检索结果-内蒙古大学图书馆

浙江农业学报 2013年第6期25卷 1298-1303页

作者：张上林孙丽英陈剑平安徽农业大学植物保护学院安徽合肥230036 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)是斐济病毒属的成员之一,可侵染玉米和水稻等作物,给亚洲地区的田间生产带来严重的损失。RBSDV有10条双链RNA(double strand RNA,dsRNA)基因组,编码12个蛋白。其中6个蛋白是病毒粒子的结构成分(P1,P2,P3,P4,P8,P10),6个非结构蛋白分别为P5,P6,P7-1,P7-2,P9-1,P9-2。在非结构蛋白中,P5,P6和P9-1已被证实参与形成毒质结构,P7-1被认为可在细胞质中形成类似管状的结构作为病毒胞间扩散的通道,P7-2和P9-2的功能目前尚不明确。文章采用Pull-Down和液相色谱—质谱联用(LC-MS/MS)等技术来鉴定水稻蛋白(日本晴)与P7-2蛋白间可能存在的互作关系。通过Pull-Down实验分析,发现有4种水稻蛋白可与P7-2相结合,其中2个蛋白为转录相关蛋白,1个为氨基转移酶,还有1个为假定的分子伴侣60前体。实时荧光定量PCR分析显示,感病寄主中的转录相关蛋白和假定的分子伴侣60前体的表达量上调,而氨基转移酶的表达量降低。

关键词：水稻黑条矮缩病毒 P7-2基因原核表达蛋白质互作实时荧光定量PCR

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体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选

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畜牧与兽医 2013年第10期45卷 88-91页

作者：陆新浩刘友生白露陈秋英刘鸿廖敏周继勇任祖伊浙江省余姚禽畜病防治研究所浙江余姚315400 浙江大学农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310029

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒的作用,对5种常见的抗病毒药:金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林和阿昔洛韦进行体外抗鸭坦布苏病毒药物筛选试验。结果:利巴韦林药物浓度为0.156～0.625 mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病... 详细信息

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒的作用,对5种常见的抗病毒药:金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林和阿昔洛韦进行体外抗鸭坦布苏病毒药物筛选试验。结果:利巴韦林药物浓度为0.156～0.625 mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病毒的增殖。试验表明,利巴韦林在体外对鸭坦布苏病毒具有抗病毒作用。

关键词：鸭坦布苏病毒利巴韦林抗病毒药物

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水稻瘤矮病毒P12蛋白抗血清制备及其应用

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植物保护学报 2013年第5期40卷 413-417页

作者：孟媛辛星羊健张恒木王建明陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004 山西农业大学农学院植物病理系太谷030801 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植物保护与生物技术重点开放实验室浙江省植物病毒重点开放实验室杭州310021

为了进一步研究水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)P12的功能,将RGDV-GX P12编码区亚克隆至原核表达载体,并导入大肠杆菌诱导表达;重组的P12融合蛋白经Ni-NTA His·Bind Resins纯化后用于免疫小鼠制备抗血清,并进行Western b... 详细信息

为了进一步研究水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)P12的功能,将RGDV-GX P12编码区亚克隆至原核表达载体,并导入大肠杆菌诱导表达;重组的P12融合蛋白经Ni-NTA His·Bind Resins纯化后用于免疫小鼠制备抗血清,并进行Western blotting分析。结果显示,约41 kD大小的RGDV P12融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达;利用该重组蛋白所制备的抗血清可特异地与融合表达和非融合的P12蛋白发生强烈的免疫学反应。利用该特异性抗血清在病毒粒子样品中检测不到P12蛋白,而在病株总蛋白样品中可检测到1条与预期大小一致的明显条带,表明RGDV P12是一种非结构蛋白。

关键词：水稻瘤矮病毒 P12 原核表达抗血清

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猪圆环病毒2型ORF3基因的表达及其表达产物免疫小鼠后致细胞因子变化的研究

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中国兽医科学 2013年第6期43卷 583-587页

作者：王亚军杨顺利才学鹏甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046 中国动物疫病预防控制中心北京100125

