检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2024年第5期32卷 1206-1215页

作者：潘晓欣崔明珠罗亚如孙静程昌勇王晶宋厚辉浙江农林大学动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)... 详细信息

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)较野生型李斯特菌的溶血能力和增殖能力均显著降低的同时仍可正常分泌李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)蛋白。为了研究LAM的安全性及其对宫颈癌特异性抗原E7蛋白的递送与免疫效果，本研究在小鼠(Mus musculus)模型上检测了LAM的毒力，并对LAM-E7重组菌株在小鼠宫颈癌免疫治疗和预防中的作用进行了评价。结果显示，LAM对小鼠的毒力是野生型李斯特菌毒力的1/8709，且小鼠脏器中的LAM可在一周内被清除。本研究通过同源重组的方法将E7基因整合到LAM基因组上，PCR鉴定结果显示，LAM-E7菌株构建成功。Western blot结果显示，E7蛋白能够与LLO在重组菌株中融合表达并释放。通过对LAM-E7的体外生长能力和溶血活性分析发现，融合后对LAM的生长能力和溶血能力无显著影响，表明E7蛋白的融合不会影响LAM的安全性。通过腹部皮下注射方式构建小鼠宫颈癌模型发现，LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(161.1202 mm3)显著小于LAM组(349.4625 mm3)和PBS组(512.4149 mm3)(P<0.01)，说明接种LAM-E7对肿瘤生长具有显著的抑制作用。经免疫预防试验发现，LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(3.86 mm3)显著小于LAM组(172.67 mm3)和PBS组(57.38 mm3)(P<0.001)，表明LAM-E7对宫颈癌有一定的预防效果。本研究证实LAM-E7对小鼠宫颈癌具有良好的治疗和预防效果，为减毒李斯特菌作为疫苗载体用于宫颈癌治疗提供了新的思路，也为今后宫颈癌治疗疫苗的研发提供数据支持。

关键词：减毒李斯特菌宫颈癌免疫治疗载体疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪miR-22前体上游序列突变的PK15细胞系构建

引用

浙江农业学报 2022年第9期34卷 1849-1855页

作者：丁兆雪王佳洁沈中浩周晓龙杨松柏金航峰赵阿勇汪涵浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

猪miR-22前体上游序列片段突变可能对miR-22的表达起到重要调控作用,为进一步探究其功能,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过针对猪miR-22前体上游序列片段设计2个靶标sgRNAs(short guide RNAs),构建重组表达载体pX459-sgRNA1和pX459-sgR... 详细信息

猪miR-22前体上游序列片段突变可能对miR-22的表达起到重要调控作用,为进一步探究其功能,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过针对猪miR-22前体上游序列片段设计2个靶标sgRNAs(short guide RNAs),构建重组表达载体pX459-sgRNA1和pX459-sgRNA2;随后将重组质粒转染猪肾上皮细胞系(PK15),经嘌呤霉素初步筛选后,提取基因组DNA,通过PCR及测序鉴定编辑效果;最后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测编辑前后miR-22相对表达量的变化。结果显示,81个阳性克隆中,共产生6种突变类型,突变率达60.49%;qRT-PCR检测显示,编辑后miR-22的表达量显著下调约50%。本研究成功获得了miR-22前体上游序列突变的猪PK15细胞模型,为今后猪miR-22的功能研究提供了新的可应用研究对象。

关键词：猪微小RNA 突变 CRISPR/Cas9技术 PK15细胞系

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

根皮素对过氧化氢诱导的牛脂肪源性干细胞氧化应激的缓解作用

引用

动物营养学报 2022年第1期34卷 600-611页

作者：蒋恩惠刘媛李洁马思佳李向臣蓝贤勇西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100 浙江农林大学动物科技学院•动物医学院杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

本研究旨在探究根皮素(PT)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的牛脂肪源性干细胞(ADSCs)氧化应激和凋亡的影响。试验选取牛脂肪组织,使用Ⅳ型胶原酶分离牛ADSCs,传代培养后利用免疫荧光对牛ADSCs表面标记蛋白CD29、CD44、CD73及Vimentin进行... 详细信息

