检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2024年第8期44卷 1793-1799页

作者：王雨欣陈丹娜雷卓凡邹颜璐曹唱唱宋泉江宋厚辉姜胜浙江农林大学动物医学学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江杭州311300 浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地浙江杭州311300 中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

旨在研究壬基酚(nonylphenol,NP)致肝细胞损伤的机制。通过建立NP诱导BRL-3A肝细胞损伤体外模型,评估肝细胞氧化损伤标志物变化、肝细胞Fe^(2+)含量变化,观察肝细胞超微结构,检测铁死亡标志蛋白表达水平。结果显示,NP可引起BRL-3A细胞RO... 详细信息

旨在研究壬基酚(nonylphenol,NP)致肝细胞损伤的机制。通过建立NP诱导BRL-3A肝细胞损伤体外模型,评估肝细胞氧化损伤标志物变化、肝细胞Fe^(2+)含量变化,观察肝细胞超微结构,检测铁死亡标志蛋白表达水平。结果显示,NP可引起BRL-3A细胞ROS、MDA显著升高(P<0.05);GSH含量、GSH-Px活性和SOD活性显著降低(P<0.05);Fe^(2+)含量显著升高(P<0.05),并呈现剂量依赖性;BRL-3A细胞线粒体体积明显变小,线粒体嵴断裂甚至消失,有的线粒体呈现空泡化;铁稳态相关蛋白TFR1和FTH1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结果表明,铁死亡参与NP诱导肝细胞损伤机制,为深入探究NP致病机理提供了参考。

关键词：铁死亡氧化损伤壬基酚 BRL-3A细胞

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丁酸梭菌替代金霉素对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的影响

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微生物学报 2022年第4期62卷 1464-1472页

作者：申文雪刘金松范小燕许英蕾吴艳萍张瑞强浙江农林大学动物科技学院动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司浙江安吉313300

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一种产丁酸等短链脂肪酸的有益菌,添加到饲料中可改善动物的生产性能、提高饲料利用率和机体的抗氧化功能。【目的】本文研究了丁酸梭菌替代金霉素添加到肉鸡日粮中,对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的... 详细信息

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一种产丁酸等短链脂肪酸的有益菌,添加到饲料中可改善动物的生产性能、提高饲料利用率和机体的抗氧化功能。【目的】本文研究了丁酸梭菌替代金霉素添加到肉鸡日粮中,对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的影响。【方法】随机选取1日龄健康艾拔益加(AA)肉仔鸡360只,分为3组,每组8个重复,阴性对照组(CON)饲喂基础日粮;抗生素组(ANT)饲喂添加75 mg/kg金霉素的基础日粮;丁酸梭菌组(CB)饲喂添加500 mg/kg丁酸梭菌(活菌数10^(9) CFU/g)的基础日粮,试验为期42 d。【结果】与CON组相比,CB组肉鸡腿肌重、腿肌肉24 h红度(a)、pH_(45 min)、pH^(24 h)、粗蛋白质和粗脂肪的含量显著提高,腿肌肉总抗氧化能力(total-antioxidant capacity,T-AOC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)活性升高,腿肌肉核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、GPx-1、SOD-1和SOD-2的基因表达水平上调(P<0.05);肉鸡腿肌肉24 h亮度(L)、滴水损失、蒸煮损失和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量下降。ANT组腿肌重和腿肌肉pH^(45 min)及Nrf2、GPx-1和SOD-1的基因表达水平增高(P<0.05),腿肌肉滴水损失和MDA的含量下降。与ANT组相比,CB组腿肌肉粗脂肪含量和CAT活性显著升高(P<0.05),腿肌肉的滴水损失和24 h的L降低。【结论】日粮中添加丁酸梭菌可替代金霉素应用于肉鸡饲料中,激活Nrf2相关基因表达,改善肉鸡肌肉品质和抗氧化功能。

关键词：肉鸡丁酸梭菌腿肌肉品质抗氧化功能

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猪非典型瘟病毒、经典猪瘟病毒、日本乙型脑炎病毒的三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 144-151页

