检索结果-内蒙古大学图书馆

饲料工业 2024年第7期45卷 93-99页

作者：吴科惠吕曼婷刘锋龚海洲张亚南王攀林李向臣宋丹浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量... 详细信息

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力及碱性磷酸酶(AKP)活力,以确定对细菌细胞膜和细胞壁的影响,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDSPAGE)凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白含量变化;用结晶紫染色法检测对细菌生物膜的抑制作用。结果表明:0.4 mg/mL白术、酸枣仁提取物单独及0.1 mg/mL二者联合作用对金黄色葡萄球菌均具有显著抑菌效果;与对照组相比,白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均使菌液上清液OD_(260)、OD_(280)数值和AKP活力显著增加,菌体LDH活力和总蛋白含量降低,抑制了生物膜的形成。说明白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均可显著抑制金黄色葡萄球菌,且联合作用抑菌效果显著强于各药物单独作用。

关键词：金黄色葡萄球菌白术提取物酸枣仁提取物联合作用抑菌

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白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌的抑菌活性研究

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中国畜牧杂志 2024年第4期60卷 306-311页

作者：吕曼婷吴科惠刘锋张亚南龚海洲王攀林李向臣宋丹浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

药用植物是天然抗生素的潜在来源之一,具有良好的抑菌作用。白术和酸枣仁是富含多种生物活性物质的药用植物,其对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑制作用尚未在体外模型中进行评估。本试验旨在探究白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌的抑菌效... 详细信息

药用植物是天然抗生素的潜在来源之一,具有良好的抑菌作用。白术和酸枣仁是富含多种生物活性物质的药用植物,其对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑制作用尚未在体外模型中进行评估。本试验旨在探究白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌的抑菌效果。采用微量肉汤法测定白术、酸枣仁提取物单独和联合作用对大肠杆菌的亚抑菌浓度并绘制抑菌曲线;用酶标仪微量法测定OD260和OD280数值、碱性磷酸酶(AKP)活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性;用SDS-PAGE凝胶电泳法检测大肠杆菌菌体总蛋白;采用结晶紫染色测定白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌生物膜的作用。结果显示:与对照组相比,0.8 mg/mL白术和酸枣仁提取物单独处理及0.4 mg/mL白术和酸枣仁提取物、联合处理均显著抑制大肠杆菌生长、增加OD260、OD280数值及AKP活力,降低菌体胞内总蛋白含量,并且对生物膜具有破坏作用;此外,与对照组相比,白术提取物单独处理和白术、酸枣仁提取物联合作用显著降低LDH活性。以上结果表明,白术、酸枣仁提取物单独及联合作用对大肠杆菌均有抑制作用,且联合处理抑菌效果较单独处理更为明显。

关键词：白术酸枣仁大肠杆菌抑菌联合处理

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致牛腹泻主要病毒四重PCR检测方法的建立与初步应用

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黑龙江畜牧兽医 2024年第4期 67-75页

作者：李沫萱钟林翰韩言言张晓梅刘伊湄张梦媛王美徐义刚李园浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

为了建立能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和牛细小病毒(BPV)的四重PCR方法,试验首先分别以BVDV 5′-UTR、BCoV Nsp10、BRV VP6和BPV VP2为靶基因设计检测引物,然后通过优化退火温度、Mg^(2+)体积... 详细信息

