检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2023年第6期43卷 1234-1241页

作者：李卓悦罗通旺郁孝强王晓杜宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

用4μmol/L氯化镉处理大鼠肝脏细胞BRL-3A 12,24,36 h后,通过CCK-8法测定细胞活力,比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测细胞中活性氧(ROS)的含量及线粒体膜电位水平,比色法检测细胞中氧化还原相关指标丙二醛(MDA... 详细信息

用4μmol/L氯化镉处理大鼠肝脏细胞BRL-3A 12,24,36 h后,通过CCK-8法测定细胞活力,比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测细胞中活性氧(ROS)的含量及线粒体膜电位水平,比色法检测细胞中氧化还原相关指标丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量的变化,Western blot检测铁死亡相关蛋白的表达,荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))的含量,电子显微镜观察细胞的超微结构。结果显示,镉(Cd)处理后,BRL-3A细胞活力下降,LDH水平显著升高;ROS、MDA、GSH、GSSG和Fe^(2+)含量极显著增加(P<0.01),FTH1、TfR1、HO-1蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),GPX4蛋白表达水平极显著下降(P<0.01),SLC7A11蛋白水平变化不显著,细胞线粒体萎缩变小、嵴减少或消失。结果表明,Cd处理可致BRL-3A细胞发生脂质过氧化物和Fe^(2+)的蓄积,GPX4水平下降,从而介导细胞发生铁死亡。

关键词：镉大鼠 BRL-3A 铁死亡亚铁离子

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硫氧还蛋白Lmo1903介导单增李斯特菌抵抗氧化应激的生物学功能研究

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微生物学报 2023年第3期63卷 1269-1282页

作者：陈雨吉吕晓玲韩月罗平曹启予陈歆丹吴宇康徐加利管迟瑜宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】以单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)硫氧还蛋白Lmo1903为研究对象,研究其在细菌环境适应过程中的抗氧化应激生物学作用。【方法】使用生物信息学方法分析Lmo1903的进化关系和关键活性位点,使用酶切连接的方法构建Lmo190... 详细信息

【目的】以单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)硫氧还蛋白Lmo1903为研究对象,研究其在细菌环境适应过程中的抗氧化应激生物学作用。【方法】使用生物信息学方法分析Lmo1903的进化关系和关键活性位点,使用酶切连接的方法构建Lmo1903蛋白表达载体,获得纯化的重组蛋白,以胰岛素为底物分析其氧化还原酶学活性;同时制备鼠源多克隆抗体,分析其在细胞内的定位;采用核苷酸定点突变技术构建CX1X2C基序中的半胱氨酸点突变蛋白,分析关键位点半胱氨酸对Lmo1903酶活的影响;采用同源重组原理构建lmo1903基因缺失株Δlmo1903和回补株CΔlmo1903,研究lmo1903在单增李斯特菌生长、运动和抗氧化应激方面发挥的功能。【结果】生物信息学分析显示,Lmo1903含有CX1X2C基序,与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的TrxA的亲缘关系较近,属于硫氧还蛋白家族成员,主要定位在细菌细胞质中,具有较强的还原酶学活性,突变CX1X2C基序中的半胱氨酸残基会显著降低Lmo1903的还原酶活能力。缺失lmo1903不影响单增李斯特菌的生长能力,但显著减弱了细菌在铜离子胁迫环境中的氧化应激耐受能力,且影响鞭毛合成相关因子的转录水平和细菌的运动能力。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌硫氧还蛋白Lmo1903具有还原酶学活性,介导细菌运动和对氧化环境的适应。

关键词：单增李斯特菌硫氧还蛋白细胞定位氧化应激运动性

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镉胁迫下α-硫辛酸对大鼠肾细胞MAPK信号通路的影响

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 1051-1058页

作者：罗通旺李卓悦王晓杜邵春艳宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了探究α-硫辛酸(α-LA)在镉(Cd)暴露的情况下对大鼠肾细胞MAPK通路的影响,以SD大鼠、大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E)和大鼠原代肾小管上皮细胞(rPT)为试验模型,设置对照组、Cd暴露组、Cd+α-LA组以及α-LA组。采用透射电镜观察细胞... 详细信息