作者：许浩文陈军光马琼琼潘杏明郭美君朱伟群周莹珊董婉玉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁海县动物卫生监督所浙江宁波315600 宁波绿港水产牧业有限公司浙江宁波315600

猪非典型瘟病毒(APPV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)均属于黄病毒科重要成员,从临床症状难以区分且三者的混合感染。为建立一种能快速鉴别检测APPV、CSFV、JEV的三重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本研究根据APPV 5'UT... 详细信息

猪非典型瘟病毒(APPV)、经典猪瘟病毒(CSFV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)均属于黄病毒科重要成员,从临床症状难以区分且三者的混合感染。为建立一种能快速鉴别检测APPV、CSFV、JEV的三重荧光定量PCR(qPCR)检测方法,本研究根据APPV 5'UTR基因、CSFV E2基因和JEV E基因分别设计引物与探针,将公司合成的重组质粒标准品pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-CSFV-E2和pLKO.1-JEV-E按体积比1:1:1混合后均为(1×10^(8)拷贝/μL)作为模板,经反应条件优化,初步建立同时检测这3种病毒的三重q PCR方法。以本研究构建的APPV慢病毒、CSFV慢病毒、JEV慢病毒,以及猪流感病毒、猪Delta冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、诺如病毒的基因组为模板,采用建立的该方法检测,评估其特异性,结果显示,该方法仅能检测到APPV、CSFV、JEV的慢病毒,而其他病原检测结果均为阴性。选取1×10^(1)拷贝/μL~1×10^(8)拷贝/μL的混合质粒标准品和1×10^(1)TU/m L~1×10^(6)TU/m L的三种混合慢病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒pLKO.1-APPV-5'UTR、pLKO.1-CSFV-E2和pLKO.1-JEV-E的检测限均为1×10^(2)拷贝/μL,对3种慢病毒的检测限均为1×10^(2)TU/mL。以1×10~7拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10~3拷贝/μL的质粒标准品混合物作为模板,分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于4.5%。利用本研究建立的三重qPCR和已发表的3种病原的SYBR Green qPCR检测方法对111份临床样品(75份猪肛拭子样品和36份猪组织病料样品)分别检测,结果显示,该三重qPCR方法与已发表的APPV、CSFV、JEV SYBR Green qPCR方法的总符合率分别为99.10%、100%、100%。本研究首次建立的检测APPV、CSFV、JEV的三重TaqMan qPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,为三者临床样品的快速鉴别检测提供了技术支持。

关键词：猪非典型瘟病毒经典猪瘟病毒日本乙型脑炎病毒三重荧光定量PCR

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杭州规模化猪场两种通风模式下育肥舍内环境因子的比较分析

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中国畜牧兽医 2023年第1期50卷 421-428页

作者：董婉玉张聚民卞苏舒周莹珊杜静于浩然仲伟宋厚辉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 杭州市临安区畜牧农机发展中心杭州311300

【目的】研究两种通风模式下杭州地区规模化猪场舍内环境参数及其分布规律,筛选出适合本地区推广的通风模式。【方法】选取杭州地区具有代表性的横向通风和纵向通风两种通风模式下育肥舍为研究对象,开展了早、中、晚3个不同时间点,进风... 详细信息