为了建立能同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和牛细小病毒(BPV)的四重PCR方法,试验首先分别以BVDV 5′-UTR、BCoV Nsp10、BRV VP6和BPV VP2为靶基因设计检测引物,然后通过优化退火温度、Mg^(2+)体积、rTaq酶体积、dNTPs Mix体积和上下游引物体积建立致牛腹泻主要病毒的四重PCR检测方法,并对该方法进行了特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用该方法对临床样本进行检测。结果表明:所建立的四重PCR方法的最优退火温度为55.2℃,最优Mg^(2+)体积为3.0μL,最优rTaq酶体积为0.8μL,最优dNTPs Mix体积为2.5μL,BVDV、BRV、BcoV和BPV对应基因最优的上下游引物分别为1.3μL/1.3μL、0.7μL/0.7μL、1.3μL/1.3μL和0.8μL/0.8μL。该方法仅对靶标病毒检测为阳性,对其他牛源病毒[牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)]和口蹄疫病毒(FMDV)灭活疫苗检测均为阴性;对BVDV、BCoV、BRV和BPV的最低检出限分别为1.0×10^(3)copies/μL、1.0×10^(3)copies/μL、1.0×10^(4)copies/μL和1.0×10^(3)copies/μL;对3个批次样本的各个重复均能扩增出目的基因;可准确检测出牛粪便样本组合中已知的病毒;对临床样本中4种病毒的检出率与商品化病毒核酸检测试剂盒的检测结果具有较好的一致性。说明本研究建立的致牛腹泻主要病毒四重PCR检测方法能同时检测BVDV、BCoV、BRV和BPV,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床样本的检测。

关键词：牛病毒性腹泻病毒牛冠状病毒牛轮状病毒牛细小病毒四重PCR检测方法

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浙东白鹅催乳素选择性剪接体基因克隆和活性初步鉴定

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中国畜牧杂志 2024年第5期60卷 195-205页

作者：周晓龙徐中宝樊金云赵阿勇杨松柏浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

催乳素(Prolactin,PRL)在家禽卵泡发育和就巢行为中扮演着至关重要的调控角色。本研究深入剖析了浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体及其蛋白结构,进而发现了一种新的剪接体PRL-S。利用生物信息学软件,对2种剪接体的mRNA和蛋白序列进行了详... 详细信息

催乳素(Prolactin,PRL)在家禽卵泡发育和就巢行为中扮演着至关重要的调控角色。本研究深入剖析了浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体及其蛋白结构,进而发现了一种新的剪接体PRL-S。利用生物信息学软件,对2种剪接体的mRNA和蛋白序列进行了详尽的对比分析,成功获取了PRL-L和PRL-S的全长CDS序列。在对比中,发现PRL-S缺乏信号肽,且其N端缺失了57个氨基酸,其N端的前19个氨基酸序列与PRL-L存在显著差异。进一步对PRL-S蛋白的二级结构分析,发现其N端的第一个α-螺旋已完全消失。为了深入研究PRL-S的生物学功能,利用原核表达系统成功制备了高纯度的PRL蛋白,并通过pET28a原核表达系统对重组PRL蛋白进行了表达。随后,通过CO-IP和双荧光素酶报告系统等试验,证实了PRL-S重组蛋白确实具有一定的生理活性。本研究不仅为深入理解浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体在就巢行为调控中的作用提供了重要线索,同时也为通过调控这些剪接体来提高浙东白鹅的产蛋量奠定了坚实的理论基础。

关键词：催乳素 PRLR基因剪接体原核表达浙东白鹅

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干酪乳杆菌YG-01株的益生特性及抑菌活性研究

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 829-836页

作者：刘伊湄周佳莹韩言言李园宋厚辉徐义刚王美浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

[目的]评价从奶酪中分离出的干酪乳杆菌YG-01的益生性及抑菌活性,为该菌株在食品动物生产中的应用提供理论参考。[方法]本研究分别检测干酪乳杆菌YG-01株的药物敏感性、肠道定植能力、消化道环境耐受特性、肠道菌群调节作用、抑制肠道... 详细信息