为了探究α-硫辛酸(α-LA)在镉(Cd)暴露的情况下对大鼠肾细胞MAPK通路的影响,以SD大鼠、大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E)和大鼠原代肾小管上皮细胞(rPT)为试验模型,设置对照组、Cd暴露组、Cd+α-LA组以及α-LA组。采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,用光学显微镜观察肾脏组织病理学的变化,通过Western blot检测MAPK信号通路相关蛋白的相对表达水平。结果显示,与对照组相比,Cd暴露组多数细胞出现细胞核固缩、变形、染色质边聚甚至溶解,细胞内出现大量空泡;HE染色可见细胞变性、细胞管型、管壁变薄甚至破裂的现象;ERK1/2、JNK1/2和p38的磷酸化水平显著或极显著升高。与Cd暴露组相比,Cd+α-LA组细胞核皱缩轻微,染色质分布相对均匀;肾小球毛细血管充血和肾小管变性明显改善;ERK1/2、JNK1/2和p38的磷酸化水平显著或极显著降低。α-LA组与对照组相比无明显差异。结果表明,Cd暴露可诱导大鼠肾细胞损伤并激活MAPK信号通路,而α-LA通过抑制MAPK信号通路的活化缓解Cd诱导的细胞损伤。

关键词：镉 α-硫辛酸 MAPK 肾小管上皮细胞

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2021年浙江省部分地区猪圆环病毒2型及3型的遗传变异分析

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中国预防兽医学报 2023年第6期45卷 643-648页

作者：于浩然甘诗琪刘雅琦董婉玉杜静周兴东周莹珊王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了解2021年中国浙江省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,本研究采用PCR技术对不同地区来源的702份病料样品检测。选取10个PCV2阳性样品进行全基因序列扩增和同源性及遗传演化分析。同时对已测序的26个PC... 详细信息

为了解2021年中国浙江省各地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的遗传变异情况,本研究采用PCR技术对不同地区来源的702份病料样品检测。选取10个PCV2阳性样品进行全基因序列扩增和同源性及遗传演化分析。同时对已测序的26个PCV2 ORF2基因和24个PCV3 ORF2基因分别进行同源性分析,以及对Cap蛋白氨基酸序列进行比对分析。结果显示,病料样品中PCV2的总阳性率为32.8%(230/702),PCV3的总阳性率为15.0%(105/702)。其中PCV2在血清样品中的检出率最高,而PCV3在粪便样品中的检出率较高。PCV2和PCV3混合感染血清阳性率为6.1%(33/539),且仅在血清样品中有混合感染。测序筛选后共获得6个PCV2全基因序列,其中5个全基因序列为1767 bp,1个为1708 bp。PCV2全基因序列与24个国内外PCV2参考株全基因序列相比,同源性为94.1%~98.9%。通过全基因遗传进化树显示,6个PCV2全基因有5个PCV2d亚型和1个PCV2b亚型。ORF2基因序列的同源性结果显示,PCV2与PCV2疫苗株的同源性为90.2%~95.3%;PCV3与PCV3参考株的同源性为99.2%~99.4%,与PCV2疫苗株的同源性仅为32%,可能影响PCV2疫苗的保护效力。通过ORF2编码的Cap蛋白氨基酸序列比对结果显示,本研究中的PCV2 Cap蛋白氨基酸序列有20处变异,其中R^(59)K、K^(63)R、A^(68)N、R^(89)L、S^(90)T、S^(121)T、T^(134)N、S^(169)R、E^(210)D的变异揭示了该地区PCV2b亚型正逐渐向PCV2d亚型转变。上述结果表明,浙江省部分地区的PCV2d亚型已成为主要的流行基因型,且PCV3与PCV2疫苗株同源性较低。本研究结果丰富了浙江省PCV的分子流行病学资料,为相应疫病的防控提供一定的参考依据。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型 ORF2基因序列分析

