检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2007年第5期34卷 546-550页

作者：张艳君朱志峰陆融徐琼石琳熙简序刘俊燕姚智天津医科大学免疫学教研室天津医科大学生物化学教研室天津300070

目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,观察了新型三肽化合物酪丝缬肽作用后RPL13A、UBC、EIF4A、B2M、GAPDH和ACTB共6个看家基因m... 详细信息

目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,观察了新型三肽化合物酪丝缬肽作用后RPL13A、UBC、EIF4A、B2M、GAPDH和ACTB共6个看家基因mRNA水平的表达情况.经过geNorm程序统计学分析处理,结果表明,这6个看家基因的表达存在差异,确定了RPL13A、UBC2个看家基因用于校正目标基因的表达量.基因表达转录分析中内参基因选择的必要性在实验中得以证明,更重要的是为各种实验因素影响下(尤其是新物质作用下)内参基因的选择介绍和提供了一种行之有效的方法.

关键词：内参基因 geNorm程序基因表达实时定量PCR

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基于亲和素-生物素双夹心体系测定外源性蛋白血清动态浓度的非抗体依赖新方法

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生物化学与生物物理进展 2013年第3期40卷 266-272页

作者：余颖欣刘艳君焦德龙文李艳徐江平富宁南方医科大学免疫学教研室广州510515 南方医科大学药学院广州510515

建立一种非抗体依赖的检测外源性蛋白多肽分子代谢动力学血清浓度及动态变化的新方法.链亲和素为捕获分子,加入待测生物素标记蛋白或合成肽,辣根过氧化物酶标记链亲和素为检测分子,构成链亲和素-生物素标记大分子-酶链亲和素的双夹心体... 详细信息

建立一种非抗体依赖的检测外源性蛋白多肽分子代谢动力学血清浓度及动态变化的新方法.链亲和素为捕获分子,加入待测生物素标记蛋白或合成肽,辣根过氧化物酶标记链亲和素为检测分子,构成链亲和素-生物素标记大分子-酶链亲和素的双夹心体系,并进行特异性、敏感性、准确性及稳定性评价.本检测体系灵敏度高,可达0.3125μg/L,且可通过改变亲和素包被浓度调整检出敏感度与检测范围.准确性回收率为97.82%～107.92%,批内、批间变异系数分别<5.76%和<8.42%,并成功应用在生物素标记人血清白蛋白(biotin-HSA)与生物素标记鸡卵黏蛋白(biotin-OVM)的小鼠血清浓度动态检测.本方法不依赖抗体与放射性核素,可望在外源性蛋白多肽大分子及其药物的体内定量检测和代谢动力学研究中广泛应用.

关键词：生物素 (链霉)亲和素外源性蛋白动态血清浓度

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酪丝亮肽荧光标记物的合成及其在肿瘤治疗靶点研究中的应用

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生物化学与生物物理进展 2008年第10期35卷 1161-1167页

作者：简序傅正张燕玲韩丽霞朱志峰徐琼王莉周春雷石琳熙刘俊燕陆融姚智天津医科大学免疫学教研室天津医科大学医学检验系天津300203

酪丝亮肽是一种具有抗肿瘤活性的小分子三肽,它可以诱导造成肝癌细胞发生凋亡坏死,从而杀伤肿瘤细胞,但是酪丝亮肽在肝癌细胞的亚细胞定位尚不十分明确.为了达到对酪丝亮肽进行示踪进而观察其亚细胞定位的目的,使用荧光物质(5(6)-羧基... 详细信息

酪丝亮肽是一种具有抗肿瘤活性的小分子三肽,它可以诱导造成肝癌细胞发生凋亡坏死,从而杀伤肿瘤细胞,但是酪丝亮肽在肝癌细胞的亚细胞定位尚不十分明确.为了达到对酪丝亮肽进行示踪进而观察其亚细胞定位的目的,使用荧光物质(5(6)-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯,5(6)-TAMRASE)对酪丝亮肽进行了标记,应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳和荧光分光光度法对标记酪丝亮肽进行纯化和鉴定.并在激光扫描共聚焦显微镜下观察了荧光标记酪丝亮肽在人肝癌BEL-7402细胞中的分布.结果显示,合成的酪丝亮肽荧光标记物性质稳定,标记的酪丝亮肽在人肝癌BEL-7402细胞的胞浆中呈聚集分布.