[目的]评价从奶酪中分离出的干酪乳杆菌YG-01的益生性及抑菌活性,为该菌株在食品动物生产中的应用提供理论参考。[方法]本研究分别检测干酪乳杆菌YG-01株的药物敏感性、肠道定植能力、消化道环境耐受特性、肠道菌群调节作用、抑制肠道致病菌活性及促生长作用。[结果]药敏试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01对米诺环素、红霉素、克拉霉素、克林霉素、青霉素等常见抗生素极敏感;利用探针(carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester, cFDA-SE)标记的干酪乳杆菌YG-01灌喂试验兔,口服后第1天,干酪乳杆菌YG-01在兔空肠、回肠和结肠的检出率分别为70.9%、59.3%和66.0%,口服后第11天时仍保持较高定植水平(>35%);干酪乳杆菌YG-01的活菌数在模拟胃液(pH为2.5、3.5、4.5)、模拟肠液、胆酸盐浓度<2 g/L及在9%NaCl溶液中均高于1×105CFU/mL;体外抑菌试验结果显示,干酪乳杆菌YG-01能显著抑制大肠埃希菌O157、小肠结肠炎耶尔森菌、沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌等肠道致病菌生长,而对益生菌罗伊乳杆菌无抑制作用;口服干酪乳杆菌YG-01能极显著提高兔的平均日采食量和平均日增重,还可显著抑制厚壁菌门和疣微菌门细菌增殖。[结论]干酪乳杆菌YG-01株具有良好的益生性,可显著抑制肠道致病菌的增殖,改善食品动物生长性能,为开发基于干酪乳杆菌YG-01株的微生态制剂奠定了基础。

关键词：干酪乳杆菌YG-01株益生特性抑菌活性微生态制剂

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环境微生物降解氟喹诺酮类药物的研究进展

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农业生物技术学报 2024年第6期32卷 1440-1451页

作者：神舒晴梁仪马嘉伟孙永学王美浙江农林大学动物科技学院·动物医学院华南农业大学兽医学院浙江农林大学茶学与茶文化学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室

氟喹诺酮类(fluoroquinolones, FQs)药物是人类医药与畜禽养殖中最常用的抗生素之一，因其用量大，在环境中广泛残留，对人类和动物健康构成潜在威胁。微生物降解是现阶段消除环境中FQs的理想方式，具有高效、绿色、成本低的特点。目前... 详细信息

氟喹诺酮类(fluoroquinolones, FQs)药物是人类医药与畜禽养殖中最常用的抗生素之一，因其用量大，在环境中广泛残留，对人类和动物健康构成潜在威胁。微生物降解是现阶段消除环境中FQs的理想方式，具有高效、绿色、成本低的特点。目前，关于微生物降解FQs的研究主要集中于降解微生物的筛选和降解产物的鉴定上。本文综述了降解FQs的细菌、真菌、微藻以及微生物降解聚生体的功能特征，并总结了常见降解途径与关键酶。本文为缓解FQs的环境残留问题提供理论基础。

关键词：喹诺酮类药物生物降解环境微生物降解规律

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猪抗病育种候选基因研究进展

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农业生物技术学报 2025年第2期33卷 410-426页

作者：杨松柏黄菁段星汪涵周晓龙赵阿勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所

抗病育种是提高猪(Sus scrofa)对病原体感染抵抗力的重要手段，成功应用依赖于对宿主抗病候选基因的深入挖掘和研究。因此，鉴定优质抗病候选基因对抗病育种至关重要。本文总结了由几种重要病毒引发的猪传染性疾病的抗病候选基因研究进... 详细信息

抗病育种是提高猪(Sus scrofa)对病原体感染抵抗力的重要手段，成功应用依赖于对宿主抗病候选基因的深入挖掘和研究。因此，鉴定优质抗病候选基因对抗病育种至关重要。本文总结了由几种重要病毒引发的猪传染性疾病的抗病候选基因研究进展，包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)、经典猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)和猪乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)。本文还讨论了抗病候选基因研究及其在育种实践中应用所面临的挑战，为我国猪抗病育种研究与实践提供参考。

关键词：猪抗病育种候选基因

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白斑综合征病毒(WSSV)灭活制剂对克氏原螯虾抗WSSV的研究

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浙江农林大学学报 2023年第3期40卷 680-684页

