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动物营养学报 2025年第2期37卷 1298-1311页

作者：洪妍刘佳琪杨童寓丹王新霞浙江大学动物科学学院杭州310058 浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室杭州310058 农业农村部动物营养与饲料(华东)重点实验室杭州310058

本试验旨在探究槲皮素对小鼠肌内脂肪沉积的影响及其潜在调节机制。活体试验选取24只7周龄雄性C57BL/6J小鼠,预试7 d后随机平均分为2组,即对照组(NCD组)和槲皮素组(NQ组),每组6个重复,每个重复2只小鼠。NCD组小鼠每日灌胃10μL/g BW的... 详细信息

本试验旨在探究槲皮素对小鼠肌内脂肪沉积的影响及其潜在调节机制。活体试验选取24只7周龄雄性C57BL/6J小鼠,预试7 d后随机平均分为2组,即对照组(NCD组)和槲皮素组(NQ组),每组6个重复,每个重复2只小鼠。NCD组小鼠每日灌胃10μL/g BW的磷酸盐缓冲液(PBS),NQ组小鼠每日灌胃10μL/g BW的槲皮素溶液(10 mg/mL)。试验期42 d,期间所有小鼠均饲喂基础饲粮,自由采食和饮水。试验进行至第29天,向小鼠双侧胫骨前肌注射50%甘油以诱导构建肌肉脂肪浸润模型,并分别于造模后第7和14天取样。细胞试验选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分离并培养小鼠成纤维/成脂祖细胞(FAPs),梯度槲皮素(0、1、5、10、20和40μmol/L)处理,采用鸡尾酒法诱导细胞成脂分化。结果表明:1)100 mg/kg槲皮素抑制小鼠肌内脂肪沉积,但对小鼠体重、采食量和血清甘油三酯含量无显著影响(P>0.05)。2)槲皮素呈剂量依赖性抑制小鼠FAPs分化聚酯。3)槲皮素影响小鼠粪便菌群结构,降低厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidota)等的相对丰度以及厚壁菌门/拟杆菌门值,提高罗姆布茨菌属(Romboutsia)和回肠杆菌属(Ileibacterium)等的相对丰度。4)槲皮素影响小鼠粪便代谢物,差异代谢物富集在氨基酸、脂肪酸和胆汁酸代谢相关通路;其中,与NCD组相比,NQ组粪便精胺、亚精胺和肌苷等代谢物含量显著提高(P<0.05),粪便二十碳五烯酸(EPA)和20-羟基二十碳四烯酸(20-HETE)等代谢物含量显著降低(P<0.05)。5)槲皮素显著提高小鼠胫骨前肌mRNA N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)水平(P<0.05)。综上所述,槲皮素可以显著抑制小鼠肌内脂肪沉积,可能是通过改变小鼠肠道微生物群落结构和相关代谢产物以及肌肉组织m^(6)A甲基化修饰等途径发挥调节作用。

关键词：槲皮素小鼠肌内脂肪肠道微生物代谢物 m^(6)A

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基于非洲猪瘟病毒D250R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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中国兽医科学 2025年

作者：朱文青徐丽华刘佳畦邬雨倩金子安吴旭琪袁秀芳周继勇郑肖娟浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞... 详细信息

D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞表达的重组蛋白Flag-D250R均能被ASFV标准阳性血清识别，证明D250R蛋白是ELISA抗体检测方法的潜在靶标。在此基础上，以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠源多克隆抗体，该抗体ELISA效价大于1∶409 600。Western-blot试验表明该抗体与Flag-D250R和His-D250R均具有良好的反应性，证明His-D250R蛋白具有良好的抗原性。进一步以His-D250R蛋白为包被抗原，通过对抗原包被、封闭、抗体孵育、底物反应等条件的优化，建立间接ELISA抗体检测方法。其阴阳性临界值为0.359，检测PRV、PRRSV、PCV2、CSFV等阳性血清结果均呈阴性反应，灵敏度达1∶3 200，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，与商品化试剂盒符合率达98.8%。上述结果表明，基于His-D250R蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性、重复性良好，具备一定临床应用价值，可以为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。

关键词：非洲猪瘟病毒 D250R蛋白原核表达多克隆抗体间接ELISA

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黑翅土白蚁共生放线菌及其次级代谢产物在农业中的应用研究进展

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浙江大学学报(农业与生命科学版) 2025年第2期51卷 213-227页

作者：刘佳敏冯一璐莫建初李鸿杰宁波大学植物病毒学研究所/农产品质量安全全国重点实验室/农业农村部植保生物技术重点实验室/全省绿色植保重点实验室浙江宁波315211 浙江大学昆虫科学研究所/农业农村部作物病虫害分子生物学重点实验室浙江杭州310058 浙江大学生命科学学院/植被结构功能与建造全国重点实验室浙江杭州310058

