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第七届中国睡眠医学论坛

作者：许奇王典茹董辉陈理曲卫敏黄志力复旦大学基础医学院药理学系医学神经生物学国家重点实验室安徽医科大学基础医学院生理学教研室

研究目的:临床发现臂旁核(parabrachial nucleus,PB)损伤可导致患者嗜睡,甚至意识障碍及昏迷,本研究拟揭示PB谷氨酸能神经调控睡眠与觉醒的作用和神经功能环路。研究方法:脑立体定位法将腺相关病毒(AAV)携带的人源胆碱能受体基因载体(hM... 详细信息

研究目的:临床发现臂旁核(parabrachial nucleus,PB)损伤可导致患者嗜睡,甚至意识障碍及昏迷,本研究拟揭示PB谷氨酸能神经调控睡眠与觉醒的作用和神经功能环路。研究方法:脑立体定位法将腺相关病毒(AAV)携带的人源胆碱能受体基因载体(hM3Dq)或光通道蛋白(ChR2)微量(200 nl/侧)注射至大鼠双侧PB。脑片膜片钳技术检测hM3Dq或

关键词：基底前脑底丘脑神经元活性

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Kir2.1/Kir2.3嵌合体的构建与表达

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中国药理学通报 2013年第5期29卷 733-736页

作者：赵志英朱宏谦张璇刘丽张国红河北医科大学药理学教研室教育部血管与神经生物学重点实验室河北省新药药理毒理研究重点实验室河北石家庄050017 河北省公安厅国内安全保卫总队河北石家庄050051

目的构建Kir2.1/Kir2.3通道嵌合体,为进一步研究Kir2.1和Kir2.3通道的调控机制打下基础。方法利用重叠延伸PCR方法构建不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒:N1P3C3,N3P1C1,N3P3C1,N1P1C3,NIP3C1,N3P1C3。将不同的嵌合体质粒分别用NheI线性化后,转录为cRNA表达于非洲爪蟾卵母细胞,用双电极电压钳记录电流。结果不同的Kir2.1/Kir2.3嵌合体质粒构建成功,在非洲爪蟾卵母细胞上可以记录到电流表达。结论成功构建Kir2.1/Kir2.3嵌合体并完成了嵌合体通道的异源性表达和电压钳记录。

关键词： Kir2 3 Kir2 1 钾通道嵌合体重叠延伸PCR 双电极电压钳非洲爪蟾卵母细胞

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FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3通道功能的影响

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河北医科大学学报 2012年第12期33卷 1365-1368,F0002页

作者：赵志英朱宏谦张哲刘丽张国红河北医科大学基础医学院药理学教研室教育部血管与神经生物学重点实验室河北省新药药理毒理研究重点实验室河北石家庄050017 河北省公安厅国家安全保卫总队河北石家庄050000 河北省人民医院临床医学研究中心河北省老年医学重点实验室河北石家庄050051

目的构建FLAG标记的内向整流钾通道(inwardly rectifying K channel,Kir)2.3通道蛋白,为进一步研究通道的生理功能和调节机制奠定基础。方法运用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,将FLAG标记短肽DNA碱基序列插入到Kir2.... 详细信息

目的构建FLAG标记的内向整流钾通道(inwardly rectifying K channel,Kir)2.3通道蛋白,为进一步研究通道的生理功能和调节机制奠定基础。方法运用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,将FLAG标记短肽DNA碱基序列插入到Kir2.3通道氨基末端,构建重组质粒DNA,FLAG-Kir2.3-pGEMHE;采用菌落PCR方法挑取阳性克隆,表达于非洲爪蟾卵母细胞,验证加入标记后是否影响Kir2.3通道蛋白的功能;进行免疫细胞化学实验,检测FLAG标记短肽表达情况。结果经测序验证,FLAG-Kir2.3-pGEMHE重组质粒DNA构建成功,没有碱基突变。FLAG标记短肽没有影响Kir2.3通道功能,FLAG-Kir2.3成功表达于非洲爪蟾卵母细胞,双电极电压钳可以记录到电流。免疫细胞化学实验证实FLAG标记短肽表达。结论成功构建重组质粒DNA,FLAG标记短肽已与Kir2.3通道蛋白成功融合并有效表达。