【目的】研究两种通风模式下杭州地区规模化猪场舍内环境参数及其分布规律,筛选出适合本地区推广的通风模式。【方法】选取杭州地区具有代表性的横向通风和纵向通风两种通风模式下育肥舍为研究对象,开展了早、中、晚3个不同时间点,进风口、舍中央和排风口3个不同位置的热环境参数、有害气体浓度的监测,持续监测1周。分析不同时间点和舍内不同位置对热环境参数(温度、相对湿度、风速)以及有害气体(氨气(NH3)和硫化氢(H2S))浓度的影响,并对两种模式下的热环境参数及有害气体浓度进行比较分析;采用空气沉淀法收集舍内环境中的细菌,并对细菌进行培养及统计分析,比较两种模式下育肥舍中细菌数量差异。【结果】两种通风模式下育肥舍相对湿度均低于国家标准,位置和各时间点对相对湿度影响不大,其中纵向通风舍内的相对湿度显著高于横向通风模式(P<0.05)。两种通风模式舍内平均温度没有显著性差异(P>0.05),舍内中午温度显著高于早、晚(P<0.05),位置对纵向通风舍内温度影响较大。纵向通风舍内平均风速为(1.09±0.42)m/s,符合国家标准且极显著高于横向通风模式(P<0.01),风速受舍内位置的影响,各时间点对其影响不大。两种通风模式下猪舍空气环境中有害气体浓度均在国家标准范围内,但纵向通风舍内NH3和H2S浓度均显著低于横向通风模式(P<0.05),各时间点H2S、NH3浓度差异均不显著(P>0.05),舍内不同位置对有害气体浓度分布影响较大,进风口位置有害气体浓度显著低于舍中央位置和排风口位置(P<0.05)。纵向通风舍内空气中细菌总数符合国家标准且显著低于横向通风模式(P<0.05)。【结论】纵向通风模式下育肥舍内的总体环境优于横向通风模式,在本区域生产应用中,育肥舍的设计倾向于推广纵向通风模式。

关键词：通风模式猪舍热环境有害气体微生物差异分析

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农业强国与新农科背景下动物生理学实验课程教学改革探索——以动物科学专业为例

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生命科学研究 2025年第2期29卷 182-188页

作者：牛冬李思鸿崔艳军王攀林马翔刘璐浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

动物生理学实验是动物科学专业的核心实践课程,通过创新实验设计和先进技术应用,可实现理论与实践的深度融合,从而为培养高素质科技人才、解决行业挑战及推动学科发展提供重要支持。本文阐明了在农业强国和新农科背景下重塑教学体系的... 详细信息

动物生理学实验是动物科学专业的核心实践课程,通过创新实验设计和先进技术应用,可实现理论与实践的深度融合,从而为培养高素质科技人才、解决行业挑战及推动学科发展提供重要支持。本文阐明了在农业强国和新农科背景下重塑教学体系的战略意义,并从动物科学专业的角度,重点探讨了动物生理学实验课程教学模式、考核体系等多方面的改革创新,旨在为培养符合时代需求的创新型新农科人才提供新思路。

关键词：动物生理学实验农业强国新农科教学改革人才培养

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牛病毒性腹泻病毒Npro蛋白与宿主IRF7相互作用机制的研究

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中国预防兽医学报 2024年第12期46卷 1222-1229,1283页

作者：曹唱唱项安琪陈珊王雨欣王静王爽陈斐宋厚辉姜胜宋泉江浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 招远市辛庄畜牧兽医站山东烟台265400

本团队前期研究发现干扰素调节因子7(IRF7)参与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在宿主细胞中的复制。为进一步研究BVDV与IRF7之间的相互作用机制,本实验经PCR扩增BVDV N^(pro)和IRF7基因后,分别构建真核表达质粒pCMV-Flag-IRF7和pCMV-HA-BVDV^(N... 详细信息

