动子驱动并通过BHK细胞拯救的重组病毒(BHK-rJX15)复制水平最高。提示,CMV启动子更适用于构建PRRSV的反向遗传操作系统。本研究为构建PRRSV反向遗传操作系统及其蛋白功能研究、新型疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传感染性克隆

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单核细胞增多性李斯特菌OpuCA蛋白介导抗氧化应激和宿主感染研究

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微生物学报 2022年第7期62卷 2543-2554页

作者：应煜沈世宇戚俊彦陈绵绵徐加利袁艺萱江玲丽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 浙江农林大学集贤学院浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】本文旨在研究opuCA基因在单核细胞增多性李斯特菌(单增李斯特菌)生长过程及渗透胁迫下发挥的作用,探究opuCA基因参与细菌抗氧化应激和致病力的生物学功能,为阐明OpuCA蛋白介导细菌环境适应和宿主内感染的机制奠定基础。【方法... 详细信息

【目的】本文旨在研究opuCA基因在单核细胞增多性李斯特菌(单增李斯特菌)生长过程及渗透胁迫下发挥的作用,探究opuCA基因参与细菌抗氧化应激和致病力的生物学功能,为阐明OpuCA蛋白介导细菌环境适应和宿主内感染的机制奠定基础。【方法】利用细菌同源重组方法获得opuCA缺失株及回补株后,通过分子生物学、感染生物学和激光共聚焦技术,研究野生株和突变株的生长能力、抗渗透应激能力、抗氧化应激能力、细胞粘附、侵袭以及胞内增殖能力。【结果】缺失opuCA基因后,李斯特菌体外生长能力并没有受到影响,但在渗透条件下生长能力减弱;opuCA缺失株在铜离子和镉离子中抗氧化应激能力降低,但在巯基特异性氧化剂肼应激中无明显变化;opuCA缺失株在细胞中的侵袭能力显著减弱,且缺失该基因导致细菌聚合actin能力下降,进而影响了细菌在胞间迁移。【结论】本研究首次证实了缺失opuCA基因能降低单增李斯特菌抗氧化应激能力和感染宿主能力,并且在渗透胁迫下细菌生长能力减弱,但具体的分子机制有待深入研究。本研究有助于深入理解单增李斯特菌OpuCA蛋白介导的细菌体外环境适应及宿主内感染的分子机制,为防控单增李斯特菌感染提供了新策略。

关键词：单核细胞增多性李斯特菌 OpuCA 渗透胁迫氧化应激耐受细菌感染

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重组耻垢分枝杆菌MS_PE16的构建及其生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2023年第11期45卷 1158-1164页

作者：毕斯琪杨可徐阿慧宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为探究牛分枝杆菌(***)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以***基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝杆菌中构... 详细信息

为探究牛分枝杆菌(***)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以***基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝杆菌中构建重组耻垢分枝杆菌MS_PE16及对照重组耻垢分枝杆菌MS_Vec。经western blot鉴定结果显示,重组耻垢分枝杆菌中PE16在55 ku左右正确表达,而MS_Vec则无该特异性条带。对MS_PE16及MS_Vec进行生长曲线测定,并利用倒置显微镜观察MS_PE16及MS_Vec的菌落形态;将培养至对数生长期的MS_PE16及MS_Vec分别以MOI 10感染人白血病单核细胞(THP-1细胞),感染后0(感染4 h后经庆大霉素处理2 h,此时计为0)、24 h、48 h时采用平板计数法检测胞内菌数量;细菌感染后24 h和48 h时收集各组细胞培养上清,利用ELISA试剂盒检测各组细胞IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-β的表达分泌水平。生长曲线测定结果显示,PE16对分枝杆菌的生长无显著影响;菌落形态观察结果显示,MS_PE16与MS_Vec的菌落形态无明显区别;胞内活菌数量检测结果显示,细菌感染后0和24 h,MS_PE16在THP-1细胞中的数量极显著低于MS_Vec(P<0.01),但在感染后48 h,MS_PE16在THP-1细胞中的存活率极显著高于MS_Vec组在THP-1细胞中的存活率(P<0.001);细胞因子检测结果显示,MS_PE16感染组细胞中IFN-β的分泌水平极显著高于MS_Vec组(P<0.01)。上述结果表明PE16对分枝杆菌的生长和菌落形态均无显著影响,但其可提高分枝杆菌在巨噬细胞内的存活率,且可促进巨噬细胞中IFN-β的分泌水平。本研究初步揭示了分枝杆菌PE16蛋白的功能,为***感染机制的进一步研究提供了实验数据。