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丁酸梭菌替代金霉素对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的影响

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微生物学报 2022年第4期62卷 1464-1472页

作者：申文雪刘金松范小燕许英蕾吴艳萍张瑞强浙江农林大学动物科技学院动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 浙江惠嘉生物科技股份有限公司浙江安吉313300

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一种产丁酸等短链脂肪酸的有益菌,添加到饲料中可改善动物的生产性能、提高饲料利用率和机体的抗氧化功能。【目的】本文研究了丁酸梭菌替代金霉素添加到肉鸡日粮中,对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的... 详细信息

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是一种产丁酸等短链脂肪酸的有益菌,添加到饲料中可改善动物的生产性能、提高饲料利用率和机体的抗氧化功能。【目的】本文研究了丁酸梭菌替代金霉素添加到肉鸡日粮中,对肉鸡腿肌肉品质和抗氧化功能的影响。【方法】随机选取1日龄健康艾拔益加(AA)肉仔鸡360只,分为3组,每组8个重复,阴性对照组(CON)饲喂基础日粮;抗生素组(ANT)饲喂添加75 mg/kg金霉素的基础日粮;丁酸梭菌组(CB)饲喂添加500 mg/kg丁酸梭菌(活菌数10^(9) CFU/g)的基础日粮,试验为期42 d。【结果】与CON组相比,CB组肉鸡腿肌重、腿肌肉24 h红度(a)、pH_(45 min)、pH^(24 h)、粗蛋白质和粗脂肪的含量显著提高,腿肌肉总抗氧化能力(total-antioxidant capacity,T-AOC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)活性升高,腿肌肉核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、GPx-1、SOD-1和SOD-2的基因表达水平上调(P<0.05);肉鸡腿肌肉24 h亮度(L)、滴水损失、蒸煮损失和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量下降。ANT组腿肌重和腿肌肉pH^(45 min)及Nrf2、GPx-1和SOD-1的基因表达水平增高(P<0.05),腿肌肉滴水损失和MDA的含量下降。与ANT组相比,CB组腿肌肉粗脂肪含量和CAT活性显著升高(P<0.05),腿肌肉的滴水损失和24 h的L降低。【结论】日粮中添加丁酸梭菌可替代金霉素应用于肉鸡饲料中,激活Nrf2相关基因表达,改善肉鸡肌肉品质和抗氧化功能。

关键词：肉鸡丁酸梭菌腿肌肉品质抗氧化功能

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杭州规模化猪场两种通风模式下育肥舍内环境因子的比较分析

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中国畜牧兽医 2023年第1期50卷 421-428页

作者：董婉玉张聚民卞苏舒周莹珊杜静于浩然仲伟宋厚辉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 杭州市临安区畜牧农机发展中心杭州311300

【目的】研究两种通风模式下杭州地区规模化猪场舍内环境参数及其分布规律,筛选出适合本地区推广的通风模式。【方法】选取杭州地区具有代表性的横向通风和纵向通风两种通风模式下育肥舍为研究对象,开展了早、中、晚3个不同时间点,进风... 详细信息