本团队前期研究发现干扰素调节因子7(IRF7)参与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)在宿主细胞中的复制。为进一步研究BVDV与IRF7之间的相互作用机制,本实验经PCR扩增BVDV N^(pro)和IRF7基因后,分别构建真核表达质粒pCMV-Flag-IRF7和pCMV-HA-BVDV^(Npro),并分别经PCR和测序鉴定均正确。将pCMV-Flag-IRF7转染牛睾丸(BT)细胞后感染BVDV,24 h后分别采用western blot和RT-qPCR检测BVDV E2、IRF7蛋白的表达和BVDV 5'UTR、IRF7mRNA转录水平。结果显示,与BT细胞相比,过表达IRF7的BT细胞在感染后BVDV E2蛋白的表达水平极显著下调(P<0.001),且BVDV 5'UTR基因的转录水平极显著降低(P<0.001);与未感染BVDV的过表达IRF7组相比,感染BVDV后IRF7蛋白表达水平极显著下调(P<0.001),但IRF7 mRNA的转录水平无明显差异。进一步以MOI 0.1的BVDV感染IRF7过表达的BT细胞24 h后,采用RT-qPCR检测IRF7、IFN-α和IFN-βmRNA的转录水平。结果显示,与感染BVDV的BT细胞组相比,BVDV感染过表达IRF7的BT细胞组IRF7 mRNA的转录水平极显著上调(P<0.001)、IFN-α和IFN-βm RNA的转录水平显著上调(P<0.05),表明IRF7可通过增强下游IFN-I的表达水平抑制BVDV的复制。将pCMV-Flag-IRF7和pCMV-HA-BVDV N^(pro)质粒共转染HEK 293T细胞后,经激光共聚焦试验进一步分析BVDV N^(pro)蛋白与IRF7的相互作用关系,结果显示BVDV N^(pro)蛋白和IRF7蛋白在细胞浆中存在明显的共定位,提示二者可能在细胞浆中存在特异性相互作用。将不同剂量重组质粒pCMV-HA-BVDV N^(pro)分别转染HEK 293T后采用western blot检测,结果显示Npro蛋白可以下调IRF7蛋白的表达,且转染2μg重组质粒组中IRF7蛋白极显著下调(P<0.001)。上述结果首次证实宿主细胞可通过上调IRF7和IFN-I的表达抑制BVDV复制,BVDV的Npro蛋白与IRF7可发生特异性相互作用,并下调IRF7表达水平以拮抗宿主细胞对BVDV的抑制作用。本实验为进一步研究BVDV N^(pro)蛋白的功能奠定基础,也为BVD的防控研究提供参考依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒干扰素干扰素调节因子7 相互作用复制

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翁芩复方对多杀性巴氏杆菌人工感染雏鸭的保护作用

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中国兽医学报 2024年第1期44卷 156-163,191页

作者：仲伟吴瑗王海涛阮胜钢陈琳喆郭美君宋厚辉杜静王晓杜浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 金华职业技术学院农学院浙江金华321007 绍兴咸亨绍鸭育种有限公司浙江绍兴312000

为了探讨翁芩复方(WQ)对雏鸭感染禽多杀性巴氏杆菌(Pm)的预防效果及其作用,本研究采用肉汤二倍稀释法体外测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);灌胃氟苯尼考(FF)及不同剂量WQ预处理雏鸭7 d后口服感染Pm,通过比较日增质量和成活率... 详细信息

为了探讨翁芩复方(WQ)对雏鸭感染禽多杀性巴氏杆菌(Pm)的预防效果及其作用,本研究采用肉汤二倍稀释法体外测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);灌胃氟苯尼考(FF)及不同剂量WQ预处理雏鸭7 d后口服感染Pm,通过比较日增质量和成活率评价WQ对Pm感染雏鸭的预防效果,RT-PCR和细菌计数检测Pm入侵和定植肝脏程度,全血细胞计数(CBC)检测血液中血细胞变化,RT-qPCR检测十二指肠白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素10(IL-10)、白介素4(IL-4)表达。结果表明:WQ对Pm有明显的体外抑菌效果;WQ干预后雏鸭成活率提高,日增质量提高;WQ组肝脏的Pm数量减少;WQ能显著改善血红蛋白浓度(HGB)和红细胞压积(HCT);WQ降低Pm诱导的IL-10和IL-4水平。因此,WQ可有效预防Pm感染,为临床防控该菌大规模流行提供了技术支撑。

关键词：多杀性巴氏杆菌翁芩复方全细胞计数细胞因子

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牛分枝杆菌Mb0869c抑制外源性细胞凋亡的研究

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 729-736页

作者：梁秋韵孟祥苗杨可黄蓓宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为探究与人受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1)存在互作的牛分枝杆菌(***) Mb0869c蛋白对细胞凋亡的作用机制,本研究通过PCR从*** DNA中扩增Mb0869c基因片段后构建重组质粒p MN437-Mb0869c并经PCR和测序鉴定正确后,利用电转化法将重组质粒... 详细信息

