检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2023年第1期39卷 153-160页

作者：朱梦霏李忠斐张焕东彭莉董伟仁周继勇廖敏浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室杭州310058

本研究利用原核表达系统成功表达禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)的小囊膜蛋白(Envelope protein, E),并首次制备E蛋白的单克隆抗体。在此基础上,采用免疫共沉淀(IP)及质谱鉴定的方法,寻找宿主细胞中与IBV E蛋... 详细信息

本研究利用原核表达系统成功表达禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)的小囊膜蛋白(Envelope protein, E),并首次制备E蛋白的单克隆抗体。在此基础上,采用免疫共沉淀(IP)及质谱鉴定的方法,寻找宿主细胞中与IBV E蛋白发生相互作用的宿主蛋白。通过GO分析和KEGG通路富集分析,预测与IBV E蛋白具有潜在互作的宿主蛋白在病毒感染过程中可能发挥的生物学功能。本研究为进一步探讨E蛋白在IBV病毒复制过程中的具体作用提供了研究工具和基础研究数据。

关键词：传染性支气管炎病毒小囊膜蛋白单克隆抗体相互作用

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不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白可溶性表达及免疫反应性比较

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2023年第6期49卷 873-880页

作者：冯梦珂王星博林璐璐崔明仙颜焰周继勇浙江大学动物医学中心浙江杭州310058 农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a... 详细信息

本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较纯化蛋白的免疫反应性。结果显示,pCold-TF载体以表达可溶性蛋白为主,pMAL-C6T载体同时表达包涵体和可溶性蛋白,而其他载体主要表达包涵体蛋白。临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清检测数据显示,可溶性蛋白的免疫反应性显著优于包涵体蛋白(P<0.05)。pCold-TF载体的触发因子(trigger factor,TF)标签可促进CD2v蛋白的可溶性表达,其表达蛋白的免疫反应性优于包涵体蛋白。本研究结果为CD2v蛋白的免疫原性研究奠定了基础,亦为其他重要抗原的可溶性表达提供了思路。

关键词：非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白原核表达可溶性表达免疫反应性

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鹌鹑源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定及其生物学特性研究

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病毒学报 2016年第1期32卷 70-76页

作者：于杨斯玮瑛袁庄川颜焰周继勇浙江大学农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

本研究从人感染H7N9活禽交易市场的鹌鹑体内分离到1株H9N2亚型流感病毒并命名为A/Quail/Hangzhou/1/2013(H9N2),并分析了该毒株的基因组特性及其对鸡的致病力。序列分析结果显示:基因组中HA、NS基因属于类CK/BJ/1/94分支,NA、NP、PA、PB... 详细信息

本研究从人感染H7N9活禽交易市场的鹌鹑体内分离到1株H9N2亚型流感病毒并命名为A/Quail/Hangzhou/1/2013(H9N2),并分析了该毒株的基因组特性及其对鸡的致病力。序列分析结果显示:基因组中HA、NS基因属于类CK/BJ/1/94分支,NA、NP、PA、PB1基因属于类SH/F/98分支,M和PB2属于类G1/97分支。关键氨基酸位点分析结果显示:HA的裂解位点为PSRSSR↓GL,HA蛋白具有人样流感病毒受体结合位点Leu226,NA颈部出现63-65位氨基酸的缺失,M2蛋白Asn31和NS1蛋白Ser42、Ala149发生了突变。该毒株的IVPI为0.36。雏鸡感染性试验的结果显示:所有接种鸡在感染后的第3天从呼吸道和消化道都可检测到排毒,直至第11天停止排毒。同居感染动物于放入后的第2天达到排毒高峰,排毒率为100%,持续至第8天停止排毒。感染动物的病毒再分离结果显示:肺和气管的带毒时间可达5天,其他组织为3天。以上结果表明:该毒株是一株H9N2大陆流行谱系的低致病性禽流感病毒。本研究为H9N2亚型禽流感病毒的预防和监控提供了一定的理论依据。

关键词：禽流感 H9N2亚型进化树感染性

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伪狂犬病病毒Ⅱ型感染PK-15细胞的转录组学分析

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农业生物技术学报 2021年第10期29卷 2008-2015页

作者：李海敏俞天奇金玉兰顾金燕周继勇浙江大学动物医学中心/农业农村部动物病毒学重点实验室

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)感染猪(Sus scrofa)可引起烈性接触性传染病,即伪狂犬病(Pseudorabies, PR),临床上主要通过疫苗免疫进行防控。PRV变异株(PRVⅡ型)的流行使传统疫苗失去有效保护。近年来出现PRV跨宿主感染人(Homo... 详细信息