关键词：钾通道,内向整流聚合酶链反应免疫组织化学

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一氧化氮阳性神经元在缺氧预适应中的变化

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吉林大学学报（医学版） 2004年第3期30卷 336-338,F002页

作者：刘宏雁邹洪斌吕国尉王维忠谢湘林吉林大学药学院药理学教研室吉林长春130021 吉林大学第一医院肾病科吉林长春130021 首都医科大学神经生物学研究室北京100054 吉林大学中日联谊医院中心实验室吉林长春13003

目的 :探讨缺氧预适应形成机理。方法 :采用组化法测定小鼠脑内一氧化氮合酶 (NOS)神经元在缺氧 (1次缺氧 ,4次缺氧 )预适应中的变化。结果 :1次缺氧组较正常对照组皮层的 NOS阳性神经元的数目、强弱、细胞的形状、突起的数目及突起的... 详细信息

目的 :探讨缺氧预适应形成机理。方法 :采用组化法测定小鼠脑内一氧化氮合酶 (NOS)神经元在缺氧 (1次缺氧 ,4次缺氧 )预适应中的变化。结果 :1次缺氧组较正常对照组皮层的 NOS阳性神经元的数目、强弱、细胞的形状、突起的数目及突起的长短未见明显变化 ,但 1次缺氧组 NOS神经元突起明显变粗 ,4次缺氧组与正常对照组比较无明显变化。正常对照组海马 NOS阳性神经元数目较少 ,且呈弱阳性 ,1次缺氧组海马 NOS阳性神经元数目增加 ,多呈强阳性 ,4次缺氧组海马 NOS阳性神经元较 1次缺氧组数目变少 ,颜色变浅。结论 :脑内

关键词：缺氧脑细胞低氧神经元一氧化氮合酶/生物合成小鼠

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心肌梗塞后大鼠心肌组织中神经肽Y Y_1受体mRNA水平的改变

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高血压杂志 2001年第2期9卷 134-137页

作者：陆利民孙祥莺汪军田德志郑峪朱依纯 Thomas Hedner 姚泰上海医科大学生理学教研室上海200032 瑞典歌德堡大学临床药理学实验室上海医科大学神经生物学教研室上海200032

目的　观察心肌梗塞后心肌组织中神经肽Y(NPY)Y1受体水平的改变。方法　实验在雄性Sprague Daw ley大鼠中进行 ,用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法 ,造成心肌梗塞动物模型 ,用RT PCR方法观察心肌组织中是否存在有NPYY1受体mRNA ,用定量... 详细信息

目的　观察心肌梗塞后心肌组织中神经肽Y(NPY)Y1受体水平的改变。方法　实验在雄性Sprague Daw ley大鼠中进行 ,用结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法 ,造成心肌梗塞动物模型 ,用RT PCR方法观察心肌组织中是否存在有NPYY1受体mRNA ,用定量PCR方法观察心肌梗塞后大鼠心肌组织中NPYY1受体mRNA水平的改变。结果　用RT PCR方法观察到 ,大鼠心肌组织中有NPYY1受体mRNA分布。在大鼠结扎冠状动脉一天及三天后 ,梗塞区及非梗塞区心肌组织中NPYY1受体mRNA水平较假手术组大鼠均有显著升高。此外 ,假手术组大鼠心肌组织中NPYY1受体mRNA水平较正常大鼠也有显著升高。结论　心肌梗塞可导致梗塞区及非梗塞区心肌组织中NPYY1受体水平升高 ,手术创伤应激也可影响心肌组织中NPYY1受体水平。

关键词：神经肽Y 心肌梗塞 RT-PCR

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褪黑素减弱大鼠下丘脑弓状核β-内啡肽免疫反应的强度

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生理学报 2000年第3期52卷 263-266页

作者：俞昌喜吴根诚许绍芬陈崇宏上海医科大学神经生物学教研室!医学神经生物学国家重点实验室上海200032福建医科大学药理学教研室福州350004 上海医科大学神经生物学教研室医学神经生物学国家重点实验室!上海200032