为探究与人受体相互作用蛋白激酶1 (RIPK1)存在互作的牛分枝杆菌(***) Mb0869c蛋白对细胞凋亡的作用机制,本研究通过PCR从*** DNA中扩增Mb0869c基因片段后构建重组质粒p MN437-Mb0869c并经PCR和测序鉴定正确后,利用电转化法将重组质粒电转入耻垢分枝杆菌(MS)中,并经western blot鉴定Mb0869c蛋白的表达情况。结果显示,重组菌株中出现约55 ku的特异性条带,表明获得了表达Mb0869c的重组菌MS_Mb0869c。将MS_Mb0869c株和对照菌株MS_Vec分别感染人单核巨噬细胞(THP-1),通过PI和AnnexinⅤ/FITC染色,经流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,结果显示,MS_Mb0869c感染细胞的凋亡率显著低于MS_Vec感染组,这表明Mb0869c可以抑制MS诱导的细胞凋亡。将上述获得的Mb0869c基因片段克隆于p LVX-IRES-Puro-3×Flag中,构建的重组质粒经测序鉴定正确后,转染HEK293T细胞中,利用嘌呤霉素筛选表达Mb0869c的细胞并经western blot鉴定。结果显示,构建的HEK293T细胞中出现约55 ku的特异性条带,且随着细胞传代次数的增加,蛋白表达量未减少,这表明稳定表达Mb0869c的细胞系HEK293T/Mb0869c正确构建。利用不同浓度的肿瘤坏死因子α (TNF-α)和IAP抑制剂(SM164)作用于HEK293T细胞,通过检测细胞内ATP的含量确定细胞凋亡发生情况。结果显示,100 ng/mL TNF-α和25 nmol/L SM164在作用细胞24 h后,诱导细胞凋亡的效果最佳。以该浓度分别作用于HEK293T/Mb0869c和对照组HEK293T/Con细胞24 h后,统计细胞的存活率。结果显示前者的存活率极显著高于后者(P<0.01),表明Mb0869c能够抑制细胞凋亡。通过PCR扩增人RIPK1的3个结构域片段,并分别克隆至p CMV-Myc中构建真核表达重组质粒并经菌落PCR和测序鉴定正确后分别转染HEK293T/Mb0869c细胞,通过免疫共沉淀法(Co-IP)检测RIPK1结构域与Mb0869c的互作。结果显示Mb0869c和RIPK1的激酶结构域(KD)和中间结构域(ID)存在相互作用。上述结果表明,Mb0869c蛋白在***抑制细胞凋亡中具有重要的作用,且这种抑制作用是通过RIPK1实现的。本研究为***蛋白通过RIPK1调节细胞凋亡作用机制的研究提供实验依据。

关键词：牛分枝杆菌细胞凋亡 Mb0869c 受体相互作用蛋白激酶1

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重组耻垢分枝杆菌MS_PE16的构建及其生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2023年第11期45卷 1158-1164页

作者：毕斯琪杨可徐阿慧宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为探究牛分枝杆菌(***)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以***基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝杆菌中构... 详细信息

为探究牛分枝杆菌(***)PE/PPE家族成员PE16蛋白的生物学功能,本研究以***基因组DNA为模板扩增PE16基因片段并克隆至pMN437载体中,构建原核表达质粒pMN437-PE16,经PCR和测序鉴定正确后将该重组质粒及对照质粒PMS2电转入耻垢分枝杆菌中构建重组耻垢分枝杆菌MS_PE16及对照重组耻垢分枝杆菌MS_Vec。经western blot鉴定结果显示,重组耻垢分枝杆菌中PE16在55 ku左右正确表达,而MS_Vec则无该特异性条带。对MS_PE16及MS_Vec进行生长曲线测定,并利用倒置显微镜观察MS_PE16及MS_Vec的菌落形态;将培养至对数生长期的MS_PE16及MS_Vec分别以MOI 10感染人白血病单核细胞(THP-1细胞),感染后0(感染4 h后经庆大霉素处理2 h,此时计为0)、24 h、48 h时采用平板计数法检测胞内菌数量;细菌感染后24 h和48 h时收集各组细胞培养上清,利用ELISA试剂盒检测各组细胞IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-β的表达分泌水平。生长曲线测定结果显示,PE16对分枝杆菌的生长无显著影响;菌落形态观察结果显示,MS_PE16与MS_Vec的菌落形态无明显区别;胞内活菌数量检测结果显示,细菌感染后0和24 h,MS_PE16在THP-1细胞中的数量极显著低于MS_Vec(P<0.01),但在感染后48 h,MS_PE16在THP-1细胞中的存活率极显著高于MS_Vec组在THP-1细胞中的存活率(P<0.001);细胞因子检测结果显示,MS_PE16感染组细胞中IFN-β的分泌水平极显著高于MS_Vec组(P<0.01)。上述结果表明PE16对分枝杆菌的生长和菌落形态均无显著影响,但其可提高分枝杆菌在巨噬细胞内的存活率,且可促进巨噬细胞中IFN-β的分泌水平。本研究初步揭示了分枝杆菌PE16蛋白的功能,为***感染机制的进一步研究提供了实验数据。

