检索结果-内蒙古大学图书馆

畜牧兽医学报 2021年第6期52卷 1652-1661页

作者：史喜绢刘原子张大俊侯景申超超杨博张婷袁兴国任瑞瑞杜晓华张克山郑海学刘湘涛甘肃农业大学动物医学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞... 详细信息

前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞因子的影响。FMDV-O感染PK-15细胞,利用RT-qPCR和Western blot分别在转录和翻译水平探究FMDV-O感染对内源性CTSS表达的影响;使用CTSS活性检测试剂盒测定FMDV-O感染对CTSS酶活性的影响;根据GenBank公布的 CTSS 基因序列(XM_021089893.1)构建CTSS真核表达质粒,利用脂质体方法转染PK-15细胞,通过Western blot检测CTSS表达情况,并在此基础上通过Western blot和RT-qPCR检测过表达CTSS对FMDV-O复制及FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子mRNA水平的影响;进一步针对CTSS设计合成3对特异性siRNA,利用Western blot和RT-qPCR检测CTSS和FMDV-O的变化。结果表明,FMDV-O感染PK-15细胞能显著上调猪源CTSS表达并增强CTSS酶活性;过表达CTSS能抑制FMDV-O在 PK-15 细胞中复制,这种抑制作用可能是通过促进FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子产生而发挥功能的;干扰序列siRNA-2947下调内源性CTSS表达进而促进FMDV-O的复制。猪源CTSS促进宿主抗病毒细胞因子产生可能是抑制FMDV-O复制的原因之一,本研究为深入探究宿主CTSS在抗FMDV天然免疫应答中的作用及机制提供依据。

关键词：组织蛋白酶S FMDV-O PK-15细胞抗病毒功能

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对猪繁殖与呼吸综合征病毒易感的Marc-145细胞克隆株的筛选

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畜牧与兽医 2020年第11期52卷 67-71页

作者：谢佳芮寇美玲陈培富苗海生云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室/农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650224

为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Marc-145细胞中的增殖效价,本研究旨在筛选出一株对该病毒易感度高的Marc-145细胞株。采用有限稀释法从母代细胞中分离单细胞克隆株,通过... 详细信息

为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在Marc-145细胞中的增殖效价,本研究旨在筛选出一株对该病毒易感度高的Marc-145细胞株。采用有限稀释法从母代细胞中分离单细胞克隆株,通过RT-PCR的方法测定毒株在克隆细胞上的核酸量,通过TCID50检测毒株对克隆细胞株的易感性,同时进行细胞生长曲线绘制。结果表明,获得2-D4、2-E6、2-C8、2-G9、2-H11株共5株Marc-145克隆细胞。接毒72 h后,2-D4、2-E6、2-C8和2-H11株细胞出现明显细胞病变,2-G9株和母代细胞培养上清液核酸检测呈阳性,但未出现细胞病变。同时,2-D4株对PRRSV毒株高度易感,该克隆细胞的分裂增殖能力要强于其他克隆株。综合上述试验结果,2-D4株更适宜于PRRSV培养,因此采用有限稀释法筛选对PRRSV易感的Marc-145细胞是一种可行的科学研究方法。

关键词：单细胞克隆 Marc-145细胞有限稀释法 PRRSV 易感株

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不同ELISA试剂盒检测感染猪口蹄疫病毒3ABC抗体效果比较

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动物医学进展 2019年第2期40卷 39-44页

作者：王文莉刘华南卢炳州赵俊皓徐守兴胡永浩郑海学张克山刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗... 详细信息

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗体全部转为阳性;3种试剂盒检测最早3ABC抗体与症状对应关系有差异,每两种商业试剂盒呈现不同程度的相关性。其中A试剂盒显示出最大的灵敏度,而B试剂盒显示最高的特异性,C试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化,因此对3种试剂盒进行比较,发现A试剂盒更稳定,更适合于猪FMDV非结构蛋白抗体检测。

关键词：口蹄疫病毒 3ABC抗体酶联免疫吸附试验猪

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小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2019年第10期49卷 1277-1282页

作者：周岩岩李玲霞吴锦艳余树芳李娇阳刘丹冯倩孙晶晶何苗魏凡华尚佑军宁夏大学农学院宁夏银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化... 详细信息

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达。结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好。这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性。

关键词：小反刍兽疫病毒 N基因原核表达

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不同试剂盒检测接种FMDV的牛非结构蛋白抗体结果及分析

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畜牧与兽医 2018年第9期50卷 56-62页

作者：王文莉赵俊皓刘华南卢炳州魏南南张学刚郑海学胡永浩张克山甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/国家口蹄疫参考实验室.甘肃兰州730046

选取国内外3家不同的研发公司的甲、乙、丙3种试剂盒,利用ELISA方法分别检测了接种A型与O型口蹄疫病毒的牛口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白3ABC抗体的变化规律。结果：接种A型与O型口蹄疫病毒的牛在感染后第3天发病,这与最早检测出阳性的... 详细信息

