检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2021年第8期41卷 1512-1518页

作者：李康徐加利孙静宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

旨在通过构建单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx,由lmo2344编码)的基因缺失株以研究其与渗透转运系统(OpuC)相关基因转录的调控关系。LM基因缺失株采用本实验室已建立的同源重组方法构建并筛选获得... 详细信息

旨在通过构建单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx,由lmo2344编码)的基因缺失株以研究其与渗透转运系统(OpuC)相关基因转录的调控关系。LM基因缺失株采用本实验室已建立的同源重组方法构建并筛选获得。利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和绿色荧光蛋白报告系统(FRS)比较LM野生株EGD-e和grx缺失株对渗透转运系统相关基因(opuCA、opuCB、opuCC和opuCD)的转录水平调控。结果表明,与野生株相比,grx基因缺失株中渗透转运相关基因opuCA/B/C/D的转录水平极显著上调(50倍以上)。此外,荧光报告系统也证实grx基因缺失确实导致上述被调控基因的启动子活性增强进而促使该基因转录明显上调。本研究首次表明LM Grx系统参与了渗透转运系统OpuC的转录调控,但该过程涉及的分子机制尚待深入探究。本研究有助于深入理解LM重要的氧化还原系统与其他应激耐受调控相关蛋白之间的调控关系,以及通过参与生物学过程介导细菌体外环境适应及宿主内感染的分子机制,对于防控食源性胞内菌感染和保障人类公共卫生具有重要意义。

关键词：单增李斯特菌谷氧还蛋白(Grx) 渗透转运系统(OpuC) 实时荧光定量PCR 绿色荧光蛋白报告系统

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哺乳动物细胞悬浮培养技术及其应用

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中国细胞生物学学报 2024年第9期46卷 1711-1718页

作者：陈铭杰毕海洋马懿昭章圣华张艳艳张燕茹杨松柏周晓龙乔自林李向臣武永淑浙江农林大学动物科技学院•动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 西北民族大学甘肃省动物细胞技术创新中心兰州730030

悬浮培养技术是将细胞悬浮于培养液中,用于病毒增殖或蛋白表达的技术。该技术具有细胞培养规模大、目的产物表达量高、表达产物质量好和利于产业化等优点。当前,多种细胞已通过选择合适的生物反应器、使用微载体和无血清培养基等方法被... 详细信息

悬浮培养技术是将细胞悬浮于培养液中,用于病毒增殖或蛋白表达的技术。该技术具有细胞培养规模大、目的产物表达量高、表达产物质量好和利于产业化等优点。当前,多种细胞已通过选择合适的生物反应器、使用微载体和无血清培养基等方法被成功悬浮培养,用于病毒灭活疫苗、重组蛋白和细胞治疗等领域。该文阐述了哺乳动物细胞悬浮培养技术以及其在病毒灭活疫苗、重组蛋白和细胞治疗等方面的应用,以期为悬浮培养技术的发展和应用提供一定参考。

关键词：哺乳动物细胞生物反应器微载体无血清培养基生物制品

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可诱导表达结核分枝杆菌ESAT-6的THP-1细胞系的建立

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中国兽医学报 2021年第11期41卷 2148-2154页

作者：唐亦然戴鑫钧胡燕萍毕斯琪孟祥苗杨杨宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

利用Tet-On-3G系统构建可诱导表达ESAT-6的THP-1细胞系,研究结核分枝杆菌毒力蛋白ESAT-6在宿主细胞内的生物学功能.首先,利用聚合酶链反应(PCR)扩增ESAT-6片段和红色荧光蛋白mCherry片段,并与pLVX-TRE3G载体连接,构建pTRE3G-mCherry-ESA... 详细信息

利用Tet-On-3G系统构建可诱导表达ESAT-6的THP-1细胞系,研究结核分枝杆菌毒力蛋白ESAT-6在宿主细胞内的生物学功能.首先,利用聚合酶链反应(PCR)扩增ESAT-6片段和红色荧光蛋白mCherry片段,并与pLVX-TRE3G载体连接,构建pTRE3G-mCherry-ESAT-6.将其与调控质粒pLVX-Tet3G共同转染HEK293T细胞,Dox诱导后检测ESAT-6表达情况.然后,将质粒pTRE3G-mCherry-ESAT-6和pLVX-Tet3G分别与包装质粒psPAX2和pMD2.0G共转染HEK293T细胞,以获得慢病毒颗粒LV-TRE3G-ESAT-6和LVX-Tet3G.接着,将2种病毒感染THP-1细胞,通过Puromycin和G418进行筛选诱导表达ESAT-6的阳性细胞克隆,命名为THP-1/ESAT-6.利用Western blot检测THP-1细胞中ESAT-6的表达情况.结果表明,筛选获得了携带ESAT-6的THP-1诱导表达细胞系,并且ESAT-6表达量与Dox剂量和诱导时间呈正相关.最后,对细胞系中表达的ESAT-6进行生物活性检测,结果表明ESAT-6能够促进细胞的死亡和IL-1β的分泌.该细胞系的建立为深入研究ESAT-6调控细胞信号通路的功能提供了基础.