为掌握猪圆环病毒2型(PCV2)ORF3蛋白免疫小鼠后引起其细胞因子变化的特征,设计了特异性引物,以PCV2FJ948167毒株的基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF3基因,并将其克隆到pSMK-sumo原核表达载体。把构建成功的重组质粒转化至BL21(DE3RIL str... 详细信息

为掌握猪圆环病毒2型(PCV2)ORF3蛋白免疫小鼠后引起其细胞因子变化的特征,设计了特异性引物,以PCV2FJ948167毒株的基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF3基因,并将其克隆到pSMK-sumo原核表达载体。把构建成功的重组质粒转化至BL21(DE3RIL strain)表达菌株,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western-blot分析显示,ORF3基因已在大肠杆菌中表达,表达产物的分子质量约为32ku。将分离纯化后的ORF3蛋白免疫小鼠,检测免疫后不同时间点IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12在血清中的质量浓度。结果显示,免疫后小鼠血清中IL-4的质量浓度显著升高(P<0.05),而IL-10、IL-12和INF-γ的质量浓度没有明显的变化。结果表明,ORF3蛋白在PCV2诱发的体液免疫中发挥一定的作用。

关键词：猪圆环病毒2型 ORF3基因 γ-干扰素白细胞介素4 白细胞介素10 白细胞介素12

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体外抗鸭坦布苏病毒的药物筛选

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中国动物传染病学报 2013年第2期21卷 51-55页

作者：刘友生陆新浩白露陈秋英刘鸿廖敏周继勇任祖伊浙江省余姚禽畜病防治研究所余姚315400 浙江大学农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室杭州310029

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu,virus,DTMUV)的作用,作者对5种常见的抗病毒药金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林、阿昔洛韦进行抗鸭坦布苏病毒体外筛选试验。结果表明利巴韦林药物浓度为0.156~0.625mg/mL时在D... 详细信息

为了探讨抗病毒药物对鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu,virus,DTMUV)的作用,作者对5种常见的抗病毒药金刚乙胺、脱氧若卡素钠、病毒灵、利巴韦林、阿昔洛韦进行抗鸭坦布苏病毒体外筛选试验。结果表明利巴韦林药物浓度为0.156~0.625mg/mL时在DF-1细胞中能抑制鸭坦布苏病毒的增殖,利巴韦林在体外对鸭坦布苏病毒具有抗病毒作用。

关键词：鸭坦布苏病毒利巴韦林抗病毒药物

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A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列的测定及其基因特征分析

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安徽农业科学 2013年第2期41卷 640-641,700页

作者：谢毅牟一娇朱琳刘强赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

[目的]测定A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列并分析其基因特征,为研究我国最近发生的A型口蹄疫病毒的致病性、流行规律以及筛选适用的疫情防控疫苗株奠定分子基础。[方法]应用RT-PCR方法,分段扩增、克隆A/HeN/1/2009株基因,并... 详细信息

[目的]测定A型口蹄疫病毒A/HeN/1/2009株全基因组序列并分析其基因特征,为研究我国最近发生的A型口蹄疫病毒的致病性、流行规律以及筛选适用的疫情防控疫苗株奠定分子基础。[方法]应用RT-PCR方法,分段扩增、克隆A/HeN/1/2009株基因,并进行基因测序;借助DNAStar分子生物学软件,从分子流行病学角度分析A/HeN/1/2009株与参考毒株之间可能的遗传衍化关系。[结果]该毒株基因组全长8 171 nts[不包括poly(C)区段和poly(A)尾巴],其中5'-UTR和3'-UTR分别为1 080、92 nts,蛋白编码区为6 999 nts。分析A/HeN/1/2009株遗传衍化关系显示,该毒株划为东南亚拓扑型Laos03系的VN09亚系,同源性依次为87.3%～91.8%、93.7%～94.5%和96.9%～98.4%。[结论]VP1中A24V、N85R、S196T,3A中I61V、T128S、E147G和A134V在该毒群的进化过程中扮演重要角色;A/SH/1/2009株VP1 140-160基序为RSD。

关键词：口蹄疫病毒 A HeN 1 2009株全基因组东南亚拓扑型

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利用mRNA差异显示技术克隆分析捻转血矛线虫滞育相关基因