放线菌能产生丰富的次级代谢产物,是抗生素、酶和抗氧化剂等生物活性物质的重要来源。随着抗生素耐药性问题的日益严峻,用传统方法从土壤微生物中挖掘新化合物的效率逐渐降低,因此,对新生境微生物及其代谢产物的探索变得日益迫切。近年... 详细信息

放线菌能产生丰富的次级代谢产物,是抗生素、酶和抗氧化剂等生物活性物质的重要来源。随着抗生素耐药性问题的日益严峻,用传统方法从土壤微生物中挖掘新化合物的效率逐渐降低,因此,对新生境微生物及其代谢产物的探索变得日益迫切。近年来,国内外多个研究团队从黑翅土白蚁体内及其蚁巢菌圃中分离并鉴定出具有显著抗菌活性的新型微生物天然产物,并在农业领域表现出广泛的应用前景。本文深入探讨了源自黑翅土白蚁的放线菌菌株的类群多样性、基因组代谢潜能多样性以及次级代谢产物多样性,并重点分析了这些天然产物在多种农业病原菌防控中的应用潜力。此外,本文还展望了将其开发成环保型生物农药的未来研究重点,以期为新型农药的创制提供参考。

关键词：放线菌黑翅土白蚁天然产物基因组挖掘生物农药

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抗菌肽对产蛋高峰期笼养蛋鸭生产性能、蛋品质、血清生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响

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动物营养学报 2025年第1期37卷 375-386页

作者：李茹田勇蒋春青冯伟峰邹晓庭卢立志浙江大学动物科学学院饲料科学研究所浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室农业农村部(华东)动物营养与饲料重点实验室浙江省饲料与动物营养重点实验室杭州310058 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室农业农村部畜禽资源(家禽)评价利用重点实验室家禽种业与绿色养殖技术浙江省工程研究中心杭州310021 金华金婺农业发展有限公司金华321000

本试验旨在探讨笼养蛋鸭产蛋高峰期饲粮中添加不同水平抗菌肽对其生产性能、蛋品质、血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能的影响。选取640羽产蛋率相近的220日龄绍兴鸭,随机分为4组,每组8个重复,每个重复20羽。对照组饲喂基础饲粮,试验... 详细信息

本试验旨在探讨笼养蛋鸭产蛋高峰期饲粮中添加不同水平抗菌肽对其生产性能、蛋品质、血清生化指标、抗氧化能力及免疫功能的影响。选取640羽产蛋率相近的220日龄绍兴鸭,随机分为4组,每组8个重复,每个重复20羽。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加100、200和400 mg/kg抗菌肽。预试期7 d,正试期56 d。结果显示:1)与对照组相比,饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽可显著提高产蛋率(P<0.05),并可显著降低料蛋比(P<0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加100、200和400 mg/kg抗菌肽对各蛋品质指标均无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽可显著提高血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量(P<0.05),并可显著降低血清尿酸含量、谷丙转氨酶活性(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加200和400 mg/kg抗菌肽可显著提高血清总抗氧化能力(P<0.05);饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽可显著提高血清过氧化氢酶活性(P<0.05);饲粮中添加100、200和400 mg/kg抗菌肽均可显著提高血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.05),并可显著降低血清丙二醛含量(P<0.05)。5)与对照组相比,饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽添可显著提高血清免疫球蛋白G和免疫球蛋白M含量(P<0.05)。综上所述,抗菌肽可提高产蛋高峰期笼养蛋鸭的产蛋率,降低料蛋比,增强机体抗氧化能力和免疫功能。在本试验条件下,产蛋高峰期笼养蛋鸭饲粮中添加200 mg/kg抗菌肽较为适宜。

关键词：抗菌肽笼养蛋鸭生产性能蛋品质血清生化指标抗氧化能力免疫功能

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黑翅土白蚁共生放线菌及其次级代谢产物在农业中的应用研究进展

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浙江大学学报(农业与生命科学版) 2025年

作者：刘佳敏冯一璐莫建初李鸿杰宁波大学海洋学院宁波大学植物病毒学研究所浙江省植物保护生物技术国家重点实验室浙江大学昆虫科学研究所/农业农村部作物病虫害分子生物学重点实验室

放线菌能产生丰富的次生代谢物，是抗生素、酶和抗氧化剂等生物活性产物的重要生产者。随着抗生素耐药性问题的日益严重，传统方法从土壤微生物中发掘新化合物的速度放缓，因此，新生境微生物及其代谢产物的挖掘工作变得愈加迫切。近年... 详细信息

