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N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起vero细胞基因表达改变及有关cDNA片段的初步鉴定

中国药理学与毒理学杂志 1998年第1期12卷 62-66页

作者：胡文蔚余应年张小山董海涛浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，... 详细信息

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，２个属于次级反应基因．另有２个片段的差异表达仅在蛋白合成抑制剂环己亚胺（ＣＨＭ）合并ＭＮＮＧ处理时才出现．反向缝隙印迹杂交分析印证了２个片段在ＤＤ－ＰＣＲ中发现的改变，同时分析的本实验室分离的２５个片段中，８个片段的变化被验证与ＤＤ－ＰＣＲ中的改变一致．序列分析结果显示这些片段与许多基因有高同源性，其中包括一些参与信息传导的基因．

关键词：亚硝基胍 MMNG cDNA 差异显示 mRNA 片段

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人细胞色素P450 2C9 cDNA的克隆、鉴定及真核细胞表达重组质粒的构建

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癌变．畸变．突变 1998年第4期10卷 198-202页

作者：汪爱今钱瑛钱羽力余应年浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

从人肝组织中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９的ｃＤＮＡ。以Ｔ－Ａ克隆方法将该基因的ｃＤＮＡ连接到ｐＧＥＭ－３Ｚ质粒上，然后通过内切酶图谱分析及部分序列分析加以鉴定，结果显示克隆片段具有人细... 详细信息

从人肝组织中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９的ｃＤＮＡ。以Ｔ－Ａ克隆方法将该基因的ｃＤＮＡ连接到ｐＧＥＭ－３Ｚ质粒上，然后通过内切酶图谱分析及部分序列分析加以鉴定，结果显示克隆片段具有人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９内切酶图谱和核苷酸序列，该片断含５′端和３′端部分非编码区及完整的编码区。最后将该ｃＤＮＡ片段连接到哺乳动物细胞的表达质粒ｐＲＥＰ９中。为建立表达人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９基因的细胞系打下了基础。

关键词：细胞色素P450 基因克隆 RT-PCR 重组质粒

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细胞色素P4501A1基因mRNA的化学诱导及在人肝中的基础表达

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第4期10卷 277-279页

作者：董海涛吴健敏余应年浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞... 详细信息

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞该基因ｍＲＮＡ水平的诱导．结果显示：３－甲基胆蒽，苯巴比妥，β－萘黄酮在不同程度上能高诱导ＦＬ细胞１Ａ１ｍＲＮＡ表达．ＲＴ－ＰＣＲ结果显示ＣＨＬ细胞及Ｖ７９细胞存在基础表达，但Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果提示其表达量极低．成人肝脏中１Ａ１亦存在极低的表达水平，而人胚胎肝脏不能用高灵敏度的ＲＴ－ＰＣＲ检测到痕迹表达，提示胚胎发育时期１Ａ１基因处于完全关闭状态．

关键词：细胞色素基因表达化学诱导肿瘤发生

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c－k－ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21^（ras）表达的序列特异性

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第1期10卷 45-48页

作者：钱瑛余应年董海涛陈星若罗建红浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突... 详细信息

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突变或ＲＮＡ剪接异常．用分别与野生型和上述突变型ｋ－ｒａｓ第９～１５密码子互补的１８聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为６μｍｏｌ·Ｌ－１），发现与突变型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸能抑制ＨＣｅ８６９３细胞生长并有ｐ２１ｒａｓ蛋白表达量的抑制；而与野生型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明ｃ－ｋ－ｒａｓ反义寡核苷酸对ＨＣｅ８６９３细胞生长和ｐ２１ｒａｓ蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性．

关键词：肿瘤细胞原癌基因反义寡核苷酸基因表达

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人细胞色素P4502B6在哺乳类细胞中的稳定表达

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第2期10卷 131-135页

作者：吴健敏余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达... 详细信息

〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达体并分别导入上述三种细胞中表达，经Ｇ４１８抗性筛选，建立了ＦＬ－２Ｂ６，ＣＨＬ－２Ｂ６和Ｖ７９－２Ｂ６三种转基因细胞系，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交证明它们都有ＣＹＰ２Ｂ６的表达．在ＣＨＬ－２Ｂ６细胞中还测得较高水平的７－乙氧基－４－三氟甲基香豆素去乙基酶活性，它对前致突变物甲基亚硝胺吡啶酮的致微核形成作用有很高敏感性，并呈剂量效应关系，但其母系细胞皆为阴性．

关键词：细胞色素基因表达哺乳类化学致癌

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茶多酚对人羊膜上皮细胞FL系EROD活性的影响

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中国病理生理杂志 1996年第5期12卷 467-470页

作者：冯磊余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室和医学分子生物学实验室

本实验测定人羊膜上皮细胞ＦＬ系乙氧基异吩恶唑Ｏ－去乙基酶（ＥＲＯＤ）的活性，观察茶多酚对ＦＬ细胞细胞色素Ｐ４５０１Ａ１同功酶活性的影响。在茶多酚（ＧＴＰＰ）对猓被鼓芤种柒－ＮＦ对ＥＲＯＤ的诱导作用。提示，茶多酚可... 详细信息