本研究旨在探究根皮素(PT)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的牛脂肪源性干细胞(ADSCs)氧化应激和凋亡的影响。试验选取牛脂肪组织,使用Ⅳ型胶原酶分离牛ADSCs,传代培养后利用免疫荧光对牛ADSCs表面标记蛋白CD29、CD44、CD73及Vimentin进行鉴定。用不同浓度(0、100、200、500、1000μmol/L)的过氧化氢(H_(2)O_(2))处理牛ADSCs 24 h,通过CCK-8法检测细胞存活率,筛选构建牛ADSCs氧化应激模型的适宜H_(2)O_(2)浓度。利用CCK-8法检测不同浓度(0、10、50、100μmol/L)PT作用4 h后牛ADSCs的存活率,确定PT对牛ADSCs进行预保护的适宜浓度。随后先用不同浓度(0、10、50μmol/L)PT预处理牛ADSCs 4 h,对牛ADSCs进行预保护;再利用500μmol/L H_(2)O_(2)处理牛ADSCs 24 h。采用试剂盒检测牛ADSCs内氧化应激相关指标,包括丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及半胱天冬酶-3(Caspase-3)mRNA相对表达量。结果显示:500μmol/L的H_(2)O_(2)能引起牛ADSCs存活率极显著下降(P<0.01),可以用来诱导其发生氧化应激。10和50μmol/L的PT不会对牛ADSCs的存活率产生显著影响(P>0.05),而100μmol/L的PT会引起牛ADSCs的存活率显著下降(P<0.05),因此后续试验选用10、50μmol/L的PT处理牛ADSCs进行4 h的预保护。免疫荧光检测结果显示,牛ADSCs中CD29、CD44、CD73及Vimentin蛋白表达呈阳性;氧化应激相关指标检测结果显示,与空白组(0μmol/L PT预保护,0μmol/L H_(2)O_(2)处理)相比,500μmol/L H_(2)O_(2)极显著增加牛ADSCs内MDA含量(P<0.01),极显著降低牛ADSCs内SOD活性(P<0.01),说明500μmol/L H_(2)O_(2)处理牛ADSCs引起了氧化应激。与氧化应激组(0μmol/L PT预保护,500μmol/L H_(2)O_(2)处理)相比,10或50μmol/L PT与500μmol/L H_(2)O_(2)共处理可以显著减少牛ADSCs内MDA含量(P<0.05),50μmol/L PT与500μmol/L H_(2)O_(2)共处理可以显著增加牛ADSCs内SOD活性(P<0.05),说明适宜浓度的PT可以缓解H_(2)O_(2)诱导的牛ADSCs氧化应激。ROS染色结果显示,10、50μmol/L PT与500μmol/L H_(2)O_(2)共处理均可极显著降低牛ADSCs内ROS含量(P<0.01),同样说明适宜浓度的PT可以缓解H_(2)O_(2)诱导的牛ADSCs氧化应激。此外,qRT-PCR检测结果显示,与空白组相比,500μmol/L H_(2)O_(2)显著增加牛ADSCs内促凋亡基因Bax和Caspase-3 mRNA相对表达量(P<0.05),极显著减少牛ADSCs内抗凋亡基因Bcl-2 mRNA相对表达量(P<0.01),说明500μmol/L H_(2)O_(2)处理可以引起牛ADSCs凋亡。而10或50μmol/L PT与500μmol/L H_(2)O_(2)共处理时,牛ADSCs内凋亡相关基因mRNA相对表达量与氧化应激组没有显著差异(P>0.05),说明在本试验的条件下,PT不会缓解H_(2)O_(2)诱导的牛ADSCs凋亡。综上所述,适量的PT可以有效缓解H_(2)O_(2)诱导的牛ADSCs氧化应激。

关键词：牛脂肪源性干细胞根皮素氧化应激细胞凋亡

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

单增李斯特菌LPXTG蛋白Lmo0880在感染致病中的作用

引用

微生物学报 2024年第3期64卷 893-906页

作者：林柯辰李豪杰赵秀玲周思廖俊慧王子念金戈旋朱富鑫徐加利孙静宋厚辉邓思敏程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315000

【目的】通过构建单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)LPXTG蛋白Lmo0880的基因缺失菌株和回补菌株,探究Lmo0880在细菌生长、细胞感染和宿主感染等方面发挥的作用。【方法】利用同源重组原理构建lmo0880的基因缺失株及回补株,比较野生株... 详细信息

