检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2012年第1期34卷 15-18页

作者：卞学兵曾嘉梅颜焰廖敏周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为研究浙江省禽流感病毒(AIV)的流行病学情况,本实验应用鸡胚传代方法从AIV疫苗免疫鸡群中表现典型呼吸症状的产蛋鸡体内分离1株H9N2亚型AIV A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)。氨基酸序列分析显示,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位... 详细信息

为研究浙江省禽流感病毒(AIV)的流行病学情况,本实验应用鸡胚传代方法从AIV疫苗免疫鸡群中表现典型呼吸症状的产蛋鸡体内分离1株H9N2亚型AIV A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)。氨基酸序列分析显示,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位点226L,M基因出现S31N的突变。遗传进化分析显示,A/Chicken/Jiande/01/2009的M基因和PB2基因属于G1-Like谱系,HA基因、NA基因和NS基因属于Ck/BJ/1/94-Like分支,而NP基因、PA基因和PB1基因属于Ck/SH/F/98-Like谱系。这些资料表明,A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)为一株重排病毒。

关键词：禽流感病毒 H9N2 遗传进化

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围产期奶牛Nod-2受体表达变化及其对中性粒细胞呼吸爆发功能的影响

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中国农业科学 2012年第3期45卷 556-561页

作者：李文文卢政谭勋李君君浙江大学动物科学学院/农业部动物病毒学重点实验室

【目的】围产期奶牛对细菌性疾病的易感性升高。本研究的目的在于探讨Nod-2受体在围产期奶牛中性粒细胞(PMN)中的表达变化及其对PMN细胞呼吸爆发功能的影响,以揭示Nod-2在围产期奶牛免疫机能改变中的作用。【方法】采用RT-PCR法检测围... 详细信息

【目的】围产期奶牛对细菌性疾病的易感性升高。本研究的目的在于探讨Nod-2受体在围产期奶牛中性粒细胞(PMN)中的表达变化及其对PMN细胞呼吸爆发功能的影响,以揭示Nod-2在围产期奶牛免疫机能改变中的作用。【方法】采用RT-PCR法检测围产期和非围产期泌乳奶牛外周PMN细胞中Nod-2 mRNA的表达变化;全血分别用佛波醇酯(PMA)和Nod-2受体特异性配体胞壁酰基二肽MDP刺激,采用流式细胞仪检测PMN呼吸爆发功能。【结果】围产期奶牛PMN细胞Nod-2 mRNA表达量显著低于非围产期奶牛(P<0.05);受PMA刺激后,围产期奶牛PMN呼吸爆发功能显著低于非围产期奶牛(P<0.05);受MDP刺激后,围产期奶牛PMN呼吸爆发功能亦较非围产期奶牛下降。【结论】围产期奶牛对细菌性疾病易感性升高可能与Nod-2 mRNA表达下调有关。

关键词：奶牛中性粒细胞 Nod-2受体

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鹅圆环病毒感染性克隆的构建及其转染试验

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病毒学报 2012年第1期28卷 29-34页

作者：徐雅萍田敬袁海霞郭婧孙红霞栗文文陈维虎余旭平浙江大学动物科学学院农业部动物病毒学重点实验室杭州310058 浙江省象山县畜牧兽医总站浙江宁波315700

设计带BamHⅠ酶切标记位点的引物,PCR扩增鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pGEM-T Easy载体中,获得GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆质粒pGEMT-2GoCV。EcoRⅠ酶切线性化pGEMT-2GoCV,与脂... 详细信息

设计带BamHⅠ酶切标记位点的引物,PCR扩增鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pGEM-T Easy载体中,获得GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆质粒pGEMT-2GoCV。EcoRⅠ酶切线性化pGEMT-2GoCV,与脂质体混合转染GoCV阴性鹅胚和雏鹅,常规PCR检测发现GoCV在转染鹅体内增殖,鹅胚转染组于孵出第2周和第4周检出血清阳性,且其中一个个体于4周龄扑杀时检出法氏囊阳性,雏鹅转染组于转染后2周检出血清阳性。试验进一步对扩增片段进行了BamHⅠ标记位点的检测,并应用GoCV实时荧光定量PCR方法对转染阳性样品进行了定量,结果显示阳性法氏囊组织中病毒含量为1.57×106拷贝/mg,阳性血清含病毒拷贝数在3.52×104～5.92×105拷贝/μL。综上,本试验构建的GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆DNA可以转染鹅胚和雏鹅并增殖出带标记的GoCV克隆。