放线菌能产生丰富的次生代谢物，是抗生素、酶和抗氧化剂等生物活性产物的重要生产者。随着抗生素耐药性问题的日益严重，传统方法从土壤微生物中发掘新化合物的速度放缓，因此，新生境微生物及其代谢产物的挖掘工作变得愈加迫切。近年来，国内外多个研究团队从黑翅土白蚁中分离并鉴定出具有显著抗菌活性的新型微生物天然产物，并在农业领域表现出广泛的应用潜力。本文深入探讨了黑翅土白蚁来源的放线菌属菌株类群多样性，基因组代谢潜能多样性和次生代谢产物多样性，以及这些天然产物中在多种农业病原菌防控中的应用潜力。同时，本文对其开发成环保型的生物农药的未来研究重点进行了展望，以期为新农药创制提供参考。

关键词：放线菌黑翅土白蚁天然产物基因组挖掘生物农药

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新疆不同连作年限棉田土壤健康评价

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植物营养与肥料学报 2025年第1期31卷 112-124页

作者：陈逸朋李鑫王军葛体达薛娜娜李方方黄敏黄亚萍张文菊武汉理工大学资源与环境工程学院湖北武汉430070 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所/农业农村部耕地质量监测与评价重点实验室/北方干旱半干旱耕地高效利用全国重点实验室北京100081 宁波大学植物病毒学研究所/省部共建农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室浙江宁波315211 新疆农业大学资源与环境学院新疆乌鲁木齐830052

【目的】从土壤性质和微生物群落结构评价新疆地区连作棉花土壤的健康状况,为该区棉花连作生态防治和土壤健康管理提供科学依据。【方法】采集了新疆喀什地区伽师县连作年限在5、7、12、20、25、30年的棉田土壤样品,分析土壤理化性质、... 详细信息

【目的】从土壤性质和微生物群落结构评价新疆地区连作棉花土壤的健康状况,为该区棉花连作生态防治和土壤健康管理提供科学依据。【方法】采集了新疆喀什地区伽师县连作年限在5、7、12、20、25、30年的棉田土壤样品,分析土壤理化性质、胞外酶活性、微生物群落组成和真菌病原体丰度,运用主成分分析法构建最小数据集,以土壤健康指数面积法(SHI-area)评估土壤健康状况,并探讨植物病原体与土壤健康之间的关联性。【结果】随着连作年限的增加,棉田土壤电导率和盐度呈升高趋势,微量元素铁和锰以及与碳、氮和磷循环相关的β-葡萄糖苷酶、纤维二糖水解酶、亮氨酸氨基肽酶和碱性磷酸酶活性随着连作年限的增加而增加。土壤微生物多样性受连作年限的显著影响,其中在连作7年的棉田土壤微生物α多样性较低。经主成分分析筛选,得到全氮、β-葡萄糖苷酶、有效锰、盐度和真菌α多样性(Simpson指数) 5个指标为土壤健康评价的最小数据集。基于该数据集计算得到的土壤健康指数,随连作年限的增加呈先下降(SHIY7=0.07)再逐渐恢复的趋势,在20年恢复到最高点(SHIY20=0.53),但没有超过连作5年时的水平(SHIY5=0.58)。植物真菌病原体丰度与最小数据集计算的土壤健康指数之间呈显著负相关(y=-0.0727x+0.561,R2=0.46,P=0.002)。相关分析表明,全氮含量是影响植物病原体丰度的极显著因素(R=-0.912,P<0.001),真菌优势属Pseudogymnoascus、Gymnoascus和Canariomyces丰度与土壤健康指数呈显著负相关性(R<-0.612,P<0.01)。【结论】土壤健康指数在连作初期不断下降,之后虽然有所恢复,但仍未达到连作5年的水平。土壤全氮、盐度、有效锰、β-葡萄糖苷酶和真菌多样性是评价土壤健康状况的关键指标。植物病原体数量受全氮的抑制而降低,全氮含量随着连作年限的增加,是土壤健康指数恢复性提升的最显著影响因子。电导率和盐度的不断提升也是需要关注并检测的一个指标。

关键词：棉花连作土壤养分胞外酶活性微生物群落土壤健康指数

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丁酸抑制猪流行性腹泻病毒体外复制的分子机制

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浙江农业学报 2025年第03期37卷 579-590页

作者：张楚妮徐计东高钦单颖方维焕李肖梁浙江大学动物科学学院浙江省动物医学重点实验室农业农村部动物病毒学重点实验室浙江大学-新昌联合创新中心(天姥实验室)

