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中国药理学与毒理学杂志 2000年第4期14卷 315-317页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相... 详细信息

为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相比 ,所克隆的 c DNA,codon51 5AAT→ AAC都编码天冬酰胺 ,而 codon 51 0后面插入了一个CTG(亮氨酸 ) ,则与 Quattrochi等报道的相同 .本实验室克隆的 CYP1 A2 c DNA可能是一种新的CYP1 A2 c DNA,有可能来自于一种新的 CYP1 A2等位基因的转录 .

关键词：人细胞色素P450 cDNA 克隆鉴定

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一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆

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中国病理生理杂志 2000年第10期16卷 875-878页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6c... 详细信息

目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6cDNA序列相比 ,在编码区有两个变异 ,即codon 8CTG→TTG ,编码的氨基酸不变 ,为亮氨酸。codon479GGC(甘氨酸 )→GTC(缬氨酸 ) ,其余均相同。而在其 3′端非编码区变异很多。与Fernandez -Salguero等报道的CYP2A7序列相比 ,其 5′端虽与所克隆的CYP2A6有较多差异 ,但其codon479也是GTC(缬氨酸 ) ,在 3′端非编码区仅略有差异。而所克隆的CYP2A6cDNA与Yamano等报道的CYP2A7序列相比 ,3′端非编码区至所设PCR引物止 ,所克隆的基因序列完全相同 ,而在编码区却差异较多。结论 :本实验室克隆的CYP2A6cDNA是一种新的CYP2A6cDNA序列。

关键词：细胞色素P450 CYP2A6cDNA 序列分析克降

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人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

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中国药理学与毒理学杂志 2000年第6期14卷 434-439页

作者：林筱洁罗建红宋英朱丽君余应年浙江省中医院血液病研究室杭州310006 浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p... 详细信息

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .

关键词：细胞色素P450 抗体融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶

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突变形成的原核与原核-真核检测系统现状

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癌变．畸变．突变 2003年第1期15卷 56-60页

作者：王宏蔡朱男余应年浙江大学医学院病理生理学及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

原核细胞检测系统在检测突变形成的过程中 ,以其简便、快捷、灵敏、价格相对低廉等特点 ,起着不可替代的作用 ,目前较为常用的方法有 :回复突变试验、修复试验、SOS相关试验等 ;supFtRNA转运系统是穿梭于原核与真核细胞之间 ,当属原核_... 详细信息

原核细胞检测系统在检测突变形成的过程中 ,以其简便、快捷、灵敏、价格相对低廉等特点 ,起着不可替代的作用 ,目前较为常用的方法有 :回复突变试验、修复试验、SOS相关试验等 ;supFtRNA转运系统是穿梭于原核与真核细胞之间 ,当属原核_真核检测系统 ;现就其中回复突变试验和supFtRNA转运系统及其进展作一综述。

关键词：化学诱变剂回复突变生物荧光试验 SOS supF

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一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆

一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆

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中国病理生理学会第七届年会，第九届心血管，第六届国际心脏，第七届肿瘤，第八届免疫，第六届受体和信号，第三届消化学术研讨会

作者：诸葛坚钱羽力浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室(杭州)

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一个新的人细胞色素P450 2B6 cDNA 序列

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中国药理学与毒理学杂志 2000年第1期14卷 25-25页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

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本室克隆的人细胞色素P450 1A1 cDNA序列特点

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中国药理学与毒理学杂志 2001年第4期15卷 320-320页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

本实验室于1994年用人羊膜FL细胞株，经逆转录-PCR克隆了人细胞色素P450 1A1 cDNA，经部分DNA序列测定〔董海涛等，中国病理生理杂志 1995, 11(4):417-421〕. 并建立了稳定表达CPY1A1的转基因细胞，其表达产物具有乙氧基异吩口　恶唑-O... 详细信息

本实验室于1994年用人羊膜FL细胞株，经逆转录-PCR克隆了人细胞色素P450 1A1 cDNA，经部分DNA序列测定〔董海涛等，中国病理生理杂志 1995, 11(4):417-421〕. 并建立了稳定表达CPY1A1的转基因细胞，其表达产物具有乙氧基异吩口　恶唑-O-去乙基酶活性，建立的转基因细胞有代谢活化苯并［α］芘等多环芳烃的能力〔董海涛等，中国病理生理杂志 1996, 12(3):225-229〕. 现用T7，SP6引物和重新设计的中间引物，根据Perkin-Elmer操作说明书，用BigDye标记的双脱氧链终止法反应，再在本实验室ABI Prism 310全自动毛细管电泳测序仪上对重组质粒pGEM-3Z-1A1中的CYP1A1 cDNA片段全长进行测序(图1).

关键词：人细胞色素P4501A1 cDNA序列克隆

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细胞色素P4501A2的转基因细胞及其应用

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癌变．畸变．突变 2000年第4期12卷 249-253页

作者：朱长火昆诸葛坚余应年浙江大学医学院95级七年制学生浙江杭州310031 浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

1引言细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、... 详细信息

1引言细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、杂环胺、黄曲霉素B1等许多类化合物.转CYP1A2的各种细胞系的建立为研究CYP1A2的功能提供了新的工具.到目前为止,已经建立的细胞系有细菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞.最近,CYP1A2和其他微粒体电子转运系统如NADPH-细胞色素P450还原酶共同表达成功,提高了异源性CYP1A2的代谢能力.另外,为了重建杂环胺的完全代谢活化系统,建立了同时表达CYP1A2和二相酶(phase Ⅱ enzyme)N-乙酰转移酶的细胞系.各种永生的细胞系已经在毒理学试验领域内取得发展.下面按不同的细胞系说明它们的应用.

关键词：细胞色素P4501A2 转基因细胞应用

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微核与微核试验在遗传毒理学中的应用

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癌变．畸变．突变 2000年第4期12卷 253-256页

作者：王爽诸葛坚余应年浙江大学医学院95级临床医学七年制学生浙江杭州310031 浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

细胞分裂中染色单体或染色体的无着丝粒断片或滞后染色体不包被于主核中,独立存在于细胞质中,类似细胞核,但体积较小,称为微核.微核形成是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学终点.以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物,称为微核试验.微... 详细信息

细胞分裂中染色单体或染色体的无着丝粒断片或滞后染色体不包被于主核中,独立存在于细胞质中,类似细胞核,但体积较小,称为微核.微核形成是细胞受遗传毒物作用后的一种遗传学终点.以观察细胞中微核的形成来检测遗传毒物,称为微核试验.微核试验因其快速,简便成为广泛使用的遗传毒理学试验之一.

关键词：微核微核试验遗传毒理学应用

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癌变·畸变·突变 1999年第6期 304-304页

作者：诸葛坚薛建华钱羽力余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室!杭州310031

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