【目的】通过构建单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)LPXTG蛋白Lmo0880的基因缺失菌株和回补菌株,探究Lmo0880在细菌生长、细胞感染和宿主感染等方面发挥的作用。【方法】利用同源重组原理构建lmo0880的基因缺失株及回补株,比较野生株、缺失株和回补株在生长能力、细胞黏附与侵袭和胞内增殖能力等方面的差异,从而鉴定Lmo0880在单增李斯特菌感染宿主中的作用。【结果】缺失lmo0880基因后,单增李斯特菌在生长能力上无明显变化;对细胞的黏附能力无显著差异,但对细胞侵袭能力、胞内增殖能力、小鼠致病力和小鼠组织定殖能力显著降低。【结论】本研究阐明了单增李斯特菌LPXTG蛋白Lmo0880在细胞侵袭、胞内增殖和组织定殖等方面发挥的重要作用。

关键词：单增李斯特菌 LPXTG蛋白Lmo0880 宿主感染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738介导单增李斯特菌毒力的作用研究

引用

微生物学报 2024年第8期64卷 2671-2683页

作者：沈云勤王建峰应煜翁艳岚郝云黄丽英韩月孙静赵秀玲宋厚辉徐加利程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】以单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738为研究对象,研究其介导细菌毒力发挥的生物学作用。【方法】通过细菌同源重组技术构建lmo0738基因缺失株和回补株,研究它们在生长、溶血、细胞黏附与侵袭以及胞间迁移等方面与野生株的差... 详细信息

【目的】以单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白Lmo0738为研究对象,研究其介导细菌毒力发挥的生物学作用。【方法】通过细菌同源重组技术构建lmo0738基因缺失株和回补株,研究它们在生长、溶血、细胞黏附与侵袭以及胞间迁移等方面与野生株的差异。同时,采用荧光定量PCR和Western blotting方法检测Δlmo0738毒力相关基因的转录水平和毒力相关蛋白的表达情况。【结果】缺失lmo0738后,李斯特菌体外生长能力、溶血能力、黏附和侵袭能力以及胞间迁移能力均显著减弱,溶血素O(listeriolysin O,LLO)蛋白毒力表达水平和关键毒力基因转录水平均显著降低。【结论】本研究证实缺失lmo0738能够降低单增李斯特菌毒力,为完善包括单增李斯特菌在内的重要食源性病原菌磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)糖分解代谢及感染机制奠定了关键基础。

关键词：单增李斯特菌葡萄糖苷转运蛋白毒力

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫的作用机制

引用

微生物学报 2022年第12期62卷 5043-5055页

作者：姚宁鲁重王菲钟孝俊杨梦华浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

【目的】探究双组分系统(two-component system,TCS)EnvZ/OmpR对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)抵抗碱胁迫的作用机制。【方法】用SMART在线工具(https://***/)鉴定出副溶血弧菌基因组中的双组分系统EnvZ/OmpR,再利用同源重组技术将envZ和ompR基因分别进行缺失,构建相应回补株,比较各菌株的生长曲线来检测相应基因对细菌适应高渗透胁迫和碱胁迫的作用,并结合qRT-PCR及荧光检测系统,筛选参与EnvZ/OmpR抵抗碱胁迫的下游靶基因,鉴定该双组分系统对下游基因的调控机制。【结果】在副溶血弧菌基因组中鉴定出vp0155/vp0154编码EnvZ/OmpR双组分系统同源蛋白。ΔompR菌株在高渗透胁迫和碱胁迫中的生长能力明显弱于野生株,而回补株CΔompR、ΔenvZ和CΔenvZ菌株生长能力与野生株类似。在ΔompR菌株中,孔道蛋白基因vp1218、vp0493、vpa1745、vpa0085与vpa1308的转录水平均明显低于野生株,并且发现这些孔道蛋白基因缺失株(Δvpa1308除外)在碱性环境中生长能力均明显弱于野生株。OmpR蛋白可直接抑制调控因子AphB基因转录,而ΔaphB菌株在碱胁迫中的生长能力明显强于野生株。此外,AphB蛋白可直接抑制孔道蛋白基因vp0493和vpa0085转录。【结论】双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫,其中OmpR蛋白可通过抑制调控因子AphB的表达,以促进部分孔道蛋白的表达,从而增强副溶血弧菌抵抗碱胁迫的能力。