关键词：酪丝亮肽肝癌荧光标记激光扫描共聚焦显微镜

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高亲和力谷氨酸转运体结构和功能的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2014年第12期41卷 1214-1221页

作者：张云龙瞿少刚南方医科大学基础医学院免疫学教研室广州510515

真核生物高亲和力谷氨酸转运体(excitatory amino acid transporters,EAATs)分为GLAST(EAAT1)、GLT-1(EAAT2)、EAAC1(EAAT3)、EAAT4和EAAT5等5个亚型.高亲和力谷氨酸转运体结构学的研究,揭示了谷氨酸转运体的跨膜拓扑结构、真核和原核生物EAATs结构的差异,以及在底物转运过程中的一些底物和协同转运离子的结合位点.其功能学的研究发现,EAATs在参与突触的传递,避免兴奋性氨基酸的毒性效应中发挥重要作用,同时也参与了对学习、记忆以及运动行为的调控.结合我们既往的工作,就近几年EAATs的结构和功能研究做一综述.

关键词：高亲和力谷氨酸转运体结构功能

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DENV-2感染的HUVECs与巨噬细胞相互作用对主要炎性细胞因子产生的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第6期39卷 432-439页

作者：来涛左丽罗玉毛佳璇陈俊豪周恩正贵州医科大学免疫学教研室贵阳550025

目的观察原代人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被登革热2型病毒(dengue virus 2, DENV-2)感染后,与人外周血巨噬细胞(macrophages, M?)共培养,两种细胞主要炎性因子产生的变化。方法密度梯度... 详细信息

目的观察原代人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)被登革热2型病毒(dengue virus 2, DENV-2)感染后,与人外周血巨噬细胞(macrophages, M?)共培养,两种细胞主要炎性因子产生的变化。方法密度梯度离心法从人体外周血浓缩白细胞中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),贴壁得到单核细胞,通过巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激,流式细胞术检测CD14+CD11b+细胞纯度,得到M?。DENV-2感染HUVECs,real-time PCR检测HUVECs细胞内病毒NS1 mRNA表达量变化。HUVECs被DENV-2感染后,通过Transwell法与M?共培养,对照组用鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate, S1P)1型特异性受体激动剂CYM-5442预处理24 h去除药物后感染病毒。Real-time PCR分别检测HUVECs产生的IL-6、IL-8 mRNA和M?产生的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β mRNA的逆转录水平;ELISA双抗体夹心法检测培养上清中上述细胞因子的表达。结果HUVECs DENV-2被感染后,细胞内NS1基因转录水平逐渐上升,24 h时达峰值(2.66±0.53,P<0.05)后下降。流式细胞术检测M?纯度为(89.16±2.07)%。HUVECs被DENV-2感染后IL-6、IL-8 mRNA转录水平均上调,24 h mRNA转录量达到峰值;IL-6为16.10±0.17,IL-8为29.76±0.58。未感染组转录水平IL-6为1.46±0.67,IL-8为1.60±0.54。M?被感染后IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β mRNA表达量均有明显上升,在24 h mRNA IL-6表达量为45.82±3.72,IL-8为52.34±1.69(12 h),TNF-α为28.94±1.75,IL-1β为30.96±1.44;未感染组转录水平IL-6为1.16±0.22,IL-8为1.15±0.21,TNF-α为1.11±0.09,IL-1β为1.47±0.31。HUVECs与M?共培养后上述细胞因子在各时间点的转录水平有所下降,依然明显高于未感染对照组。CYM-5442预处理后,共培养组感染的HUVECs IL-6、IL-8的mRNA转录水平明显下降(P<0.01),M?中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β mRNA转录水平也有下调(P<0.01)。结论DENV-2能够感染原代HUVECs,且被DENV-2感染的HUVECs能够活化M?并促使其分泌大量的IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β,同时活化的M?能一定程度地降低HUVECs炎症细胞因子的产生。