关键词：牛分枝杆菌 PE16 胞内菌免疫反应

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基于减毒单增李斯特菌递呈鸡柔嫩艾美耳球虫MIC3抗原的重组疫苗免疫保护效果的评估

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中国预防兽医学报 2023年第6期45卷 628-634页

作者：张韧哲孙倩李婉婧黄欣怡张儒新曾欢郑亚东宋厚辉王璞程昌勇浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

本实验室前期构建的基于毒力基因改造的减毒单增李斯特菌(LM-1)被证实是一种较为安全的疫苗载体。为构建表达鸡柔嫩艾美耳球虫(***)毒力蛋白MIC3的重组减毒单增李斯特菌(LM)疫苗候选株并评估其对雏鸡的免疫保护效果,本研究在LM-1基础上... 详细信息

本实验室前期构建的基于毒力基因改造的减毒单增李斯特菌(LM-1)被证实是一种较为安全的疫苗载体。为构建表达鸡柔嫩艾美耳球虫(***)毒力蛋白MIC3的重组减毒单增李斯特菌(LM)疫苗候选株并评估其对雏鸡的免疫保护效果,本研究在LM-1基础上采用同源重组的方法将MIC3蛋白关键功能区(aa159~aa252)编码基因(475 bp~756 bp)定点整合至LM-1基因组中,并与LM溶血素O(LLO,其编码基因为Rly)融合表达获得重组LM-1-MIC3菌株并经PCR鉴定;western blot检测LM-1-MIC3中MIC3和LLO的表达;测定细菌体外生长曲线检测LM-1-MIC3的体外生长能力;将野生菌株EGO-e、LM-1、LM-1-MIC3分别感染雏鸡72 h和144 h后,分别剖杀,取各组雏鸡肝脏和脾脏,经菌落计数对雏鸡肝脾载菌量进行测定并评估LM-1-MIC3在雏鸡体内的增殖能力;将野生株EGD-e、LM-1和LM-1-MIC3感染雏鸡并结合临床症状及致死率评估LM-1-MIC3对雏鸡的安全性;将LM-1-MIC3免疫雏鸡并建立***感染模型,研究其对雏鸡抗球虫感染的免疫保护效果。PCR鉴定结果显示正确构建重组菌株LM-1-MIC3;western blot结果显示LM-1-MIC3分泌的融合蛋白LLO-MIC3能够在培养上清液中大量表达;细菌体外培养结果显示LM-1-MIC3体外生长能力与EGD-e和LM-1无显著差异,表明融合LLO的MIC3不会影响LM-1的生长;雏鸡肝脾载菌量测定结果显示,与EGD-e组相比,各时间段LM-1-MIC3组雏鸡肝脾载菌量均极显著降低(P<0.01),感染LM-1-MIC3后雏鸡均存活且无明显临床症状,表明LM-1-MIC3对雏鸡致病力高度减弱,可以作为减毒疫苗载体;免疫保护试验结果显示在攻虫10 d后,LM-1-MIC3免疫组雏鸡的存活率高于LM-1免疫组及PBS对照组,且该组鸡无明显临床症状,剖杀后盲肠病变评分极显著低于LM-1和PBS组(P<0.001),表明LM-1-MIC3对雏鸡有良好的免疫保护效果。本研究构建了重组减毒株LM-1-MIC3,并证实该重组菌对雏鸡具有较好的免疫保护效果,为减毒LM载体疫苗在防控重要动物传染病中的研究与应用奠定了科学基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫减毒单增李斯特菌疫苗免疫预防