【目的】研究两种通风模式下杭州地区规模化猪场舍内环境参数及其分布规律,筛选出适合本地区推广的通风模式。【方法】选取杭州地区具有代表性的横向通风和纵向通风两种通风模式下育肥舍为研究对象,开展了早、中、晚3个不同时间点,进风口、舍中央和排风口3个不同位置的热环境参数、有害气体浓度的监测,持续监测1周。分析不同时间点和舍内不同位置对热环境参数(温度、相对湿度、风速)以及有害气体(氨气(NH3)和硫化氢(H2S))浓度的影响,并对两种模式下的热环境参数及有害气体浓度进行比较分析;采用空气沉淀法收集舍内环境中的细菌,并对细菌进行培养及统计分析,比较两种模式下育肥舍中细菌数量差异。【结果】两种通风模式下育肥舍相对湿度均低于国家标准,位置和各时间点对相对湿度影响不大,其中纵向通风舍内的相对湿度显著高于横向通风模式(P<0.05)。两种通风模式舍内平均温度没有显著性差异(P>0.05),舍内中午温度显著高于早、晚(P<0.05),位置对纵向通风舍内温度影响较大。纵向通风舍内平均风速为(1.09±0.42)m/s,符合国家标准且极显著高于横向通风模式(P<0.01),风速受舍内位置的影响,各时间点对其影响不大。两种通风模式下猪舍空气环境中有害气体浓度均在国家标准范围内,但纵向通风舍内NH3和H2S浓度均显著低于横向通风模式(P<0.05),各时间点H2S、NH3浓度差异均不显著(P>0.05),舍内不同位置对有害气体浓度分布影响较大,进风口位置有害气体浓度显著低于舍中央位置和排风口位置(P<0.05)。纵向通风舍内空气中细菌总数符合国家标准且显著低于横向通风模式(P<0.05)。【结论】纵向通风模式下育肥舍内的总体环境优于横向通风模式,在本区域生产应用中,育肥舍的设计倾向于推广纵向通风模式。

关键词：通风模式猪舍热环境有害气体微生物差异分析

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非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 750-754,768页

作者：程茵费定润于莹刘怡炜章先王晓杜孙静宋厚辉吴芹程昌勇浙江农林大学动物科技学院动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 浙江大学医学院浙江杭州310030

p54蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)进入宿主细胞的重要结构蛋白,参与病毒的早期感染,具有较强的免疫原性,常作为研制非洲猪瘟(ASF)疫苗和检测方法的重要靶点。为制备ASFV p54蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过构建重组质粒p ET28a-p54并经原... 详细信息

p54蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)进入宿主细胞的重要结构蛋白,参与病毒的早期感染,具有较强的免疫原性,常作为研制非洲猪瘟(ASF)疫苗和检测方法的重要靶点。为制备ASFV p54蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过构建重组质粒p ET28a-p54并经原核表达重组p54蛋白(rp54),采用镍柱亲和层析方法对rp54纯化后经SDS-PAGE鉴定。结果显示,rp54主要在沉淀中出现17 ku的目的条带,经纯化效果较好。采用纯化的rp54免疫BALB/c小鼠,三免后采用间接ELISA方法测定小鼠血清的抗体效价。选择抗体效价最高的小鼠冲击免疫,3 d后取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA筛选稳定分泌p54蛋白MAb的杂交瘤细胞。结果显示,三免后小鼠血清抗体效价最高达1∶256 000,表明该蛋白的免疫原性很好。间接ELISA筛选结果显示,获得了3株稳定分泌p54蛋白MAb的杂交瘤细胞株。分别采用western blot、间接免疫荧光试验(IFA)检测该3株MAb的反应原性,采用间接ELISA检测3株MAb的特异性。Western blot结果显示,3株MAb均在17 ku处出现特异性条带;IFA结果显示,以3株MAb作为一抗的表达p54蛋白的HEK293T细胞出现绿色荧光,而未转染质粒的阴性对照细胞无绿色荧光;间接ELISA结果显示,3株MAb仅与p54蛋白反应,而与其它猪源病毒蛋白均无反应。上述结果表明,本研究获得具有良好免疫原性的rp54,并制备了3株p54 MAb,且3株MAb的反应原性及特异性均较强,本研究为开发ASFV的检测技术和开展该病毒的生物学研究提供了生物材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54蛋白单克隆抗体检测技术

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农业生物技术学报 2023年第11期31卷 2367-2376页

作者：刘晨宋亚雯蒋昕孙静江玲丽宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室宁波卫生职业技术学院

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)可诱导机体产生强烈的免疫反应，作为递呈载体在各种癌症和传染病免疫治疗中的研究越来越多，是一种生物安全性高的肿瘤免疫治疗疫苗研发载体。本研究在实验室前期减毒单增李斯特菌LM基础上，构建... 详细信息