为探讨褪黑素 (MEL)镇痛作用的机制 ,本文采用免疫组化方法结合计算机图像处理技术 ,观察了注射MEL对大鼠下丘脑弓状核内神经细胞的 β 内啡肽免疫反应的影响。实验大鼠分给药组及对照组 ,分别腹腔注射MEL 110mg/kg或配药液 ,1h后灌注... 详细信息

为探讨褪黑素 (MEL)镇痛作用的机制 ,本文采用免疫组化方法结合计算机图像处理技术 ,观察了注射MEL对大鼠下丘脑弓状核内神经细胞的 β 内啡肽免疫反应的影响。实验大鼠分给药组及对照组 ,分别腹腔注射MEL 110mg/kg或配药液 ,1h后灌注取脑、冰冻切片 ,进行免疫组化染色 ,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度 (IOD)和平均光密度 (OD)。结果显示 ,给药组大鼠弓状核内 β 内啡肽免疫反应明显减弱 ,IOD及OD也均显著减少 (P <0 0 1;P <0 0 5 ) ,表明MEL可致弓状核内 β 内啡肽含量减少 ,系MEL促进 β 内啡肽释放所致 ,从而发挥镇痛效应。

关键词：褪黑素 β-内啡肽弓状核免疫组织化学图像处理大鼠镇痛

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褪黑素对大鼠脑内强啡肽水平的影响

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上海医科大学学报 2000年第6期27卷 457-459页

作者：俞昌喜吴根诚许绍芬陈崇宏上海医科大学基础医学院神经生物学教研室-医学神经生物学国家重点实验室，福州 350004 福建医科大学药理学教研室，上海 200032

目的　观察褪黑素 (MLT)对大鼠脑内某些镇痛相关核团内神经细胞的强啡肽样免疫反应强度的影响。方法　实验大鼠分给药组及对照组 ,分别腹腔注射MLT 110mg/kg或配药液 ,1h后灌注取脑、冰冻切片 ,进行免疫组化染色 ,计算机图像处理技术测... 详细信息

目的　观察褪黑素 (MLT)对大鼠脑内某些镇痛相关核团内神经细胞的强啡肽样免疫反应强度的影响。方法　实验大鼠分给药组及对照组 ,分别腹腔注射MLT 110mg/kg或配药液 ,1h后灌注取脑、冰冻切片 ,进行免疫组化染色 ,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度 (IOD)值。结果　给药组大鼠视上核、中缝背核内强啡肽样免疫阳性反应减弱 ,其IOD值显著减少 (P <0 .0 1) ;给药组大鼠下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、中缝大核的IOD值 ,与对照组比较差别无显著意义。结论　MLT可致视上核。

关键词：褪黑素脑核团强啡肽大鼠镇痛

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褪黑素对大鼠下丘脑弓状核前阿黑皮素mRNA表达的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2000年第5期21卷 39-42页

作者：俞昌喜吴根诚许绍芬陈崇宏上海医科大学神经生物学教研室医学神经生物学国家重点实验室福州 350004 中国福建医科大学药理学教研室上海 200032 中国

目的:观察外源性给予褪黑素对大鼠下丘脑弓状核内神经细胞的前阿黑皮素(POMC) mRNA表达水平的影响。方法:实验大鼠分给药组及对照组,给药组大鼠间隔12 h腹腔注射褪黑素2次(9∶00 am,9∶00pm),每次剂量90mg·kg-1,对照组大鼠注射配... 详细信息

目的:观察外源性给予褪黑素对大鼠下丘脑弓状核内神经细胞的前阿黑皮素(POMC) mRNA表达水平的影响。方法:实验大鼠分给药组及对照组,给药组大鼠间隔12 h腹腔注射褪黑素2次(9∶00 am,9∶00pm),每次剂量90mg·kg-1,对照组大鼠注射配药液。最后一次注射后12 h,灌注取脑、冰冻切片,进行原位杂交实验,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度(IOD)值、平均光密度(OD)值。结果:给药组大鼠下丘脑弓状核内POMC mRNA表达明显增强;其IOD和OD值均显著增加。结论:褪黑素可加强大鼠弓状核内POMC mRNA的表达。