作者：裘杰珂赖勇勇许英蕾朱斐浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

【目的】研究经双乙烯亚胺(BEI)灭活的白斑综合征病毒(WSSV)灭活制剂保护克氏原螯虾Procambarus clarkii抗WSSV感染的效果,以期为白斑综合征的防治提供有效的免疫方法。【方法】应用BEI对WSSV和WSSV超声破碎液进行灭活,通过口服和注射... 详细信息

【目的】研究经双乙烯亚胺(BEI)灭活的白斑综合征病毒(WSSV)灭活制剂保护克氏原螯虾Procambarus clarkii抗WSSV感染的效果,以期为白斑综合征的防治提供有效的免疫方法。【方法】应用BEI对WSSV和WSSV超声破碎液进行灭活,通过口服和注射分别对克氏原螯虾进行免疫,再对其进行抗WSSV感染的效果研究。【结果】WSSV在BEI处理24 h可以被完全灭活,通过口服途径用灭活制剂免疫克氏原螯虾7 d后攻毒,克氏原螯虾死亡率显著下降,且口服免疫的效果要好于注射免疫。【结论】经BEI灭活24 h的WSSV灭活制剂对克氏原螯虾是安全的,口服免疫后可以显著降低克氏原螯虾感染白斑综合征病毒的死亡率。图2表3参19。

关键词：白斑综合征病毒双乙烯亚胺(BEI) 灭活克氏原螯虾

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致牛腹泻主要病毒多重实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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动物医学进展 2023年第11期44卷 26-32页

作者：张梦媛钟林翰韩言言刘伊湄李沫萱王美李园徐义刚浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物科技学院·动物医学院浙江农林大学浙江杭州311300

为鉴别检测引起牛病毒性腹泻的4种主要病原牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)和牛细小病毒(Bovine parvovirus,BPV),分别以BCV Nsp10基因、BVDV 5′UTR基因、BRV VP6基因和BPV VP2基因为靶基因设计引物,建立了检测上述4种病毒的实时荧光定量PCR方法。结果显示,方法的特异性强,仅检测靶标病毒的结果为阳性;方法的灵敏度高,对4种病毒BCV、BVDV、BRV和BPV相应质粒的最低检出限分别为7.77×10^(2)、7.11×10^(1)、1.74×10^(2)和2.53×10^(2)copies/μL,且重复性良好,批内和批间变异系数均小于1.0%。由于上述病毒存在交叉感染的情况较多,因此建立多重荧光定量PCR,并利用建立的多重实时荧光定量PCR方法对采集的230份牛腹泻临床样本进行检测,BVDV、BCV、BRV和BPV的阳性率分别为66.96%、3.48%、18.26%和9.57%;且存在多病毒混合感染情况,其中BVDV和BRV混合感染率为10.43%,BVDV和BPV混合感染率为3.48%,BVDV、BCV和BRV混合感染率为1.74%,BVDV、BCV和BPV混合感染率为0.87%,BVDV、BRV和BPV混合感染率为0.87%。研究建立的多重实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性、灵敏性,可为病毒性牛腹泻的快速诊断和流行病学调查提供的技术支持。

关键词：牛病毒性腹泻病毒牛冠状病毒牛轮状病毒牛细小病毒实时荧光定量PCR

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牛病毒性腹泻病毒核心蛋白C激活NLRP3炎症小体诱发细胞焦亡的分子机制研究

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中国预防兽医学报 2023年第11期45卷 1148-1157页

作者：韩言言钟林翰宋京格周佳莹王美李园徐义刚浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

为探究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C激活NLRP3炎症小体诱发细胞焦亡的分子机制。本研究构建BVDV C蛋白真核表达质粒pCMV-C,经PCR和测序鉴定正确后转染牛睾丸原代(BT)细胞,48 h采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测C蛋白的表... 详细信息