关键词：登革热病毒人脐静脉内皮细胞巨噬细胞细胞因子免疫调节

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食管鳞癌上皮细胞间质转化对NK细胞活化及其生物学作用的研究

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四川大学学报（医学版） 2019年第1期50卷 40-47页

作者：高凤霞吴剑任德莲西南医科大学免疫学教研室泸州646000

目的探讨食管鳞癌上皮细胞间质化(EMT)对自然杀伤(NK)细胞生物学活性的影响。方法通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞... 详细信息

目的探讨食管鳞癌上皮细胞间质化(EMT)对自然杀伤(NK)细胞生物学活性的影响。方法通过Western blot检测EMT化相关蛋白E-cadherin和Vimentin表达,从6株细胞系中筛选出EMT化和非EMT化食管鳞癌细胞株;收集10例正常人外周血,负性分选NK细胞;根据共培养不同的条件培养基分为RPMI 1640正常培养基刺激-NK组(NC组)、EC9706细胞上清液刺激-NK组(EC9706组)与KYSE150细胞上清液刺激-NK组(KYSE150组),将不同的条件培养基加入NK细胞共培养72h,流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达。10ng/mL转化生长因子-β(TGF-β)处理KYSE150细胞株7d诱导EMT化后,收集KYSE150EMT和KYSE150上清液,分别与NK细胞共培养,72h后以流式细胞术检测NK细胞表面/胞内分子的表达、CD107a脱颗粒能力、靶细胞K562杀伤效应、NK细胞增殖及凋亡。结果 6株细胞系中筛选出2株EMT化和4株非EMT化的食管鳞癌细胞株,从中各选出一株(EC9706和KYSE150)用于后续实验;NK细胞负性筛选达到90%以上的纯度,T细胞<1%。不同的食管鳞癌细胞上清液刺激后,3组NK细胞表面活化型、抑制型受体,效应分子结果显示:与NC组和KYSE150组比较,EC9706组活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,颗粒酶释放均降低(P<0.05);抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加(P<0.05);NKP46、CD226、CD16表达和穿孔素释放在3组间差异无统计学意义。与KYSE150上清刺激比较,KYSE150EMT上清刺激后,NK细胞活化型受体NKP30、NKG2D、NKP44表达,穿孔素释放均降低;CD107a脱颗粒作用、靶细胞K562杀伤效应均减弱,NK细胞Ki67增殖指数下降(P<0.05);抑制型受体NKG2A和CD158b表达增加(P<0.05);NKP46、CD226、CD16表达,颗粒酶释放及NK细胞凋亡在两组间差异无统计学意义。结论食管鳞癌细胞EMT化可能通过抑制NK细胞活化、减少NK细胞杀伤效应分子的分泌来降低NK细胞杀伤效应,从机体免疫监视中逃逸。

关键词：食管鳞癌自然杀伤细胞上皮细胞间质转化生物学活性增殖与凋亡

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雷公藤多甙与白介素-10对人外周血树突细胞的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第8期22卷 53-56页

作者：王胜军姚堃谢芳艺季晓辉中国 212001 南京 210029 南京医科大学微生物学和免疫学教研室南京医科大学微生物学和免疫学教研室镇江镇江医学院微生物学和免疫学教研室

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧... 详细信息

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧光染色后采用流式细胞仪进行分析,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应分别检测IL-12p40蛋白水平和mRNA的转录。结果:雷公藤多甙5-20mg/L显著下调HLA-DR和CD80抗原的表达,IL-10 50-200μg/L能抑制HLA-DR和CD80抗原的表达,并都具有剂量依赖关系;雷公藤多甙5-20mg/L和IL-10 50-200μg/L均能抑制DC分泌IL-12p40蛋白,同时经雷公藤多甙20mg/L和IL-10 200μg/L处理的DC中IL-12 p40 mRNA的表达受到显著抑制。结论:雷公藤多甙和IL-10能通过抑制DC表面分子的表达和IL-12的合成而发挥免疫抑制作用。