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猪流行性腹泻病毒YJH141分离株感染性克隆的构建及鉴定

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中国兽医学报 2023年第9期43卷 1800-1806,1813页

作者：郑伟康张静苗刘雅琦周莹珊杜静宋厚辉董婉玉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为构建猪流行性腹泻病毒(PEDV)YJH141毒株的感染性克隆,本研究将该病毒全长基因组分为8段进行扩增,在病毒全长基因组的11467与11476位核苷酸处引入同义突变,构建SfiⅠ酶切位点作为遗传标记位点。以病毒基因组RNA为模板通过RT-PCR分别扩... 详细信息

为构建猪流行性腹泻病毒(PEDV)YJH141毒株的感染性克隆,本研究将该病毒全长基因组分为8段进行扩增,在病毒全长基因组的11467与11476位核苷酸处引入同义突变,构建SfiⅠ酶切位点作为遗传标记位点。以病毒基因组RNA为模板通过RT-PCR分别扩增各片段,随后将各片段分别构建至T载体中作为亚克隆质粒。各亚克隆质粒经测序鉴定正确后,分段连接至pBAC载体中构建YJH141全长cDNA克隆质粒,通过PCR及测序验证显示全长感染性克隆质粒构建成功,将其命名为pBAC-PEDV-YJH141。将鉴定正确的pBAC-PEDV-YJH141转染至293T细胞,转染后24h收取上清接种于Vero细胞并传代。通过观察细胞病变(CPE)、RT-PCR检测、Western blot检测及测序验证重组病毒的遗传标记位点共同验证重组病毒拯救成功,将其命名为rYJH141。通过空斑试验、间接免疫荧光试验(IFA)和病毒生长曲线探究重组病毒与亲本病毒的生长特性,结果表明YJH141及rYJH141具有相似的生长特性。本研究为探究PEDV复制及致病机制的研究提供了技术平台,同时为疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒感染性克隆拯救

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单增李斯特菌谷氧还蛋白调控氧化应激相关基因转录的研究

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中国预防兽医学报 2023年第5期45卷 459-465,501页

作者：张念琦孙静宋厚辉卫芳芳陈绵绵程昌勇浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

本实验室前期对单增李斯特菌(LM)谷氧还蛋白(Grx)转录组数据进行了分析,在此基础上为了对Grx调控细胞色素氧化酶等应激相关基因(lmo0722、qox A、qox B、gr)的转录及其作用机制研究,本研究将Δgrx与野生株EGD-e经4 mmol/L肼应激后,分别... 详细信息

本实验室前期对单增李斯特菌(LM)谷氧还蛋白(Grx)转录组数据进行了分析,在此基础上为了对Grx调控细胞色素氧化酶等应激相关基因(lmo0722、qox A、qox B、gr)的转录及其作用机制研究,本研究将Δgrx与野生株EGD-e经4 mmol/L肼应激后,分别提取总RNA并反转录为cDNA作为模板,利用RT-q PCR检测Grx调控细胞色素氧化酶等应激相关基因转录情况,结果显示,Δgrx与野生株EGD-e相比,grx基因缺失引起qox B、qox A、gr、lmo0722等基因的转录水平显著上调(分别上调30、29、17和5.6倍)。利用李斯特菌穿梭质粒构建携带调控基因启动子序列的gfp报告质粒,电转化至野生株EGD-e和缺失株Δgrx感受态细胞中,获得含GFP的重组报告菌株。将这两种含GFP的重组报告菌液分别加入4 mmol/L肼后检测荧光强度,结果显示,EGD-e携带的GFP荧光数值显著低于缺失株Δgrx(P<0.01),进一步表明Grx参与调控上述应激相关基因的转录。将扩增的lmo0722、qox A、qox B和gr基因的启动子和Grx、Prf A和GAPDH重组蛋白混合,37℃孵育60 min后进行凝胶迁移试验(EMSA),结果显示,Grx和上述调控基因启动子不直接结合,提示Grx可能通过间接方式参与该调控过程。本研究首次证实LM Grx通过对氧化应激相关基因的转录调控进而在细菌抗氧化应激环境适应过程中发挥重要作用,为系统阐述重要食源性病原菌在环境适应中发挥作用的调控机制提供了科学参考。

