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中国组织化学与细胞化学杂志 2012年第1期21卷 74-78页

作者：崔芳芹贾雪梅汪渊黄大可李报安徽医科大学组织与胚胎学教研室合肥230032 蚌埠医学院病理生理学教研室安徽233030 安徽医科大学分子生物学实验室合肥230032 安徽医科大学形态学中心实验室合肥230032

目的观察高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达的变化。方法雄性S D大鼠20只,随机分为2组,对照组(C组)给予全价颗粒饲料喂养;高脂饮食组(H组)给予高脂饮食(饲料成分为胆固醇2%、猪油10%、基础饲料88%)连续喂养2个月,各组动物均不限制... 详细信息

目的观察高脂血症大鼠下颌下腺内AQP1和AQP5表达的变化。方法雄性S D大鼠20只,随机分为2组,对照组(C组)给予全价颗粒饲料喂养;高脂饮食组(H组)给予高脂饮食(饲料成分为胆固醇2%、猪油10%、基础饲料88%)连续喂养2个月,各组动物均不限制饮水。2个月成模后,取血检测血脂;取大鼠下颌下腺组织,进行免疫组织化学染色(SP法)和计算机图像分析。结果①血脂检测结果:C组TG与H组TG比较有显著性差异(P<0.05);C组TC和H组TC比较有显著性差异(P<0.05)。②免疫组化结果:C组大鼠下颌下腺AQP1平均光密度值与H组AQP1平均光密度值比较有差异性(P<0.05);C组大鼠下颌下腺AQP5平均光密度值与H组AQP5平均光密度值比较有差异性(P<0.05)。结论高脂血症大鼠下颌下腺导管上皮细胞内AQP1和AQP5的表达减少,为探讨高脂血症导致下颌下腺分泌功能降低的病理机制提供了形态学依据。

关键词：高脂血症水通道蛋白-1 水通道蛋白-5 下颌下腺大鼠

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糖尿病大鼠下颌下腺内水通道蛋白-1和5表达变化及意义

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解剖学杂志 2011年第6期34卷 743-746页

作者：崔芳芹贾雪梅汪渊黄大可李报安徽医科大学组织学与胚胎学教研室安徽医科大学分子生物学实验室安徽医科大学形态学中心实验室合肥230032 蚌埠医学院病理生理学教研室蚌埠233030

目的：观察水通道蛋白-1（AQPl）和水通道蛋白-5（AQP5）在糖尿病大鼠下颌下腺内表达变化，探讨糖尿病患者口渴症状的发生机制。方法：SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组、治疗组。取大鼠下颌下腺，分别进行H-E染色、免疫组织化学显色（S... 详细信息

目的：观察水通道蛋白-1（AQPl）和水通道蛋白-5（AQP5）在糖尿病大鼠下颌下腺内表达变化，探讨糖尿病患者口渴症状的发生机制。方法：SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组、治疗组。取大鼠下颌下腺，分别进行H-E染色、免疫组织化学显色（SP法）和计算机图像分析。结果：对照组和治疗组的血糖分别与糖尿病组血糖比较，均有差异；与对照组比较，糖尿病组腺泡轻度萎缩，细胞排列紊乱，导管数目减少，直径变小；糖尿病组AQPl和AQP5表达下降；治疗组AQPl和AQP5表达较糖尿病组增加；对照组与糖尿病组大鼠下颌下腺AQPl、AQP5的MOD值比较，均有差异；糖尿病组与治疗组AQPl、AQP5的MOD值比较，均有差异性。结论：糖尿病大鼠下颌下腺内AQPl和AOP5的表达减少，为进一步探讨糖尿病下颌下腺分泌功能降低的发病机制提供形态学依据。

关键词：糖尿病水通道蛋白-1 水通道蛋白-5 下颌下腺大鼠

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低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱ α mRNA表达水平的影响

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中国药理学与毒理学杂志 1999年第3期13卷 217-221页

作者：冯朝晖余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及分子生物学实验室

利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·... 详细信息

利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·Ｌ－１ＭＮＮＧ处理２．５ｈ后，ＨｅＬａ细胞ＰｏｌβｍＲＮＡ水平在６－２４ｈ内升高约１倍，而Ｐｏｌα，δ，ε及ＴｏｐＩαｍＲＮＡ水平则无明显改变．提示ＰｏｌβｍＲＮＡ水平改变可能参与ＭＮＮＧ诱发细胞遗传不稳定的发生．

关键词：甲基硝基亚硝基胍 DNA MNNG 聚合酶基因表达

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低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱ α mRNA表达水

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中国药理学与毒理学杂志 1999年第3期13卷

作者：冯朝晖余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及分子生物学实验室浙江杭州 310031

利用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,研究表明,经0.2#mu#mol·L~(-1)低浓度甲基硝基亚硝基胍(MNNG)处理2.5h后,HeLa细胞Pol#beta# mRNA水平在6-24h内升高约1倍,而Pol#alpha#,#delta#,#epsilon#及TopⅡ#alpha# mRNA水平则无明... 详细信息