选取国内外3家不同的研发公司的甲、乙、丙3种试剂盒,利用ELISA方法分别检测了接种A型与O型口蹄疫病毒的牛口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白3ABC抗体的变化规律。结果：接种A型与O型口蹄疫病毒的牛在感染后第3天发病,这与最早检测出阳性的时间相一致,至第9天3ABC抗体全部为阳性;接种A型口蹄疫病毒的牛与接种O型口蹄疫病毒的牛3ABC非结构蛋白抗体应答有差异。选取的3种试剂盒检测显示,每2种试剂盒呈现不同程度的相关性,并且甲试剂盒显示出最大的灵敏度,而乙试剂盒显示最大的特异性,丙试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化。因此,对3种试剂盒进行比较发现甲试剂盒更稳定,更适合于检测。

关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白 3ABC抗体

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中国建立国家公园体制的科学内涵

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大自然 2019年第1期40卷 1-1页

作者：马建章国家林业局猫科动物研究中心林业部野生动物保护生物学重点开放实验室学术委员会浙江大学教育部濒危动物遗传学与繁殖生物学重点开放实验室学术委员会农业部北方鱼类生物工程育种实验室学术委员会国务院学科评审组

国家公园并不是一个新概念,世界自然保护联盟保护地分类中的第二类便是国家公园。著名的美国黄石国家公园建立于1872年,是世界上第一个国家公园,目前全球有超过6000个符合世界自然保护联盟定义的国家公园。2013年11月,党的十八届三中全... 详细信息

国家公园并不是一个新概念,世界自然保护联盟保护地分类中的第二类便是国家公园。著名的美国黄石国家公园建立于1872年,是世界上第一个国家公园,目前全球有超过6000个符合世界自然保护联盟定义的国家公园。2013年11月,党的十八届三中全会提出建立国家公园体制,将其作为我国生态文明建设的重要内容。国家公园体制的建立不仅是制度创新,更是社会治理和发展理念的伟大创新。

关键词：黄石国家公园科学内涵体制世界自然保护联盟中国生态文明建设制度创新保护地

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2014-2015年我国MCCP血清流行病学调查与分析

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中国兽医学报 2017年第6期37卷 1046-1049,1058页

作者：吴锦艳陈妍王光祥尹双辉田宏栾志舫臧金凤王耀杰尚佑军张志东刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046兰州730070 河北农业大学动物医学院河北保定071001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

山羊支原体肺炎(CCPP)为选择性免疫项目,只有受到威胁时才紧急免疫接种,导致该病的流行日趋严重,通过对2014-2015年我国12个省42个地区山羊支原体肺炎山羊亚种(MCCP)血清抗体水平的监测分析我国目前MCCP的流行趋势、流行原因。被调查的... 详细信息

山羊支原体肺炎(CCPP)为选择性免疫项目,只有受到威胁时才紧急免疫接种,导致该病的流行日趋严重,通过对2014-2015年我国12个省42个地区山羊支原体肺炎山羊亚种(MCCP)血清抗体水平的监测分析我国目前MCCP的流行趋势、流行原因。被调查的878份血清样品中,有112份为抗体阳性,平均阳性率12.76%。目前除山西省没有检测到MCCP血清抗体外,其余省份均有MCCP的流行,其中河南、河北、山东3个省份抗体阳性率最高,分别为35.14%(13/37),27.5%(11/40)及22.5%(9/40);江苏省是阳性率最低的省份,阳性率为2.7%(1/37);定性分析结果显示:当血清效价达到1∶16时,112份阳性中,30份可判定为"++++",42份为"+++";对18份强阳性血清样品定量分析结果显示:CCPP血清抗体效价最高可达1∶256。可见,2014-2015年间,MCCP引起的CCPP在我国流行非常严重,尤其河南、河北、山东等省份,不仅为准确评估MCCP在我国现阶段的流行状况以及造成的危害提供参考,也为有效防控该病提供技术支撑。

关键词： MCCP 血清学调查与分析 2014-2015年

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贵州生态保护的初心与梦想

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大自然 2018年第2期39卷 1-1页

作者：马建章中国工程院国家林业局猫科动物研究中心林业部野生动物保护生物学重点开放实验室学术委员会浙江大学教育部濒危动物遗传学与繁殖生物学重点开放实验室学术委员会农业部北方鱼类生物工程育种实验室学术委员会

时光如梭。2017年贵州专刊的美文犹在眼前，第三届“美丽中国·跨界科考”专题系列报道又扑面而来。从习水到梵净山，《大自然》又一次带领读者领略了贵州的地质奇书、缤纷植被、人文景观。黔地那些草木花卉、翩翩彩蝶、幽境茶香，... 详细信息