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)感染猪(Sus scrofa)可引起烈性接触性传染病,即伪狂犬病(Pseudorabies, PR),临床上主要通过疫苗免疫进行防控。PRV变异株(PRVⅡ型)的流行使传统疫苗失去有效保护。近年来出现PRV跨宿主感染人(Homo sapiens)的案例,更使PRV成为全球公共卫生威胁,但其感染致病机制仍不完全清楚。为从分子水平上全面了解PRV感染宿主细胞引起的变化,本研究以PRVⅡ型毒株PRV-DX感染猪肾细胞PK-15,通过高通量测序获得PRV感染后全部的细胞差异转录组数据,并对差异表达基因进行功能富集。结果表明,PRV-DX感染PK-15可引起3 595条基因表达上调、3 604条基因表达下调。通过qPCR验证随机选择的12条差异表达基因,其变化趋势与转录组数据一致。GO注释和KEGG信号通路富集将差异表达基因聚焦在代谢、基因表达、免疫等信号通路。本研究为深入解析PRV感染的致病机制提供了重要基础数据及研究方向。

关键词：伪狂犬病病毒Ⅱ型(PRVⅡ) 高通量测序差异转录组

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A型流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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中国兽医科学 2020年第7期50卷 845-851页

作者：钟亦晔石柳媛王星博杨辉颜焰廖敏周继勇浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

以A型流感病毒A/Chicken/Zhejiang/YH/2/2013(H7N9)的PB1基因为模板,扩增其1519~2274bp间的片段,并构建原核表达载体pET-28a(+)-H7N9-sPB1。通过大肠杆菌原核表达获得重组蛋白His-sPB1后,以其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合筛选获得3株能够稳定分泌单克隆抗体的细胞株5G5、2H3和5E8。Western-blot和IFA检测表明,3株单克隆抗体对于不同亚型的流感病毒均具有良好的反应性。免疫共沉淀结果表明,3株单克隆抗体能用于免疫共沉淀试验。A型流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的制备为进一步研究PB1蛋白的结构与功能以及流感病毒的监测与诊断提供了必要的工具。

关键词：流感病毒 H7N9 PB1 单克隆抗体

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HSP90AB1与IBV S1蛋白互作调节病毒吸附的研究

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中国兽医科学 2023年第8期53卷 983-990页

作者：张焕东方承秀林翠董伟仁周继勇廖敏浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种... 详细信息

前期的免疫沉淀和质谱鉴定分析表明,HSP90AB1是禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的潜在互作宿主蛋白。本研究在此基础上探讨HSP90AB1与IBV S1蛋白的相互作用及其对IBV吸附宿主细胞的影响。免疫共沉淀试验显示,宿主HSP90AB1蛋白可与多种IBV毒株的S1蛋白发生互作,Gst-pull-down试验证明,HSP90AB1与M41株S1蛋白的互作属于直接互作。进一步的免疫沉淀试验表明,细胞膜HSP90AB1与内源性S1蛋白同样具有互作关系。进一步研究发现过表达HSP90AB1会促进IBV Beaudette对Vero细胞的吸附,而敲低HSP90AB1则抑制病毒吸附H1299细胞;使用商品化的HSP90AB1家兔单克隆抗体预处理Vero细胞则抑制了病毒的吸附;用HSP90AB1蛋白阻断结合位点使病毒吸附细胞的能力显著降低。以上结果表明,HSP90AB1对IBV吸附细胞具有正调节作用,其可能是IBV入侵细胞的一个关键宿主因子。

关键词：禽传染性支气管炎病毒热休克蛋白HSP90AB1 S1蛋白病毒吸附

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2018–2019年安徽地区H9N2亚型禽流感病毒进化分析

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中国动物传染病学报 2020年第4期28卷 58-64页

作者：张锐盛豪倪温碧卞希一颜焰廖敏周继勇浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室杭州310058

为调查H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽地区养殖场中的流行变异情况,本研究采用RT-PCR方法对2018-2019年采集自安徽养殖场的2763份样品进行AIV的检测,并采用鸡胚接种分离病毒的方法从核酸阳性样品中进行病毒分离。结果显示:从阳性样品分... 详细信息