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是一种引起高度接触性急性肠道传染病的冠状病毒，严重威胁生猪产业的健康发展。丁酸作为饲料添加剂，在生猪养殖中广泛应用，其不仅作为能量物质，还参与调控基因表达、抗炎... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是一种引起高度接触性急性肠道传染病的冠状病毒，严重威胁生猪产业的健康发展。丁酸作为饲料添加剂，在生猪养殖中广泛应用，其不仅作为能量物质，还参与调控基因表达、抗炎和细胞周期等生命活动，但丁酸在PEDV感染中的作用机制尚不明确。本研究旨在探讨丁酸对PEDV复制的抑制作用及其潜在机制。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹和免疫荧光等技术检测丁酸处理对PEDV复制的影响，利用细胞周期相关蛋白表达分析和流式细胞术，研究PEDV感染对细胞周期的影响与丁酸的调控作用。结果表明：丁酸处理显著抑制了PEDV在猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)中的复制；PEDV感染可以上调细胞周期相关蛋白Cyclin A2的表达，同时诱导细胞S期(DNA合成期)阻滞帮助自身复制。丁酸通过下调Cyclin A2蛋白表达，缓解PEDV诱导的S期阻滞，从而发挥抗病毒作用。综上所述，丁酸通过调控细胞周期，缓解PEDV感染诱导的细胞周期S期阻滞，进而抑制病毒复制。本研究为丁酸在动物生产中作为抗病毒策略的应用提供了理论依据。

关键词：猪流行性腹泻病毒丁酸细胞周期 Cyclin A2 S期阻滞抗病毒作用 IPEC-J2细胞

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鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第1期50卷 137-146页

作者：王圣文张丹邬雨倩周继勇郑肖娟浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 详细信息

载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。

关键词：鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达多克隆抗体亚细胞定位

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非洲猪瘟病毒内囊膜蛋白p17与宿主互作蛋白的初步鉴定

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生物工程学报 2022年第8期38卷 2883-2890页

作者：钟桂芳邓婷娟徐康倪温碧王裴胡伯里周继勇浙江大学动物医学中心/农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的感染导致猪的死亡率高达100%,给养猪业造成毁灭性灾难。因此,开展针对ASFV感染复制的研究有着重大的意义。目前发现ASFV有超过150个开放阅读框,其中D117L基因编码的内囊膜蛋白p17参与病... 详细信息

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的感染导致猪的死亡率高达100%,给养猪业造成毁灭性灾难。因此,开展针对ASFV感染复制的研究有着重大的意义。目前发现ASFV有超过150个开放阅读框,其中D117L基因编码的内囊膜蛋白p17参与病毒二十面体结构的形成,但是对p17调控宿主细胞功能的机制知之甚少。研究通过免疫沉淀技术联合蛋白质谱分析,初步筛选出与ASFV p17潜在的宿主互作蛋白。通过进一步免疫共沉淀技术和激光共聚焦实验确认了p17与线粒体外膜蛋白TOMM70(translocase of outer mitochondrial membrane 70)、热休克蛋白HSPA8(heat shock 70 kDa protein 8)的互作。该研究为进一步探索p17在ASFV感染过程中的功能提供了重要信息。

关键词：非洲猪瘟病毒 p17 免疫沉淀技术质谱互作蛋白

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猪流行性腹泻病毒非结构蛋白nsp9互作宿主蛋白对病毒复制的影响

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生物工程学报 2023年第12期39卷 4824-4836页

作者：施朱桂吴佳瑜朱雅周继勇胡伯里浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)导致仔猪和育肥猪发生急性肠道传染病,是危害养猪业最重要的病原体之一。目前发现PEDV能够编码至少16个非结构蛋白,其中nsp9能够结合至单链RNA中,但是其功能机制还不清楚。本研究... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)导致仔猪和育肥猪发生急性肠道传染病,是危害养猪业最重要的病原体之一。目前发现PEDV能够编码至少16个非结构蛋白,其中nsp9能够结合至单链RNA中,但是其功能机制还不清楚。本研究通过免疫沉淀联合蛋白质谱分析,筛选出潜在的与PEDV nsp9宿主互作蛋白。通过进一步免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)和激光共聚焦技术确认了nsp9与热休克蛋白HSPA8、Toll相互作用蛋白Tollip、热休克蛋白HSPA9、线粒体外膜蛋白TOMM70互作。其中,过表达HSPA8使nsp9的表达量先上调而后下调,并促进PEDV的增殖;过表达Tollip使nsp9的表达量显著上调,并抑制PEDV的增殖;过表达TOMM70使nsp9的表达量显著下调,但对PEDV的增殖无明显影响;过表达HSPA9对nsp9的表达以及PEDV的增殖均无明显影响。该研究为探索nsp9互作蛋白在PEDV感染过程中的功能提供了重要信息。

关键词：猪流行性腹泻病毒非结构蛋白9 免疫沉淀技术质谱技术互作蛋白

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