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中国兽医学报 2012年第5期32卷 675-681页

作者：郑柏玲张红丽周前进陈学秋杜爱芳浙江大学动物科学学院、动物预防医学研究所、农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室浙江杭州310058

以培养获得的捻转血矛线虫滞育期虫体及同期正常发育的虫体为研究材料,采用设计的锚定引物和随机引物,通过mRNA差异显示PCR技术对滞育期幼虫的差异表达基因进行了筛选。结果获得了74个滞育期差异表达的基因EST。生物信息学分析表明:29... 详细信息

以培养获得的捻转血矛线虫滞育期虫体及同期正常发育的虫体为研究材料,采用设计的锚定引物和随机引物,通过mRNA差异显示PCR技术对滞育期幼虫的差异表达基因进行了筛选。结果获得了74个滞育期差异表达的基因EST。生物信息学分析表明:29个差异序列与已知的捻转血矛线虫基因组序列具有同源性;14个差异序列与已知线虫的EST具有同源性。同源基因中的rps-30、T24F1.2等已被证明参与了秀丽隐杆线虫的滞育形成。差异序列的克隆为捻转血矛线虫滞育相关基因及滞育形成机制的研究奠定了基础。

关键词：捻转血矛线虫滞育 mRNA差异显示序列分析

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牛支原体生长曲线的测定和培养基筛选

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湖北农业科学 2012年第3期51卷 549-551页

作者：邵倩储岳峰何生虎逯忠新宁夏大学农学院银川750021 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物(疫病重点开放实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平... 详细信息

为筛选最适于牛支原体(Mycoplasma bovis)生长的培养基,利用活菌计数方法测定了牛支原体OF2株在改良Thiaucourt’s培养基、牛心汤培养基和改良KM2培养基中的生长曲线。结果发现,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长30 h即可达到平台期,平均最高生长滴度7.0×109ccu/mL;在牛心汤培养基中生长40 h即可达到平台期,平均最高生长滴度4.0×109ccu/mL;在改良KM2培养基中生长50 h达到平台期,其平均最高生长滴度为7.0×108ccu/mL。结果表明,牛支原体在改良Thiaucourt’s培养基中生长快、滴度高,为下一步牛支原体灭活疫苗的研究提供了参考依据。

关键词：牛支原体(Mycoplasma bovis) 培养基筛选生长曲线

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水稻黑条矮缩病毒基因组S7编码的2个非结构蛋白在病株中的表达检测

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中国水稻科学 2012年第1期26卷 9-15页

作者：吕明芳羊健张恒木陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL2... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。

关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白原核表达

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段的表达、纯化及抗原性分析

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中国兽医学报 2012年第2期32卷 231-237页

作者：郝宝成梁剑平兰喜刑小勇项海涛温峰琴胡永浩柳纪省中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药重点开放实验室甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学学院甘肃兰州730070

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插... 详细信息

根据已克隆的戊型肝炎病毒株swCH189株结构蛋白基因(ORF2)的抗原性及水溶性分析,在其序列上设计套式引物,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2主要抗原基因片段,长度为728bp,将其克隆于PMD18-T载体,测序结果表明插入的片段属于猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因ORF2部分;将该片段插入pet32a表达载体,经酶切、测序鉴定证实获得了带有目的基因的重组表达质粒。将重组质粒转化Rosetta菌,经0.3mmol/L IPTG诱导得到融合表达,得到相对分子质量为45 000的重组蛋白,以包涵体形式存在。Western blot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。并用SDS电泳切胶纯化和透析浓缩方法进行纯化,用纯化的蛋白免疫兔子,经每2周免疫1次,连续3次免疫后,对免疫组和对照组,分别在45,60,90d采血,每只兔子采集1份。用夹心ELISA法测定免疫血清抗体,结果表明免疫组在45d后均产生具有HEV抗原结合活性的抗体。本试验对猪swCH189株CP239基因的克隆和表达研究,为进一步研究结构蛋白基因ORF2的生物学功能奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 swCH189株克隆原核表达纯化抗原性分析

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