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 慢病毒包装 Tet-on 诱导表达

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基于核苷三磷酸二磷酸水解酶的马锥虫病间接ELISA抗体检测方法的建立

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农业生物技术学报 2025年第1期33卷 220-227页

作者：曾晴勤李如松李红英王欣乐王莹夏天奇王璞时恒枝张路平郑亚东赵秀玲宋厚辉宁波海关技术中心/宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室四川省江油市动物疫病预防控制中心浙江农林大学动物科技学院&动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室河北医科大学第一医院心脏外科中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)/国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室/世界卫生组织热带病合作中心/传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室

伊氏锥虫病通常称为苏拉(Surra)，是由伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)寄生于马(Equus)、骆驼(Camelus)等动物的血液而引起的一种原虫病。精准诊断是有效防控伊氏锥虫病的关键环节，但是现有诊断技术存在假阴性率高、价格昂贵等缺点。本... 详细信息

伊氏锥虫病通常称为苏拉(Surra)，是由伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)寄生于马(Equus)、骆驼(Camelus)等动物的血液而引起的一种原虫病。精准诊断是有效防控伊氏锥虫病的关键环节，但是现有诊断技术存在假阴性率高、价格昂贵等缺点。本研究在体外重组表达伊氏锥虫的核苷三磷酸二磷酸水解酶(nucleoside triphosphate diphosphohydrolase, TeNTPDase)，通过优化抗原包被浓度及其条件、血清稀释度及其孵育条件、酶标二抗稀释度及其孵育条件等反应参数，建立基于TeNTPDase的马锥虫病间接ELISA抗体检测方法。结果显示，重组TeNTPDase主要以包涵体形式表达，大小约为60 kD；建立的ELISA方法在不同批次包被抗原中的变异系数为3.50%～7.32%，均小于10%，在37℃不同孵育时间内的变异系数为3.89%～14.45%，小于15%，表明所建立的方法具有较好的重复性和稳定性；利用建立的ELISA方法检测马临床血清样品，结果显示，伊氏锥虫病的阳性率为5.83%(7/120)，与商品化ELISA试剂盒的阳性率(3.33%)没有显著差异，符合率为92.5%(111/120)。本研究为马锥虫病诊断和有效防控提供技术支持。

关键词：伊氏锥虫病马核苷三磷酸二磷酸水解酶(NTPDase) ELISA

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锥虫可变表面糖蛋白的表达调控、结构及免疫应答

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畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 4829-4839页

作者：曾晴勤李如松李瑞朱淳殷王欣乐何学东环嘉玲叶子雨王莹张璟夏天奇宋厚辉郑亚东杨永春浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 宁波海关技术中心/宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室宁波315000 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)/福建-台湾动物病原生物学重点实验室福州350002 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025

锥虫是一类由媒介传播的血液原虫,可感染人和动物引起锥虫病,危害巨大。锥虫的体表为单一可变表面糖蛋白(variant surface glycoprotein,VSG)形成的致密“外套”,会在每个虫血症时期进行周期性更换,以逃避宿主免疫杀伤作用。锥虫基因组... 详细信息

锥虫是一类由媒介传播的血液原虫,可感染人和动物引起锥虫病,危害巨大。锥虫的体表为单一可变表面糖蛋白(variant surface glycoprotein,VSG)形成的致密“外套”,会在每个虫血症时期进行周期性更换,以逃避宿主免疫杀伤作用。锥虫基因组含有成百上千个VSG基因和假基因,而虫体可通过精确的表达调控保证在特定感染阶段只表达一种VSG。VSG具有良好的抗原性,这主要由位于其N端结构域(N-terminal domain,NTD)顶叶(top lobe)的免疫显性表位、糖基化修饰和亚结构域及其构象共同决定。VSG特异的IgM反应在清除锥虫感染中发挥重要作用,但IgG介导的免疫裂解作用则十分有限。宿主特异IgG免疫反应变得固化,只会针对每个VSG中有限的免疫显性表位,降低了与不同VSG之间的交叉反应。本文综述了VSG在表达调控、蛋白质结构、免疫原性及免疫应答等方面的最新研究进展,为深入认识锥虫致病机理、研制有效锥虫病防控手段提供理论参考。

关键词：锥虫可变表面糖蛋白表达调控蛋白质结构免疫应答

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淳安县两栖和爬行动物资源调查与多样性分析

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浙江林业科技 2023年第5期43卷 11-18页

作者：黄世国方卫军周卫青王义平鲁庆斌浙江省淳安县林业局浙江淳安311700 浙江农林大学林业与生物技术学院、动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