为探究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C激活NLRP3炎症小体诱发细胞焦亡的分子机制。本研究构建BVDV C蛋白真核表达质粒pCMV-C,经PCR和测序鉴定正确后转染牛睾丸原代(BT)细胞,48 h采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测C蛋白的表达;采用CCK-8法检测转染pCMV-C(过表达C蛋白)的BT细胞活性。结果显示,该BT细胞出现特异性绿色荧光,且在23 ku处出现特异性条带,阴性对照细胞(转染pCMV的细胞,后同)未见绿色荧光也无该条带,表明C蛋白在BT细胞中获得了表达。细胞活性检测结果显示,过表达C蛋白的BT细胞活性极显著低于阴性对照组细胞(P<0.001)。将荧光素酶报告质粒pNF-κB-Luc、内参质粒pRL-TK和pCMV-C共转染BT细胞,并设置相应的阳性和阴性对照,48 h后采用双荧光素酶报告系统检测各组细胞上清中NF-κB的相对荧光素酶活性。结果显示,共转染3种质粒的BT细胞及阳性对照细胞中NF-κB相对荧光素酶活性极显著高于空白对照组和阴性对照组(共转染pCMV、pNF-κB-Luc和pRL-TK的细胞)(P<0.01)。通过荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)分别检测过表达C蛋白的BT细胞中NLRP3炎症小体组分[Caspase-1前体(pro-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NLRP3及IL-1β的前体(pro-IL-1β)]mRNA的转录水平;采用western blot检测该BT细胞中NLRP3炎症小体组分(pro-Caspas-1、ASC、NLRP3、pro-IL-1β和IL-1β的表达水平并通过western blot分析pro-Caspase-1和pro IL-1β的切割结果。结果显示,过表达C蛋白的BT细胞中NLRP3和ASC mRNA转录水平(P<0.01)、pro-Caspase-1和pro-IL-1βmRNA转录水平(P<0.001)均极显著高于阴性对照组细胞;该BT细胞中NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1P20、ASC、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达水平均明显高于阴性对照组细胞。转录和蛋白表达水平均表明BT细胞发生了炎症反应,且pro-Caspase-1被切割成为有活性的Caspase-1和Caspase-1p20,pro-IL-1β被切割成有活性的IL-1β。将pCMV-C和pCMV-ASC、pCMV-C和pCMV-NLRP3分别共转染293T细胞,48 h后通过激光共聚焦显微镜观察C蛋白与NLRP3和ASC的共定位。结果显示,C蛋白分别与NLRP3和ASC在细胞质中存在共定位。为进一步探究C蛋白激活NLRP3炎症小体对细胞焦亡的影响,通过qRT-PCR和western blot检测过表达C蛋白的BT细胞中死亡调节蛋白GSDMD mRNA的转录、蛋白表达水平及切割情况。通过扫描电镜观察转染pCMV-C 12 h和24 h的BT细胞,并采用间接ELISA检测转染pCMV-C 24 h BT细胞上清中IL-1β的含量。qRT-PCR结果显示,GSDMD mRNA转录水平极显著高于空白对照组和阴性对照组细胞(P<0.001);GSDMD蛋白的表达水平也明显高于两个对照组,且该蛋白被切割成有活性的GSDMD-N和GSDMD-C。电镜观察结果显示,与阴性对照细胞相比,随着C蛋白表达时间的延长,BT细胞膜逐渐破裂,细胞膜均已形成渗透孔,并有细胞内容物的释放,且细胞上清中IL-1β的含量极显著高于阴性对照组细胞(P<0.01)。上述研究表明,C蛋白能够显著引起NLRP3炎症小体活化进而激活pro-Caspase-1形成活化的Caspase-1,后者一方面切割GSDMD,形成有活性的GSDMD-N,并在BT细胞膜形成孔洞,释放内容物,诱导BT细胞发生细胞焦亡,另一方面活化的Caspase-1切割pro-IL-1β,形成有活性的IL-1β,并释放到BT细胞外,致细胞上清中IL-1β含量极显著升高。本研究为进一步阐明BVDV的致病机制以及制定BVD的防控策略提供参考。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 C蛋白 NLRP3炎症小体细胞焦亡

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