关键词：鹅圆环病毒全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆转染

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传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp5在真核细胞中的重组表达及鉴定

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中国动物传染病学报 2012年第2期20卷 11-16页

作者：耿阳牟小东刘然边葶苈廖敏周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室杭州310058

本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞,获得nsp5重组杆状病毒,经(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot检测到转染细胞表达的nsp5蛋白。进一步从感染的细胞中纯化重组蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠制备了抗nsp5的多抗血清,该多抗血清可检测到IBV四川株SC021202感染的DF-1细胞中特异性的nsp5蛋白。结果表明IBV nsp5在Bac-to-Bac真核表达系统中获得了成功表达,而且具有良好的免疫原性和反应原性。

关键词：传染性支气管炎病毒非结构蛋白5 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

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鸡伴侣素CCTβ基因的克隆及真核表达质粒构建

鸡伴侣素CCTβ基因的克隆及真核表达质粒构建

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：贾璐吴永平周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室

前言CCT是在真核细胞胞浆中发现的一种伴侣素,在包括肌动蛋白、微管蛋白在内的多种蛋白的组装和折叠过程中发挥重要作用。CCT的结构较为复杂,由两个环状结构叠加而成,每个环又由八个亚基(CCTα,β,γ,δ,ε,ζ,η,θ)按照一定的顺序排... 详细信息

前言CCT是在真核细胞胞浆中发现的一种伴侣素,在包括肌动蛋白、微管蛋白在内的多种蛋白的组装和折叠过程中发挥重要作用。CCT的结构较为复杂,由两个环状结构叠加而成,每个环又由八个亚基(CCTα,β,γ,δ,ε,ζ,η,θ)按照一定的顺序排布构成。本研究成功克隆了鸡伴侣素CCTβ基因,并构建了鸡伴侣素CCTβ基因真核表达载体,为深入研究鸡伴侣素CCTβ的生物学功能奠定了基础。材料与方法根据已发表的鸡CCTβ亚基序列设计一对特异性引物(sense:5'-CGGAATTCATGGCATCCATITC-

关键词：伴侣素 CCT 真核表达质粒

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鸡传染性支气管炎病毒不同基因型毒株的通用或鉴别RT-PCR方法的建立

鸡传染性支气管炎病毒不同基因型毒株的通用或鉴别RT-PCR方法的建...

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：牟小东廖敏周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室

前言禽传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis vi-rus,IBV)引起的鸡急性、高度接触性传染病。随着IBV分离鉴定技术的发展,包括病毒分离、血清学检测、分子生物学诊断等技术都趋于成... 详细信息

前言禽传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis vi-rus,IBV)引起的鸡急性、高度接触性传染病。随着IBV分离鉴定技术的发展,包括病毒分离、血清学检测、分子生物学诊断等技术都趋于成熟。但是病毒

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 RT-PCR 不同基因型

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免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染及H9N2亚型病毒进化分析

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中国动物传染病学报 2012年第2期20卷 65-70页

作者：曾嘉梅房栋卞学兵王俊桦颜焰周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室杭州310058 浙江大学传染病诊治国家重点实验室杭州310003

本研究分析了免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染中H9N2亚型分离毒株A/chicken/Yuyao/01/2010(H9N2)的基因组特征。氨基酸序列分析显示,HA蛋白裂解位点为PSRSSR/GL,具有低致病性禽流感病毒特征,HA受体结合位点出现了人流感病毒... 详细信息

本研究分析了免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染中H9N2亚型分离毒株A/chicken/Yuyao/01/2010(H9N2)的基因组特征。氨基酸序列分析显示,HA蛋白裂解位点为PSRSSR/GL,具有低致病性禽流感病毒特征,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位点226L,D基因出现了S31N的突变。遗传分析表明,A/chicken/Yuyao/01/2010病毒的HA基因、NA基因和NS基因在进化上属于CK/BJ/94-Like谱系,D基因和PB2基因属于G1-Like谱系,NP基因、PA基因和PB1基因属于Ck/SH/F/98-Like谱系。结果表明,从H5N1和H9N2亚型混合感染鸡体内分离的H9N2亚型禽流感病毒是一株来源于CK/BJ/94-Like谱系、G1-Like谱系和Ck/SH/F/98-Like谱系的重组病毒。