本实验测定人羊膜上皮细胞ＦＬ系乙氧基异吩恶唑Ｏ－去乙基酶（ＥＲＯＤ）的活性，观察茶多酚对ＦＬ细胞细胞色素Ｐ４５０１Ａ１同功酶活性的影响。在茶多酚（ＧＴＰＰ）对猓被鼓芤种柒－ＮＦ对ＥＲＯＤ的诱导作用。提示，茶多酚可能通过抑制细胞色素同功酶的活性，降低致癌物在体内代谢活化而发挥其化学预防肿瘤的作用。

关键词：细胞色素茶多酚羊膜上皮细胞肿瘤

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MNNG所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析

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中国药理学与毒理学杂志 1996年第1期10卷 77-78页

作者：孙雪敏余应年张小山陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州医学高等专科学校

ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析１孙雪敏１余应年张小山陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室，杭州３１００３１；１杭州医学高等专科学校，杭州３１００１２）非定标性突变（ｎｏｎｔａｒｇｅ... 详细信息

ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析１孙雪敏１余应年张小山陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室，杭州３１００３１；１杭州医学高等专科学校，杭州３１００１２）非定标性突变（ｎｏｎｔａｒｇｅｔｅｄｍｕｔａｔｉｏｎ）为原核细胞...

关键词：癌细胞非定标性突变甲基硝基亚硝胍时相分析

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茶多酚对氯霉素毒性作用的影响

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癌变．畸变．突变 1996年第6期8卷 336-341页

作者：冯磊余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室医学分子生物学实验室

该细胞的毒性明显增加。在氯霉素对ＦＬ细胞、β－萘黄酮诱导后的ＦＬ细胞和ＦＬ—１Ａ１细胞生长影响的实验中也得到相似的结果。不同剂量氯霉素对不同细胞的毒性作用与该细胞的ＣＹＰ４５０同功酶活性有关。由于证明ＧＴＰＰ能抑制细... 详细信息

该细胞的毒性明显增加。在氯霉素对ＦＬ细胞、β－萘黄酮诱导后的ＦＬ细胞和ＦＬ—１Ａ１细胞生长影响的实验中也得到相似的结果。不同剂量氯霉素对不同细胞的毒性作用与该细胞的ＣＹＰ４５０同功酶活性有关。由于证明ＧＴＰＰ能抑制细胞色素Ｐ４５０同功酶活性，从而使细胞对外来化合物的解毒功能减弱，因此茶多酚作为化学干预是否可在肿瘤化学预防策略中选用值得商榷。

关键词：茶多酚肝脏解毒功能氯霉素毒性细胞色素P450

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DNA－PA研究进展

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国外医学（遗传学分册） 1996年第3期19卷 113-116页

作者：孙雪敏浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

ＤＮＡ依赖性蛋白激酶（ＤＮＡ－ＰＫ）是一种广泛存在于真核细胞的蛋白质丝／苏氨酸激酶，它的底物有包括转录因子在内的多种ＤＮＡ结合蛋白和几种非ＤＮＡ结合蛋白。近年来的研究还发现它的两个组成部分直接参与ＤＮＡ双链断裂修复和... 详细信息

ＤＮＡ依赖性蛋白激酶（ＤＮＡ－ＰＫ）是一种广泛存在于真核细胞的蛋白质丝／苏氨酸激酶，它的底物有包括转录因子在内的多种ＤＮＡ结合蛋白和几种非ＤＮＡ结合蛋白。近年来的研究还发现它的两个组成部分直接参与ＤＮＡ双链断裂修复和Ｖ（Ｄ）Ｊ重组。它还可能通过ｐ５３４蛋白间接参与细胞周期关卡机制。

关键词：依赖性蛋白激酶 DNA

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菜油油烟凝聚物诱发人羊膜FL细胞中的非定标性突变

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癌变．畸变．突变 1996年第3期8卷 140-143页

作者：王卫萍张小山余应年陈星若浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室

本研究以穿梭质粒ｐＺ１８９作为探针，用菜油油烟凝聚物ＲａｐｅＳｅｅｄＯｉｌＣｏｎｄｅｎｓａｔｅ，ＲＣ）诱发人羊膜ＦＬ细胞中的非定标性突变。结果显示：ｌ２．５和５０μｇ／ｍｌＲＣ处理组的突变频率较自发突变频率增加了３．... 详细信息

本研究以穿梭质粒ｐＺ１８９作为探针，用菜油油烟凝聚物ＲａｐｅＳｅｅｄＯｉｌＣｏｎｄｅｎｓａｔｅ，ＲＣ）诱发人羊膜ＦＬ细胞中的非定标性突变。结果显示：ｌ２．５和５０μｇ／ｍｌＲＣ处理组的突变频率较自发突变频率增加了３．５和４．１倍；两个处理组的点突变频率分别为１１．９×１Ｏ－４（１９／１５９９６）和１１．６×ｌ０－４（１７／１４７０１），比自发点突变频率２．９×１０－４（２／６８２２）分别增加了４．１和３．９倍，其卡方检验的Ｐ值均小于０．０５。

关键词：非定标性突变菜油油烟凝聚物穿梭质粒肿瘤

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