关键词：褪黑激素前阿片黑素细胞皮质激素信使RNA 弓状核原位杂交计算机辅助图像处理镇痛

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褪黑素加强大鼠脑内前强啡肽原mRNA的表达

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中国神经科学杂志 2000年第2期16卷 134-137页

作者：俞昌喜吴根诚许绍芬陈崇宏福建医科大学药理学教研室福建福州350004 上海医科大学医学神经生物学国家重点实验室上海200032

采用原位杂交技术结合计算机图像处理技术 ,观察褪黑素 ( MEL)对大鼠脑内某些核团内神经细胞的前强啡肽原 ( PPD) m RNA表达的影响。实验大鼠分 2组 ,给药组大鼠间隔 1 2 h腹腔注射 MEL2次 ,每次剂量 90 mg/ kg,对照组注射配药液。于最... 详细信息

采用原位杂交技术结合计算机图像处理技术 ,观察褪黑素 ( MEL)对大鼠脑内某些核团内神经细胞的前强啡肽原 ( PPD) m RNA表达的影响。实验大鼠分 2组 ,给药组大鼠间隔 1 2 h腹腔注射 MEL2次 ,每次剂量 90 mg/ kg,对照组注射配药液。于最后一次注射 1 2 h后 ,灌注取脑、冰冻切片 ,进行原位杂交实验 ,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度 ( IOD)值。结果观察到 ,给药组大鼠视上核 ( SON)、下丘脑室旁核( PVNH)、中缝背核 ( RD)内神经细胞的 PPD m RNA表达明显强于对照组 ;其 IOD值均显著高于对照组 ( P<0 .0 1 ) ,而在中脑导水管周围灰质腹外侧区未见显著变化 ( P>0 .0 5)。上述结果表明 ,MEL可促进 SON、PVNH、RD内 PPD m RNA表达。

关键词：褪黑素脑核闭前强啡肽原 mRNA 大鼠

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大鼠动脉钙超负荷模型的建立及确证

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中华医学杂志 1999年第10期79卷 769-772页

作者：孙安阳俞彰钟慈声王永铭杨藻宸上海医科大学医学神经生物学国家重点实验室 200032 上海医科大学医学神经生物学国家生物物理学教研室 200032 上海医科大学医学神经生物学国家药理学教研室 200032

目的建立大鼠动脉钙超负荷（ACO）模型，研究其病理特点。方法分别用原子吸收分光光度法和电子探针微分析法测定模型大鼠血管总钙和平滑肌细胞内钙含量;用扫描电镜和透射电镜观察动脉壁内皮细胞和平滑肌细胞形态;用DNA图像分析法和生化... 详细信息

目的建立大鼠动脉钙超负荷（ACO）模型，研究其病理特点。方法分别用原子吸收分光光度法和电子探针微分析法测定模型大鼠血管总钙和平滑肌细胞内钙含量;用扫描电镜和透射电镜观察动脉壁内皮细胞和平滑肌细胞形态;用DNA图像分析法和生化方法分别测定平滑肌细胞DNA含量和动脉壁胶原纤维含量。结果在ACO造型后7天，钙总量测定显示动脉钙含量较正常大鼠增高约15倍，vonKossa染色证实动脉壁有大量钙沉积，电子探针微分析显示平滑肌细胞内钙积聚。扫描电镜和透射电镜观察显示主动脉内皮细胞早期即有严重损伤。ACO后期出现明显的平滑肌细胞增殖、基质成分改变、血管弹性破坏，表现为动脉壁平滑肌细胞DNA平均含量明显上升，进入增殖周期的细胞数目增多，动脉胶原纤维含量逐步升高。动脉功能测定显示弹性下降，僵硬度增高。结论本方法成功诱导大鼠动脉钙超负荷，且该模型在多方面与人类动脉硬化的特点具有相似性。

关键词：钙动脉血管内皮动脉硬化

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