关键词：副溶血弧菌双组分系统 EnvZ/OmpR 碱胁迫

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

丁酸钠和吲哚-3-丙酸共处理对Caco-2细胞紧密连接以及炎症因子的影响

引用

畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 5124-5134页

作者：王轲信吴娴龚海洲方巧玉李向臣张亚南浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 浙江大学动物科学学院动物分子营养学教育部重点实验室杭州310058 扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

本研究以人克隆结肠腺癌Caco-2细胞系为模型,旨在探究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)和吲哚-3-丙酸(indole-3-propionic acid,IPA)共处理对Caco-2细胞紧密连接和炎症因子的影响。使用0.4 mmol·L^(-1)NaB和0.1 mmol·L^(-1)IPA分别和共处理Caco-2细胞24 h,检测细胞跨膜电阻(TEER)值、细胞紧密连接蛋白表达、炎症因子的基因表达和细胞上清液中炎症因子的分泌水平。结果发现,与对照组相比,NaB和IPA共处理组均显著提高TEER值(P<0.01),而NaB和IPA单独处理组TEER值无显著变化(P>0.05)。qPCR和蛋白免疫印迹结果表明,与对照组相比,共处理组显著下调了Claudin-2的mRNA相对表达量(P<0.01);与NaB单独处理组相比,共处理组显著上调了Claudin-1的mRNA相对表达量(P<0.05),并且极显著促进了Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白的表达(P<0.001);与IPA单独处理组相比,共处理组显著上调了ZO-1的mRNA相对表达量(P<0.05),并极显著提高了Claudin-1和ZO-1蛋白表达量(P<0.001)。在炎症因子方面,与对照组相比,NaB和IPA共处理组显著下调炎症因子IL-6、IL^(-1)β、IL-8及TNF-α的mRNA相对表达量(P<0.05)。ELISA结果显示,与对照组相比,共处理极显著降低了细胞上清液中IL-6、IL^(-1)β、IL-8及TNF-α的分泌量(P<0.001)。本研究表明,相比于NaB或IPA单独处理,NaB和IPA共处理可增加细胞跨膜电阻值,促进细胞间紧密连接蛋白表达并且降低促炎因子的分泌,降低了肠道通透性。综上,NaB和IPA共处理在增强上皮细胞屏障功能以及降低炎症反应方面具有更强的作用。

关键词：丁酸钠吲哚-3-丙酸紧密连接炎症因子 Caco-2细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

DegU调控单核细胞增生李斯特菌感染宿主细胞及适应高温的机制研究

引用

微生物学报 2023年第12期63卷 4726-4737页

作者：毛敏杰周思廖俊慧李豪杰徐加利金浩博金戈旋朱富鑫孙静宋厚辉邓思敏程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

【目的】本研究旨在探究孤儿调节因子DegU在介导单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)宿主感染和高温环境适应性方面的调控机制。【方法】本研究以单增李斯特菌参考菌株EGD-e、degU基因缺失菌株ΔdegU和回补菌株CΔdegU为研究... 详细信息

【目的】本研究旨在探究孤儿调节因子DegU在介导单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)宿主感染和高温环境适应性方面的调控机制。【方法】本研究以单增李斯特菌参考菌株EGD-e、degU基因缺失菌株ΔdegU和回补菌株CΔdegU为研究材料,通过细胞模型、实时荧光定量聚合酶链式反应和凝胶阻滞试验等方法探究DegU对单增李斯特菌感染宿主细胞和适应高温的调控机制。【结果】研究结果表明:缺失degU后,单增李斯特菌在Caco-2上的黏附和侵袭能力显著降低,在RAW264.7中的增殖能力显著降低,在L929中的空斑形成能力也显著降低;进一步通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测degU基因缺失后引起的单增李斯特菌毒力因子转录水平变化,发现多个重要毒力因子转录水平均显著下调;该试验结果还发现与毒力相关的热应激基因clpE(受CtsR抑制的ATP依赖蛋白水解酶编码基因)转录水平显著升高,而在43℃高温条件下,clpE转录水平显著降低;进一步通过凝胶阻滞试验结果表明DegU能够与clpE的启动子直接结合。【结论】综上所述,degU基因缺失能够降低单增李斯特菌在宿主感染过程中的细胞黏附、侵袭、胞内增殖和胞间迁移能力;DegU能够与clpE启动子结合,直接调控clpE基因的转录水平来适应高温环境。该研究为进一步深入解析单增李斯特菌的宿主感染和环境适应性机制奠定了试验基础。