2022年3—9月,在浙江省淳安县开展了两栖和爬行动物资源调查,并分析其多样性特征。结果表明:(1)两栖和爬行动物共记录到4目24科57属69种,其中两栖动物美洲牛蛙Rana catesbeiana、爬行动物红耳彩龟Trachemys scripta elegans和拟鳄龟Chel... 详细信息

2022年3—9月,在浙江省淳安县开展了两栖和爬行动物资源调查,并分析其多样性特征。结果表明:(1)两栖和爬行动物共记录到4目24科57属69种,其中两栖动物美洲牛蛙Rana catesbeiana、爬行动物红耳彩龟Trachemys scripta elegans和拟鳄龟Chelydra serpentina为外来物种,实际记录本地两栖动物2目9科22属28种1818只,本地爬行动物2目15科35属41种3120只;其中,单型科有12个,单型属有48个,国家二级保护动物有6种,浙江省重点保护野生动物有16种,说明淳安县两栖和爬行动物具有较高的保护价值;15个优势种均为经济价值低的小型动物或者有人工养殖存在的物种,说明淳安县大多数两栖和爬行动物承受着较大的生态环境压力。(2)按动物地理区系类型分,淳安县两栖和爬行动物表现出偏向东洋界的特征,东洋界类型有57种,占淳安县两栖和爬行动物总种数的86.36%,其中,华中华南区物种有37种(占56.06%),南中国型物种有42种(占63.64%)。(3)按生态类群分,淳安县两栖动物以流水型物种为主,共10种,占两栖动物总种数的37.04%,爬行动物以陆栖型和陆栖树栖型物种为主,共24种,占淳安县爬行动物总种数的61.54%;陆栖流水型和水栖型中,两栖动物占比极显著的高于爬行动物(P<0.01);而陆栖型中,爬行动物占比极显著的高于两栖动物(P<0.01)。以上分析说明两栖动物偏喜湿地环境,而爬行动物偏喜陆地环境。因此,淳安县两栖动物面临更大的挑战,对其保护显得更为迫切,建议优先开展湿地生态环境的治理与保护。

关键词：淳安县两栖动物爬行动物生态压力生物多样性湿地环境

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大蒜粉对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫力和肠道形态的影响

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动物营养学报 2021年第7期33卷 3790-3798页

作者：余洋沈媛媛杨彩梅刘金松曾新福冯杰浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室临安311300 浙江万方生物科技有限公司安吉313300 浙江大学动物科学学院杭州310058

本试验旨在研究大蒜粉对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫力和肠道形态的影响。选取480羽体重相近、健康状况良好的1日龄白羽肉鸡,随机分成4组,每组8个重复,每个重复15羽,进行为期42 d的饲养试验。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲... 详细信息

本试验旨在研究大蒜粉对肉鸡生长性能、抗氧化能力、免疫力和肠道形态的影响。选取480羽体重相近、健康状况良好的1日龄白羽肉鸡,随机分成4组,每组8个重复,每个重复15羽,进行为期42 d的饲养试验。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组饲喂基础饲粮+75 mg/kg金霉素,2个大蒜粉组分别饲喂基础饲粮+1000 mg/kg大蒜粉(1000 mg/kg大蒜粉组)、基础饲粮+2000 mg/kg大蒜粉(2000 mg/kg大蒜粉组)。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加1000 mg/kg大蒜粉可显著提高1~42日龄肉鸡的平均日增重(P<0.05),添加1000和2000 mg/kg大蒜粉可显著降低1~21日龄肉鸡的料重比(P<0.05);2)与对照组和抗生素组比,饲粮中添加1000和2000 mg/kg大蒜粉均可显著提高肉鸡血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白Y(IgY)、免疫球蛋白M(IgM)含量(P<0.05),显著降低血清肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)含量(P<0.05),且大蒜粉组血清白细胞介素-1β(IL⁃1β)含量显著低于抗生素组(P<0.05);3)2000 mg/kg大蒜粉组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性显著高于对照组(P<0.05);4)与对照组相比,饲粮中添加1000 mg/kg大蒜粉可显著提高肉鸡21日龄绒毛高度,添加1000和2000 mg/kg大蒜粉均可显著降低42日龄肉鸡隐窝深度(P<0.05),并可显著提高绒毛高度/隐窝深度(V/C)(P<0.05);5)与对照组相比,饲粮中添加1000和2000 mg/kg大蒜粉均可显著降低回肠黏膜Toll样受体2(TLR2)的相对表达量(P<0.05)。综上可知,饲粮中添加大蒜粉能促进肉鸡生长,调节机体免疫力,促进肠道发育,减少炎症反应。本试验中,肉鸡饲粮中大蒜粉的最佳添加量为1000 mg/kg。