关键词：单增李斯特菌谷氧还蛋白氧化应激相关基因调控机制环境适应

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猪圆环病毒2型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立

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浙江农业学报 2022年第3期34卷 457-463页

作者：牟泓晔周小杰杨永春王晓杜周莹珊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江杭州311300 浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法... 详细信息

为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法,并对其进行特异性、灵敏性、可重复性检验。特异性试验结果显示,该方法除了对PCV2和PCV3的检测结果为阳性外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)检测均呈阴性,无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该检测方法同时检测猪圆环病毒2型和3型质粒标准品的最低检测极限均可达到10拷贝·μL^(-1),敏感性较高;该方法组内和组间的变异系数均小于2%,重复性较好。采集浙江省181份猪肉及全血样品,分别利用本文建立的检测方法与标准普通荧光PCR检测方法进行检测,结果显示,PCV2的阳性率为50.83%(92/181),PCV3的阳性率为37.57%(68/181),PCV2和PCV3共感染率为12.15%(22/181);而普通荧光PCR的上述检测结果分别为50.28%(91/181)、36.46%(66/181),共感染率为11.60%(21/181),两种方法对PCV2和PCV3的检测符合率分别可达98.91%和97.06%,对PCV2和PCV3混合感染符合率为95.45%。综上所述,本试验建立的双重荧光定量PCR检测方法可同时对PCV2和PCV3进行快速鉴别检测,可用于病原学检测和流行病学调查等。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型 TaqMan探针双重荧光定量PCR

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饲喂全株青贮玉米对藏香猪肠道微生物的影响

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 530-539页

作者：吴丹宁张亚南黄涛周晓龙汪涵李向臣李洪军文军张琪赵阿勇杨松柏浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室临安311300 阿坝州博文农牧科技有限公司九寨沟623402 九寨沟县科学技术和农业畜牧局九寨沟624603

[目的]探究饲粮中添加全株青贮玉米对藏香猪肠道微生物菌群的影响。[方法]选用日龄和体重((24.26±2.78)kg)相近的藏香猪40头,公母各半,随机分为两组,对照组和试验组,每组20头。对照组饲喂基础饲粮,试验组以30%全株青贮玉米等量替... 详细信息

[目的]探究饲粮中添加全株青贮玉米对藏香猪肠道微生物菌群的影响。[方法]选用日龄和体重((24.26±2.78)kg)相近的藏香猪40头,公母各半,随机分为两组,对照组和试验组,每组20头。对照组饲喂基础饲粮,试验组以30%全株青贮玉米等量替代基础饲粮,饲喂时间为7个月。饲养试验结束后采集粪样共40份,每组20份。利用16S rRNA基因测序技术分析全株青贮玉米对藏香猪肠道微生物组成和结构的影响。[结果]两组共鉴定出19个门、33个纲、67个目、123个科、277个属、524个种。其中厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota)是藏香猪肠道微生物优势门。试验组肠道微生物Shannon指数显著低于对照组(P<0.05)。利用Wilcoxon秩和检验的方法进行两组比较分析发现,与对照组相比,试验组藏香猪肠道微生物中螺旋体门(Spirochaetota)、纤维杆菌门(Fibrobacterota)、密螺旋体属(Treponema)、乳杆菌属(Lactobacillus)和链球菌属(Streptococcus)相对丰度显著升高(P<0.05);放线菌门(Actinobacteriota)、变形菌门(Proteobacteria)和Christensenellaceae_R-7_group相对丰度显著减少(P<0.05)。LEfSe分析结果显示,试验组非解乳糖链球菌(Streptococcus alactolyticus)和嗜淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)丰度显著高于对照组(P<0.05)。[结论]饲喂全株青贮玉米改变了藏香猪肠道微生物菌群的结构,提高了有益菌的相对丰度,可对肠道健康产生积极的影响。

关键词：全株青贮玉米藏香猪肠道微生物

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