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)可诱导机体产生强烈的免疫反应，作为递呈载体在各种癌症和传染病免疫治疗中的研究越来越多，是一种生物安全性高的肿瘤免疫治疗疫苗研发载体。本研究在实验室前期减毒单增李斯特菌LM基础上，构建与李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)融合表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)抗原Ag85B (Antigen 85B)和ESAT6 (6 kD early secreted antigen target)的肿瘤疫苗菌株LM-Ag85B和LM-ESAT6；通过Western blot确定抗原能与LLO融合表达和正常分泌；利用细菌感染生物学方法研究LM-Ag85B和LM-ESAT6的体外生长能力及溶血活性；利用小鼠(Mus musculus)宫颈癌模型评价LM-Ag85B和LM-ESAT6与LM-E7 (表达宫颈癌相关抗原E7)联合应用在小鼠宫颈癌模型中的治疗效果。结果显示，LM-Ag85B和LM-ESAT6能分别正常表达分泌携带的Ag85B和ESAT6抗原；LM-Ag85B、LM-ESAT6在体外生长能力与野生型无显著差异，溶血活性低于野生型；在小鼠宫颈癌治疗模型中，LM-Ag85B、LM-ESAT6和LM-E7联合应用试验组较对照组显著抑制肿瘤生长，治疗效果良好。本研究证实了结核分枝杆菌抗原能够增强抗肿瘤效果，为推动基于减毒细菌为载体的肿瘤免疫治疗研究提供了科学依据。

关键词：减毒单增李斯特菌结核分枝杆菌相关抗原宫颈癌疫苗载体

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月桂酸对肉鸡屠宰性能、肌肉品质和抗氧化功能的影响

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畜牧兽医学报 2023年第11期54卷 4691-4701页

作者：徐自强刘金松孙耀威史永浩吴艳萍张瑞强浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 惠嘉绿色动物保健品重点农业企业研究院、浙江惠嘉生物科技股份有限公司安吉313300

旨在研究月桂酸(lauric acid,LA)对肉鸡屠宰性能、肌肉品质、常规营养成分和抗氧化性能的调控作用。试验选用480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂基础饲粮(对照组)和在基础饲粮中分别添加75 mg·kg... 详细信息

旨在研究月桂酸(lauric acid,LA)对肉鸡屠宰性能、肌肉品质、常规营养成分和抗氧化性能的调控作用。试验选用480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂基础饲粮(对照组)和在基础饲粮中分别添加75 mg·kg^(-1)金霉素(抗生素组)、500 mg·kg^(-1)月桂酸(月桂酸低剂量组,LA500)、1000 mg·kg^(-1)月桂酸(月桂酸高剂量组,LA1000)的试验饲粮,试验期为42 d。结果显示:与对照组相比,饲粮补充500 mg·kg^(-1)月桂酸显著增加了肉鸡胸肌24 h的红度(a^(*))值、黄度(b^(*))值、pH和有机物、粗脂肪、粗蛋白含量(P<0.05),显著增加胸肌总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)(P<0.05)并显著上调了SOD1、CAT、GPX1、Nrf2、HO-1基因的表达水平(P<0.05),降低了肉鸡胸肌24 h的亮度(L^(*))值、水分含量、48 h的滴水损失和蒸煮损失(P<0.05);饲粮添加1000 mg·kg^(-1)月桂酸显著增加了肉鸡皮下脂肪厚、屠宰率、肌间脂肪宽和全净膛率(P<0.05),显著提高了肉鸡胸肌24 h的pH、a^(*)、b^(*)值和粗脂肪含量(P<0.05),显著增加了T-AOC、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)的活性(P<0.05),上调了SOD1、SOD2、CAT、GPX1、Nrf2、HO-1的基因表达量(P<0.05),显著降低肉鸡胸肌48 h的滴水损失和蒸煮损失并减少24 h的L^(*)值和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量(P<0.05)。与抗生素组相比,饲粮添加500 mg·kg^(-1)月桂酸提高了肉鸡胸肌24 h的a^(*)、b^(*)值(P<0.05),降低了肉鸡胸肌24 h的L^(*)值(P<0.05);饲粮添加1000 mg·kg^(-1)月桂酸显著提高了肉鸡皮下脂肪厚(P<0.05),增加了肉鸡胸肌24 h的pH、a^(*)、b^(*)值和T-AOC(P<0.05),降低了肉鸡胸肌24 h的L^(*)值(P<0.05)。综上所述,月桂酸能够改善肉鸡屠宰性能、肌肉品质和抗氧化能力,激活Nrf 2信号通路相关基因的表达,且与抗生素相比,饲粮添加1000 mg·kg^(-1)月桂酸效果更佳。