关键词：大蒜肉鸡免疫力抗氧化能力肠道形态基因表达

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生物活性玻璃填充对犬拔牙后牙槽窝愈合的影响

生物活性玻璃填充对犬拔牙后牙槽窝愈合的影响

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中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十一次会员代表大会暨第26次学术研讨会

作者：孙宸周彬浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地

本试验旨在研究生物活性玻璃(倍骼生)对于犬拔牙后牙槽窝愈合的影响。试验选取8只成年中华田园犬,体重15-25 kg,将动物分为2组,每组4只,对动物下颌第三前臼齿进行闭合式拔牙,随后对牙槽窝进行填充,分别为不做填充、生物活性玻璃填充(试... 详细信息

本试验旨在研究生物活性玻璃(倍骼生)对于犬拔牙后牙槽窝愈合的影响。试验选取8只成年中华田园犬,体重15-25 kg,将动物分为2组,每组4只,对动物下颌第三前臼齿进行闭合式拔牙,随后对牙槽窝进行填充,分别为不做填充、生物活性玻璃填充(试验组)。试验过程中观察并记录手术后动物的全身炎症反应情况,动物的疼痛表现,动物术部黏膜的炎症反应情况,动物的饮食饮水情况,以及术部X线片监测骨再生情况。结果表明,术后两组动物均不会出现全身炎症反应;术后疼痛反应在两组都较轻微,组间无显著性差异;动物会出现局部黏膜炎症,但会在短时间恢复,黏膜炎症消退速度,生物活性玻璃组慢于不填充组且差异显著(P<0.05);拔牙窝骨组织再生速度生物活性玻璃组效果优于不填充组。本研究说明生物活性玻璃因其填充后安全且对牙槽窝的愈合有积极作用,可以作为犬拔牙后牙槽窝的填充物。

关键词：犬生物活性玻璃牙槽窝安全性有效性

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镉通过Nrf2/HO-1通路诱导猪肾PK-15细胞铁死亡

镉通过Nrf2/HO-1通路诱导猪肾PK-15细胞铁死亡

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中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十一次会员代表大会暨第26次学术研讨会

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院.动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾PK-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl2)对PK-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L Cd... 详细信息

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾PK-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl2)对PK-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L CdCl2处理PK-15细胞3,6和12h,通过比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白的表达水平,荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe2+)含量。最后,用10μmol/L的HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理PK-15细胞6 h,再用10μmol/L CdCl2处理PK-15细胞12 h,通过相差显微镜观察细胞形态,Western blot检测铁死亡相关蛋白表达水平。结果显示,CdCl2处理后细胞活力下降,LDH、MDA和Fe2+水平极显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),FTH1蛋白表达水平极显著下降(P<0.01)。与CdCl2处理组相比,ZnPP可以显著改善CdCl2处理诱导的猪肾PK-15细胞铁死亡。ZnPP预处理组细胞形态明显好转,Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著下降(P<0.01),FTH1蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。结果表明,镉通过Nrf2/HO-1通路引发细胞铁过载和脂质过氧化,诱导猪肾PK-15细胞铁死亡。

关键词：镉 PK-15 HO-1 铁死亡

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壬基酚对小鼠肝肾组织的多毒性效应研究

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畜牧与兽医 2021年第11期53卷 48-53页

作者：杨少青周彬邵春艳宋泉江宋厚辉王晓杜姜胜浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 动物健康互联网检查技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

采用亚慢性毒性试验评估壬基酚(nonylphenol, NP)暴露对小鼠肝肾组织的多毒性效应。选用清洁级ICR小鼠随机分为对照组、低剂量组(LNP,100 mg/kg)、中剂量组(MNP,150 mg/kg)和高剂量组(HNP,200 mg/kg),对小鼠进行NP灌胃染毒,连续30 d,记... 详细信息

采用亚慢性毒性试验评估壬基酚(nonylphenol, NP)暴露对小鼠肝肾组织的多毒性效应。选用清洁级ICR小鼠随机分为对照组、低剂量组(LNP,100 mg/kg)、中剂量组(MNP,150 mg/kg)和高剂量组(HNP,200 mg/kg),对小鼠进行NP灌胃染毒,连续30 d,记录小鼠采食量、精神状态及体重变化,采集小鼠血样、肝脏、肾脏,并对肝肾组织称重。结果显示,随着NP染毒剂量增加,小鼠增重量逐渐降低,增重量与NP染毒剂量呈负相关,小鼠肝肾功能、肝脏和肾脏组织结构均受到不同程度的影响。表明NP暴露对小鼠具有肝肾多毒性效应,可引起小鼠肝脏和肾脏发生不同程度的损伤,影响肝肾功能和组织结构。

关键词：壬基酚肝肾多毒性效应

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