关键词：单增李斯特菌孤儿调节因子DegU 宿主细胞感染毒力因子高温适应

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

单核细胞增生李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA调控胞间迁移的机制

引用

微生物学报 2024年第11期64卷 4308-4318页

作者：王喆蒋国李静静王建峰许礼冬徐加利付展鸿秦潜宋厚辉程昌勇夏菁浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】实验室前期研究发现单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌,Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白DsbA缺失后,细菌胞间迁移能力增强,本研究旨在深入解析DsbA介导该生物学过程的具体机制。【方法】通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印... 详细信息

【目的】实验室前期研究发现单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌,Listeria monocytogenes)二硫键形成蛋白DsbA缺失后,细菌胞间迁移能力增强,本研究旨在深入解析DsbA介导该生物学过程的具体机制。【方法】通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹(Western blotting)方法比较单增李斯特菌野生株和dsbA缺失株毒力基因的转录和表达水平差异;利用免疫荧光共定位方法观察DsbA缺失后对单增李斯特菌胞间迁移相关毒力因子ActA招募宿主肌动蛋白能力的影响(分析ActA与肌动蛋白共定位在细菌一侧形成“彗星状尾巴”的长短和数量);通过等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry, ITC)研究DsbA与ActA互作情况。【结果】dsbA缺失后,毒力基因转录水平无显著差异,但毒力因子InlA、InlB、PlcA和PlcB的分泌均显著降低,而ActA、溶血素O (listeriolysin O, LLO)分泌量显著升高。缺失株形成的彗星尾巴数量显著高于野生株且平均长度也较野生株增加,说明dsbA缺失导致细菌招募肌动蛋白能力明显增强。ITC试验发现DsbA与ActA结合存在吸热反应,说明二者互作。【结论】本研究证实单增李斯特菌DsbA通过调控毒力蛋白减弱了对肌动蛋白募集,进而影响细菌胞间迁移。研究结果有助于系统理解单增李斯特菌在宿主感染过程中的毒力调控机制,对人兽共患胞内病原菌的污染控制具有重要公共卫生学意义。

关键词：单增李斯特菌二硫键形成蛋白DsbA 胞间迁移肌动蛋白募集

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用CRISPRi技术敲低海分枝杆菌PPE13基因

引用

中国兽医学报 2023年第8期43卷 1670-1676页

作者：王垚垚毕斯琪陈标宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

为研究分枝杆菌PPE13基因在宿主细胞的生物功能,本试验利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeat interference,CRISPRi)构建海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株。CRISPRi主要包括表达失活的Cas9蛋白(dead cas9,dCas9)和特异性单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),通过形成复合体特异性识别相应DNA序列并抑制目的基因的转录。用无水四环素(anhydrotetracycline,ATC)诱导海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株,提取细菌RNA,利用定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术检测dCas9、PPE13基因的表达情况,观察细菌在不同时间D600 nm的变化,分析诱导剂质量浓度和目的基因转录水平之间的关系。使用PPE13敲低菌株感染巨噬细胞并检测胞内菌的存活情况。结果表明,在ATC诱导后,dCas9表达水平显著增高。针对PPE13基因设计的4个sgRNA中,sgRNA1对PPE13基因转录的抑制作用最为明显,为70%~90%。生长曲线结果显示,敲低PPE13菌株在48 h内D600 nm无明显变化。诱导剂的质量浓度越高,对PPE13基因的转录水平的抑制作用越强。敲低PPE13可降低细菌在细胞内的增殖能力。本研究构建了海分枝杆菌PPE13敲低菌株,为深入研究分枝杆菌PPE13感染宿主细胞的致病机制奠定了基础。

关键词： CRISPRi 海分枝杆菌 PPE13 敲低

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：