时光如梭。2017年贵州专刊的美文犹在眼前，第三届“美丽中国·跨界科考”专题系列报道又扑面而来。从习水到梵净山，《大自然》又一次带领读者领略了贵州的地质奇书、缤纷植被、人文景观。黔地那些草木花卉、翩翩彩蝶、幽境茶香，以及孕育这些有趣画面的多样而丰富的生态资源，在这辑专栏中栩栩如生，给人以耳目一新之感。

关键词：生态保护贵州专题系列人文景观草木花卉生态资源梵净山大自然

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表达EGFP报告基因口蹄疫病毒亚基因组复制子的构建

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微生物学通报 2016年第8期43卷 1746-1752页

作者：袁红李平花袁子文白兴文孙普马雪青李坤寻广谨卢曾军包慧芳陈应理曹轶梅付元芳张婧刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

【目的】构建含有EGFP报告基因的口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子系统。【方法】利用融合PCR方法,将EGFP报告基因替换O型FMDV全长c DNA克隆中的前导蛋白Lb和结构蛋白P1基因,构建含有EGFP报告基因的FMDV亚基因组复制子FMDV-EGFP。复制子... 详细信息

【目的】构建含有EGFP报告基因的口蹄疫病毒(FMDV)亚基因组复制子系统。【方法】利用融合PCR方法,将EGFP报告基因替换O型FMDV全长c DNA克隆中的前导蛋白Lb和结构蛋白P1基因,构建含有EGFP报告基因的FMDV亚基因组复制子FMDV-EGFP。复制子质粒连续转化、测序检验复制子载体的稳定性。Not I线性化的复制子FMDV-EGFP用脂质体介导法转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞后,不同时间段观察EGFP荧光表达情况。转染的细胞用流式、间接免疫荧光、RT-PCR和Western blot检测该复制子载体的自主复制能力和口蹄疫病毒蛋白的表达情况。【结果】复制子质粒的连续转化及测序表明报告基因可以稳定存在。FMDV-EGFP复制子转染BSR/T7细胞3 h后在荧光显微镜下能够看到绿色荧光,EGFP荧光信号随着转染时间的延长逐渐增加,并且荧光信号可持续6 d以上。转染24 h后的细胞流式分析显示转染的细胞中有6.0%发出荧光,说明构建的复制子载体能够有效表达EGFP蛋白。另外,间接免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法也检测到该复制子RNA在BSR/T7细胞中能够进行自主复制,并且能够表达病毒的非结构蛋白。【结论】含有EGFP报告基因的FMDV亚基因组复制子的成功构建为进一步研究病毒复制、翻译机制及筛选抗病毒药物等奠定了坚实的基础。

关键词： EGFP 口蹄疫病毒复制子

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一株A型口蹄疫流行毒株全序列的测定及其全长感染性克隆的构建

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微生物学通报 2016年第9期43卷 2019-2027页

作者：袁子文李平花孙普白兴文袁红马雪青卢曾军刘在新魏彦明甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

【目的】测定一株A型口蹄疫流行毒株的全基因组序列,并构建其全长感染性克隆。【方法】参照已公布的A型口蹄疫病毒序列设计引物,将分离的口蹄疫病毒株A/Sea-97/CHA/2014全基因组分为4个重叠的片段进行RT-PCR扩增,并对其进行序列测定与... 详细信息

【目的】测定一株A型口蹄疫流行毒株的全基因组序列,并构建其全长感染性克隆。【方法】参照已公布的A型口蹄疫病毒序列设计引物,将分离的口蹄疫病毒株A/Sea-97/CHA/2014全基因组分为4个重叠的片段进行RT-PCR扩增,并对其进行序列测定与分析。利用酶切连接法将4个基因片段依次克隆至p Blue Script SKhdv载体中,构建该流行毒株的全长c DNA克隆p QAHN。pQAHN经NotⅠ线性化后转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞,拯救病毒。【结果】口蹄疫病毒全基因组序列测定结果表明该毒株基因组全长8 171 bp[不包括poly(C)区段和poly(A)尾巴],开放阅读框为6 996 bp,编码2 332个氨基酸,5′和3′非编码区分别为1 091 bp和95 bp。VP1系统发生树分析表明该毒株与A/GDMM/CHA/2013毒株亲缘关系最近,相似性为99.1%。线化全长质粒转染BSR/T7细胞68 h后可观察到典型的细胞病变。拯救病毒的间接免疫荧光、RT-PCR和序列测定结果表明成功拯救出了具有感染性的FMDV。拯救病毒与亲本病毒的噬斑表型及生长曲线试验表明二者具有相似的生长表型和增殖能力。【结论】该研究为我国口蹄疫病原生态分布、分子流行病学调查以及A型FMD新型疫苗的研究提供了有益的材料。

关键词： A型口蹄疫病毒全序列测定全长感染性克隆

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