关键词：甲基硝基亚硝基胍 DNA聚合酶类基因表达聚合酶链反应细胞.HeLa 拓扑异构酶Ⅱ α.mRNA

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N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起vero细胞基因表达改变及有关cDNA片段的初步鉴定

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中国药理学与毒理学杂志 1998年第1期12卷 62-66页

作者：胡文蔚余应年张小山董海涛浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，... 详细信息

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，２个属于次级反应基因．另有２个片段的差异表达仅在蛋白合成抑制剂环己亚胺（ＣＨＭ）合并ＭＮＮＧ处理时才出现．反向缝隙印迹杂交分析印证了２个片段在ＤＤ－ＰＣＲ中发现的改变，同时分析的本实验室分离的２５个片段中，８个片段的变化被验证与ＤＤ－ＰＣＲ中的改变一致．序列分析结果显示这些片段与许多基因有高同源性，其中包括一些参与信息传导的基因．

关键词：亚硝基胍 MMNG cDNA 差异显示 mRNA 片段

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甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定vero细胞DNA体外复制的保真度

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中国药理学与毒理学杂志 1998年第2期12卷 144-148页

作者：冯朝晖余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及分子生物学实验室

利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷... 详细信息

利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ′－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ）诱发的遗传不稳定（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ）ｖｅｒｏ细胞胞浆抽提物中进行ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ复制，发现经过体外复制的ｐＺ１８９质粒中ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变率高出对照组５－８倍（Ｐ＜０．０５）。

关键词： MNNG 甲基硝基亚硝基胍 vero细胞 DNA复制

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人细胞色素P450 2C9 cDNA的克隆、鉴定及真核细胞表达重组质粒的构建

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癌变．畸变．突变 1998年第4期10卷 198-202页

作者：汪爱今钱瑛钱羽力余应年浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

从人肝组织中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９的ｃＤＮＡ。以Ｔ－Ａ克隆方法将该基因的ｃＤＮＡ连接到ｐＧＥＭ－３Ｚ质粒上，然后通过内切酶图谱分析及部分序列分析加以鉴定，结果显示克隆片段具有人细... 详细信息

从人肝组织中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９的ｃＤＮＡ。以Ｔ－Ａ克隆方法将该基因的ｃＤＮＡ连接到ｐＧＥＭ－３Ｚ质粒上，然后通过内切酶图谱分析及部分序列分析加以鉴定，结果显示克隆片段具有人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９内切酶图谱和核苷酸序列，该片断含５′端和３′端部分非编码区及完整的编码区。最后将该ｃＤＮＡ片段连接到哺乳动物细胞的表达质粒ｐＲＥＰ９中。为建立表达人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９基因的细胞系打下了基础。

关键词：细胞色素P450 基因克隆 RT-PCR 重组质粒

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细胞色素P4501A1基因mRNA的化学诱导及在人肝中的基础表达

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第4期10卷 277-279页

作者：董海涛吴健敏余应年浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞... 详细信息

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞该基因ｍＲＮＡ水平的诱导．结果显示：３－甲基胆蒽，苯巴比妥，β－萘黄酮在不同程度上能高诱导ＦＬ细胞１Ａ１ｍＲＮＡ表达．ＲＴ－ＰＣＲ结果显示ＣＨＬ细胞及Ｖ７９细胞存在基础表达，但Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果提示其表达量极低．成人肝脏中１Ａ１亦存在极低的表达水平，而人胚胎肝脏不能用高灵敏度的ＲＴ－ＰＣＲ检测到痕迹表达，提示胚胎发育时期１Ａ１基因处于完全关闭状态．

关键词：细胞色素基因表达化学诱导肿瘤发生

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c－k－ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21^（ras）表达的序列特异性

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第1期10卷 45-48页

作者：钱瑛余应年董海涛陈星若罗建红浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突... 详细信息

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突变或ＲＮＡ剪接异常．用分别与野生型和上述突变型ｋ－ｒａｓ第９～１５密码子互补的１８聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为６μｍｏｌ·Ｌ－１），发现与突变型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸能抑制ＨＣｅ８６９３细胞生长并有ｐ２１ｒａｓ蛋白表达量的抑制；而与野生型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明ｃ－ｋ－ｒａｓ反义寡核苷酸对ＨＣｅ８６９３细胞生长和ｐ２１ｒａｓ蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性．

关键词：肿瘤细胞原癌基因反义寡核苷酸基因表达

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人细胞色素P4502B6在哺乳类细胞中的稳定表达

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第2期10卷 131-135页

作者：吴健敏余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达... 详细信息

〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达体并分别导入上述三种细胞中表达，经Ｇ４１８抗性筛选，建立了ＦＬ－２Ｂ６，ＣＨＬ－２Ｂ６和Ｖ７９－２Ｂ６三种转基因细胞系，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交证明它们都有ＣＹＰ２Ｂ６的表达．在ＣＨＬ－２Ｂ６细胞中还测得较高水平的７－乙氧基－４－三氟甲基香豆素去乙基酶活性，它对前致突变物甲基亚硝胺吡啶酮的致微核形成作用有很高敏感性，并呈剂量效应关系，但其母系细胞皆为阴性．

关键词：细胞色素基因表达哺乳类化学致癌

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