关键词：禽流感混合感染 H9N2 分子进化分析

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狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒系统的表达及鉴定

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中国动物传染病学报 2012年第2期20卷 17-22页

作者：许运斌徐洁萍张金阳昝洁阮系真周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室杭州310029 浙江大学传染病诊治国家重点实验室杭州310003

为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重... 详细信息

为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重组质粒pFastBacHTA-P转染的Sf9细胞中出现了分子量约为42 kDa的蛋白条带,Western blot证实分子量约为42 kDa的蛋白能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)分析进一步显示Sf9细胞表达的P蛋白与抗P蛋白单克隆抗体能特异性结合。这些实验证明,狂犬病病毒P蛋白不仅在Sf9细胞中获得表达,而且具有良好的免疫反应性。狂犬病病毒P蛋白杆状病毒表达体系的建立,为蛋白结构的解析和诊断试剂的研制奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒 P蛋白杆状病毒表达系统

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VP5蛋白是IBDV感染细胞的表面分子标记

VP5蛋白是IBDV感染细胞的表面分子标记

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中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会

作者：吴永平周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室浙江农林大学动物科技学院

前言传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组由A和B两个节段的双链RNA组成。A节段含有大、小两个重叠的开放性阅读框架(ORFs),VP5蛋白由小ORF编码。VP5蛋白是一个Ⅱ型跨膜蛋白,有报道称VP5蛋白在病毒的致病性方面起重要作用。Yao等证明VP5蛋白... 详细信息

前言传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组由A和B两个节段的双链RNA组成。A节段含有大、小两个重叠的开放性阅读框架(ORFs),VP5蛋白由小ORF编码。VP5蛋白是一个Ⅱ型跨膜蛋白,有报道称VP5蛋白在病毒的致病性方面起重要作用。Yao等证明VP5蛋白能诱导细胞凋亡。此外,研究发现VP5可能与子代病毒的释放有关。VP5的特异性单克隆抗体对VP5功能的探索是一个十分必要的检测工具。本研究的主要目的是获得稳定分泌

关键词： VPS 特异性单克隆抗体 VP5 法氏囊感染细胞分子标记

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传染性法氏囊病病毒感染鸡法氏囊的比较蛋白质组学研究

传染性法氏囊病病毒感染鸡法氏囊的比较蛋白质组学研究

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2012第四届中国兽药大会

作者：吴永平周继勇浙江大学，农业部动物病毒学重点实验室，浙江杭州 310058 浙江农林大学动物科技学院，浙江杭州临安市环城北路88号 311300 浙江大学，农业部动物病毒学重点实验室，浙江杭州 310058

为了从分子水平分析病毒与宿主之间的相互作用，应用差异蛋白质组学方法对IBDV感染鸡后法氏囊组织蛋白的动态表达变化进行了研究分析。二维凝胶的差异表达分析显示，鸡感染IBDV后，法氏囊组织共有96个蛋白点出现了显著的差异表达。采用M... 详细信息

为了从分子水平分析病毒与宿主之间的相互作用，应用差异蛋白质组学方法对IBDV感染鸡后法氏囊组织蛋白的动态表达变化进行了研究分析。二维凝胶的差异表达分析显示，鸡感染IBDV后，法氏囊组织共有96个蛋白点出现了显著的差异表达。采用MALDI-TOF／TOF质谱法对差异表达蛋白点进行质谱鉴定，结果成功鉴定了65个表达差异显著的蛋白点，对应54种蛋白，包括12种表达上调蛋白和42种表达下调的蛋白。对鉴定蛋白的功能分析表明，这些差异蛋白主要涉及细胞骨架网络、应激反应、大分子合成、能量代谢、泛素-蛋白酶体通路、信号传导通路及一些功能未知的蛋白的变化，这些差异蛋白可能通过不同途径参与了IBDV感染机体的过程并发挥着不同的功能。这些差异蛋白的鉴定为进一步揭示IBDV致病的分子机制提供了丰富的实验数据和有用线索，对发现和开发潜在的生物标记分子提供了重要参考。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒病毒感染法氏囊组织差异蛋白质组学

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