关键词：牛分枝杆菌 PE16 胞内菌免疫反应

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两种启动子拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒ZJ-JX-2015株效率的比较研究

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中国预防兽医学报 2023年第5期45卷 529-534页

作者：阚恩晞祝徐航张孝辉董婉玉宋厚辉周兴东王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为比较不同启动子驱动的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强毒株ZJ-JX-2015感染性克隆拯救的各重组病毒的效率,本研究将ZJ-JX-2015株全基因组引入无义突变位点(C-G,形成Bst B I酶切位点)作为后期鉴定标签并分成4段经PCR扩增后,分别克隆至... 详细信息

为比较不同启动子驱动的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)强毒株ZJ-JX-2015感染性克隆拯救的各重组病毒的效率,本研究将ZJ-JX-2015株全基因组引入无义突变位点(C-G,形成Bst B I酶切位点)作为后期鉴定标签并分成4段经PCR扩增后,分别克隆至含CMV启动子的p SMART-BAC载体和含T7启动子的p WSK-29载体中构建感染性克隆质粒p SMART-BAC-CMV-r PRRSV和p WSK-29-T7-r PRRSV,经PCR及测序鉴定正确后将前者分别转染BHK-21和293T细胞;将后者转染BHK-21(T7)细胞。48 h后收集上述各细胞上清液接种Marc-145细胞并连续传10代。通过观察细胞病变(CPE),收集不同代次Marc-145细胞上清液经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定拯救的各重组病毒。将拯救的各重组病毒以MOI 0.1接种Marc-145细胞,通过测定不同时间各病毒上清液的病毒效价(TCID50)绘制生长曲线。结果显示,各细胞上清液[BHK-21、293T细胞及BHK-21细胞(T7)]在Marc-145细胞中传至第2代时均出现CPE;PCR及测序鉴定结果显示,各代次的各组Marc-145细胞上清液均能扩增到544 bp的目的片段,且均含遗传标记Bst B I酶切位点。IFA结果显示,上述各代次各组Marc-145细胞上清液接种的各细胞中均出现绿色荧光,对照Marc-145细胞无绿色荧光。上述结果表明,拯救了3株重组PRRSV:BHK-r JX15、293T-r JX15(分别转染BHK21及293T细胞所得)及T7-r JX15株[转染BHK-21(T7)细胞所得],且各病毒的遗传稳定性较强。测定各病毒TCID50并绘制各病毒生长曲线,结果显示,在各病毒的感染后期(感染后72 h),BHK-r JX15株的病毒效价显著高于亲本病毒(P<0.05),极显著高于T7-r JX15及293T-r JX15株(P<0.01);293T-r JX15的病毒效价极显著高于T7-r JX15株(P<0.01),但这两株病毒的效价又极显著低于亲本病毒(P<0.001)。且4株病毒的生长趋势基本一致。上述结果表明CMV启动子驱动的重组PRRSV(BHK-rJX15和293T-r JX15)复制水平高于T7启动子驱动的重组病毒(T7-rJX15),尤以CMV启动子驱动并通过BHK细胞拯救的重组病毒(BHK-rJX15)复制水平最高。提示,CMV启动子更适用于构建PRRSV的反向遗传操作系统。本研究为构建PRRSV反向遗传操作系统及其蛋白功能研究、新型疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传感染性克隆

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