关键词：月桂酸肉鸡屠宰性能肉品质抗氧化功能

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单增李斯特菌内化素家族蛋白Lmo1136生物学特性的研究

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中国预防兽医学报 2024年第10期46卷 997-1004页

作者：叶泽安杨立锋丁强宋厚辉孙静程昌勇陈绵绵浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

单增李斯特菌内化素家族蛋白通常在该菌感染及致病中起重要作用,为探究其内化素家族蛋白Lmo1136在李斯特菌感染致病机制中的作用,本研究以单增李斯特菌EGD-e基因组为模板,经PCR扩增lmo1136基因的上下游基因片段,经重叠延伸PCR将同源臂... 详细信息

单增李斯特菌内化素家族蛋白通常在该菌感染及致病中起重要作用,为探究其内化素家族蛋白Lmo1136在李斯特菌感染致病机制中的作用,本研究以单增李斯特菌EGD-e基因组为模板,经PCR扩增lmo1136基因的上下游基因片段,经重叠延伸PCR将同源臂连接后与温敏型穿梭质粒pKSV7连接构建重组质粒,利用同源重组技术使重组质粒与EGD-e同源片段发生交换,得到缺失株Δlmo1136并经PCR和测序鉴定;以单增李斯特菌EGD-e基因组为模板,PCR扩增lmo1136基因与启动子片段,并与整合型穿梭质粒pIMK2连接后电转化Δlmo1136感受态细胞,得到回补株CΔlmo1136并经PCR和测序鉴定。将单增李斯特菌EGD-e、Δlmo1136和CΔlmo1136分别接种96孔板,37℃培养12h后测定各菌株OD600nm值,并根据OD600nm值绘制各菌株的生长曲线。结果显示各菌株生长速度无显著差异(P>0.05)。将各菌株以感染复数(MOI)10感染人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)后30min和90min时收集细胞裂解物,接种于BHI培养基进行单菌落计数,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136的黏附性无显著差异(P>0.05),侵袭力显著下降(P<0.05),而CΔlmo1136的黏附性与侵袭力均无显著差异(P>0.05)。将各菌株均以MOI0.2感染小鼠巨噬细胞(RAW246.7细胞)后2h、5h和8h时收集细胞裂解物接种于BHI培养基,单菌落计数,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136和CΔlmo1136菌落数均无显著差异(P>0.05)。将各菌株均以1×10^(6) cfu/只经腹腔注射小鼠,48 h后取小鼠脾脏与肝脏研磨,接种于BHI培养基进行单菌落计数,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136的菌落数显著下降(P<0.05),CΔlmo1136的菌落数无显著差异(P>0.05)。将各菌株均以1×10^(6)cfu/只经腹腔注射小鼠,每隔24h记录小鼠存活情况,结果显示,与EGD-e相比,Δlmo1136组小鼠存活率显著升高(P<0.05),CΔlmo1136组小鼠的存活率无显著差异(P>0.05)。上述结果首次表明lmo1136缺失后,单增李斯特菌的生长能力、细胞黏附性和胞内增殖能力均无显著变化,但对细胞侵袭力、小鼠脏器定植能力显著降低,小鼠存活率显著升高,阐明了内化素家族蛋白Lmo1136在单增李斯特菌细胞侵袭、脏器定植和对小鼠致病机制中发挥重要作用,本研究上述结果为进一步解析Lmo1136介导细菌的感染机制奠定了重要基础。

关键词：单增李斯特菌内化素家族蛋白侵袭力宿主感染

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