为调查H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在安徽地区养殖场中的流行变异情况,本研究采用RT-PCR方法对2018-2019年采集自安徽养殖场的2763份样品进行AIV的检测,并采用鸡胚接种分离病毒的方法从核酸阳性样品中进行病毒分离。结果显示:从阳性样品分离获得5株H9N2毒株;5株H9N2分离株的HA裂解位点为PSRSSRGLF,符合低致病性禽流感病毒的序列特征,HA受体结合位点234位氨基酸为亮氨酸(Leu),具有与哺乳动物唾液酸受体结合的特征,HA蛋白在313位具有潜在的糖基化位点,M2蛋白发生S31N突变;5株H9N2分离株的HA、NA基因属于Y280-like分支,PB2、M基因属于G1-like分支,PB1、PA、NP、NS基因属于F/98-like分支。本研究结果为禽流感疫苗研发提供了流行病学参考。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型遗传进化分析

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HSP90AB1蛋白对禽传染性支气管炎病毒复制的影响

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中国兽医科学 2020年第9期50卷 1112-1118页

作者：朱朋朋彭兴张锐周继勇廖敏浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

采用过表达及RNA干扰的研究方法,探究宿主热休克蛋白HSP90AB1对禽传染性支气管炎病毒(AIBV)复制的影响。结果显示,过表达HSP90AB1蛋白可以抑制AIBV的复制,而敲低HSP90AB1可以促进AIBV的复制。结果表明,宿主HSP90AB1蛋白是一个潜在的抗... 详细信息

采用过表达及RNA干扰的研究方法,探究宿主热休克蛋白HSP90AB1对禽传染性支气管炎病毒(AIBV)复制的影响。结果显示,过表达HSP90AB1蛋白可以抑制AIBV的复制,而敲低HSP90AB1可以促进AIBV的复制。结果表明,宿主HSP90AB1蛋白是一个潜在的抗病毒因子。该研究为进一步探究AIBV的致病机制和抗冠状病毒感染研究奠定了基础。

关键词：传染性支气管炎病毒热休克蛋白HSP90AB1 病毒复制

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2019—2021年浙江地区H9N2亚型禽流感病毒的进化分析

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中国兽医科学 2022年第9期52卷 1157-1164页

作者：倪温碧崔明仙颜焰胡伯里周继勇浙江大学农业农村部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为调查H9N2亚型禽流感病毒在浙江地区的流行变异情况,采用RT-PCR方法对采集自浙江多个集散中心的共475份样品进行检测,并采用鸡胚接种分离病毒的方法从核酸阳性的样品中进行病毒分离。结果显示,从阳性样品中分离获得3株H9N2毒株,其HA裂... 详细信息

为调查H9N2亚型禽流感病毒在浙江地区的流行变异情况,采用RT-PCR方法对采集自浙江多个集散中心的共475份样品进行检测,并采用鸡胚接种分离病毒的方法从核酸阳性的样品中进行病毒分离。结果显示,从阳性样品中分离获得3株H9N2毒株,其HA裂解位点均为PSRSSRGLF,符合低致病性禽流感病毒的序列特征,HA受体结合位点第234位氨基酸为亮氨酸,具有与哺乳动物唾液酸受体结合的特征;3株分离株均增加了第313位糖基化位点。结果表明,3株H9N2分离株的HA、NA基因均属于Y280-like分支,PB2、M基因均属于G1-like分支,PB1、PA、NP、NS基因均属于F/98-like分支。本研究结果为禽流感疫苗研发提供了流行病学参考。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型遗传进化分析

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3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析

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畜牧兽医学报 2022年第11期53卷 4116-4122页

作者：崔明仙王星博黄彦铭卞希一冯梦珂颜焰董伟仁周继勇浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室杭州310058

旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,... 详细信息

旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,其HA和NA基因相似性分别为93.4%~100%和94.0%~99.9%,分离株内部基因片段来源复杂,与H1N2、H1N4、H10N7等亚型亲缘关系密切;遗传进化分析显示,H3N2亚型AIV主要流行于华东地区,鸭是其主要宿主,3株H3N2亚型分离株HA和NA基因均属于禽源进化分支;分离株HA蛋白裂解位点均为PEKQTR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒特征,HA蛋白与受体结合相关位点为226Q和228G,PB2蛋白与哺乳动物适应性相关的氨基酸位点为627E,均不同于人流感病毒对应蛋白的相关位点(226L、228S和627K),推测其跨种传播至人的潜力较低;分离株PB1蛋白的66位氨基酸突变为S,提示其对哺乳动物的致病性可能增强。综上所述,本研究分离的H3N2亚型AIV符合低致病性禽流感病毒特征,基因片段来源复杂,跨种传播至人的潜力较低,但是否影响对宿主的致病性仍需进一步探究。

关键词： H3N2亚型禽流感病毒浙江地区遗传进化氨基酸变异

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