关键词：雷公藤树突细胞细胞培养 HLA-DR抗原 CD80抗原白介素-10 白介素-12 流式细胞术逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定

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HBV疫苗接种后高、低、无应答个体B细胞特征的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第2期41卷 159-164页

作者：杨廷雯孙丽娜贺晓燕姚新生遵义医科大学免疫学教研室 563003

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染一直以来都是世界范围内严重的公共卫生问题,可导致急、慢性肝脏疾病以及多种并发症。接种HBV疫苗诱导机体B细胞分泌保护性的乙型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)是预防... 详细信息

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染一直以来都是世界范围内严重的公共卫生问题,可导致急、慢性肝脏疾病以及多种并发症。接种HBV疫苗诱导机体B细胞分泌保护性的乙型肝炎病毒表面抗体(hepatitis B surface antibody,HBsAb)是预防HBV感染最重要的措施。研究表明不同个体对HBV疫苗应答的效应不一致,可分为超高/高、正常/中等、低/无应答,对其产生机制的研究可为高滴度HBsAb制备、HBV感染防治等提供参考。本文将对HBV疫苗接种后不同应答效应个体B细胞特征和机制的研究概况与进展进行综述。

关键词：乙型肝炎病毒疫苗免疫接种和应答 B细胞 B细胞抗原受体互补决定区3受体库

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BPI_(23)-Fcγ1重组融合蛋白在***中的表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第5期20卷 451-455页

作者：柯岩安云庆杨贵贞首都医科大学微生物学和免疫学教研室白求恩医科大学免疫学教研室

目的　构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载... 详细信息

目的　构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体 ;转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白。结果　 (1)RT PCR获得预期的扩增产物BPI60 0bp和Fcγ170 0bp基因片段 ;(2 )成功构建pUC18 BPI180 、pUC18 BPI4 2 0 、pUC18 Fcγ170 0 重组克隆载体 ,DNA测序结果与文献报道一致 ;(3)成功构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,酶切图谱分析与预期结果相符 ;(4 )转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白 ,表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 %～ 30 % ;(5 )复性后重组蛋白具有抗菌活性和结合蛋白A的作用。结论　pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体构建成功 ;在E .coli中得到表达 ,获得具有抗菌活性的BPI2 3

关键词： BPI23-Fcγ1重组蛋白聚合酶链反应抗菌蛋白

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自制RV－McAb－ELISA试剂盒与进口及国产RV－ELISA试剂盒的比较

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中华实验和临床病毒学杂志 1994年第2期8卷 155-157页

作者：楼跃飞邵传森浙江医科大学免疫学教研室

将自制的肠道病毒单克隆抗体ＥＬＩＳＡ（ＲＶ－ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）试剂盒与丹麦Ｄａｋｏ公司生产的及上海市卫生防疫站生产的ＲＶ－ＥＬＩＳＡ试剂盒对８８份粪样中ＲＶ的检测结果进行了比较。以ＰＡＧＥ结果为比较标准，自制试剂... 详细信息

将自制的肠道病毒单克隆抗体ＥＬＩＳＡ（ＲＶ－ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）试剂盒与丹麦Ｄａｋｏ公司生产的及上海市卫生防疫站生产的ＲＶ－ＥＬＩＳＡ试剂盒对８８份粪样中ＲＶ的检测结果进行了比较。以ＰＡＧＥ结果为比较标准，自制试剂盒的灵敏度、特异度及Ｙｏｕｄｅｎ指数分别为９８．３％、９０％、及０．８８，明显高于丹麦Ｄａｋｏ及上海生产试剂盒；对ＲＶ核酸含量较低粪样的阳性检出率（９５．７％）也明显高于后二者；此外，自制试剂盒的阳性标本与阴性标本吸光度（Ａ，曾称光密度ＯＤ）均值之比值约是另二种试剂盒的２．２倍。结果提示，自制ＲＶ－ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＲＶ的灵敏性和特异性优于国内外同类产品，并具有操作省时，易于目测判断结果等特点，有利于基层单位推广使用。

关键词：轮状病毒感染 ELISA 试剂盒

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