检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理学与毒理学杂志 2000年第4期14卷 315-317页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相... 详细信息

为建立人细胞色素 P450转基因细胞 ,从人肝组织提取总 RNA,RT- PCR扩增人细胞色素 P4501 A2基因的 c DNA( CYP1 A2 c DNA) ,将其连接到p GEM- T载体上 ,并对 CYP1 A2 c DNA进行全序列测定 .结果与 Jaiswal等发表的 CYP1 A2 c DNA序列相比 ,所克隆的 c DNA,codon51 5AAT→ AAC都编码天冬酰胺 ,而 codon 51 0后面插入了一个CTG(亮氨酸 ) ,则与 Quattrochi等报道的相同 .本实验室克隆的 CYP1 A2 c DNA可能是一种新的CYP1 A2 c DNA,有可能来自于一种新的 CYP1 A2等位基因的转录 .

关键词：人细胞色素P450 cDNA 克隆鉴定

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细胞信号转导、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞非定标性突变——致癌物诱发基因突变分子机制研究

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中国病理生理杂志 2000年第10期16卷 1028-1029页

作者：余应年孙雪敏冯朝晖胡文蔚宋韬谢海洋浙江大学医学院病理生理教研室和医学分子生物学实验室浙江杭州310031

本实验室曾应用一携带SupF tRNA 基因的穿梭质粒pZ189,转染在24h前经受半寿期仅1.1h的烷化剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝胍(MNNG)攻击的vero细胞,从回收的在细胞中进行过复制的质粒中选出了靶基因SupF tRNA的突变体,并有突变发生的序列... 详细信息

本实验室曾应用一携带SupF tRNA 基因的穿梭质粒pZ189,转染在24h前经受半寿期仅1.1h的烷化剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝胍(MNNG)攻击的vero细胞,从回收的在细胞中进行过复制的质粒中选出了靶基因SupF tRNA的突变体,并有突变发生的序列特异性,由此证明烷化剂MNNG攻击后可在非损伤碱基部位诱发突变(非定标性突变).对其发生机制进行了系统研究.主要结果如下:

关键词：细胞信号转导基因表达 DNA复制基因突变肿瘤

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一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆

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中国病理生理杂志 2000年第10期16卷 875-878页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6c... 详细信息

目的 :克隆人细胞色素P45 0 2A6cDNA。方法 :用逆转录 -PCR和DNA重组技术 ,从人肝组织中扩增人细胞色素P45 0 2A6基因的cDNA ,并将其连接到pBluescript载体上 ,对CYP2A6cDNA进行全序列测定。结果 :所克隆的cDNA与Yamano等发表的CYP2A6cDNA序列相比 ,在编码区有两个变异 ,即codon 8CTG→TTG ,编码的氨基酸不变 ,为亮氨酸。codon479GGC(甘氨酸 )→GTC(缬氨酸 ) ,其余均相同。而在其 3′端非编码区变异很多。与Fernandez -Salguero等报道的CYP2A7序列相比 ,其 5′端虽与所克隆的CYP2A6有较多差异 ,但其codon479也是GTC(缬氨酸 ) ,在 3′端非编码区仅略有差异。而所克隆的CYP2A6cDNA与Yamano等报道的CYP2A7序列相比 ,3′端非编码区至所设PCR引物止 ,所克隆的基因序列完全相同 ,而在编码区却差异较多。结论 :本实验室克隆的CYP2A6cDNA是一种新的CYP2A6cDNA序列。

关键词：细胞色素P450 CYP2A6cDNA 序列分析克降

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人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

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中国药理学与毒理学杂志 2000年第6期14卷 434-439页

作者：林筱洁罗建红宋英朱丽君余应年浙江省中医院血液病研究室杭州310006 浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p... 详细信息

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .

关键词：细胞色素P450 抗体融合蛋白谷胱甘肽S-转移酶

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化学诱变剂诱发基因突变分子机理研究

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卫生毒理学杂志 2000年第1期14卷 10-12页

作者：余应年浙江大学医学院病理生理教研室和医学分子生物学实验室杭州310031

应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变 ,应... 详细信息

应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变 ,应用mRNA差异显示和反义技术分离到两个基因表达序列标识 ,其相关基因表达被阻断后可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。用体外DNA复制技术证明其发生基础是由于化学诱变剂引发细胞DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但DNA聚合酶酶谱发生改变。还证明它的发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活和cAMP浓度升高。细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。

关键词：化学诱变剂诱发基因突变分子机理

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细胞信号转号、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞非定标性突变－－致癌物诱发基因突变分子机制研究

细胞信号转号、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞非定标性突变...

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中国病理生理学会第七届年会，第九届心血管，第六届国际心脏，第七届肿瘤，第八届免疫，第六届受体和信号，第三届消化学术研讨会

作者：余应年孙雪敏冯朝晖浙江大学医学院病理生理教研室和医学分子生物学实验室(杭州) 浙江大学医学院病理生理教研室和医学分子生物学实验室杭州

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细胞信号转导、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞遗传不稳定

细胞信号转导、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞遗传不稳定

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中国科协首届学术年会

作者：余应年孙雪敏冯朝晖胡文蔚鲁靖宋韬谢海洋浙江大学医学院病理生理教研室和医学分子生物学实验室

本研究应用本实验室建立的模型;穿梭质粒pZ189,转染在24小时前经受极低浓度(0.2μmol/L)的短半寿期致癌(突变)剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝胍(MNNG)攻击的vero细胞,从回收的质粒中筛选靶基因supFtRNA的点

关键词：基因表达细胞信号转导保真度 DNA 细胞遗传

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一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆

一种新的人细胞色素P450 2A6 cDNA克隆

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中国病理生理学会第七届年会，第九届心血管，第六届国际心脏，第七届肿瘤，第八届免疫，第六届受体和信号，第三届消化学术研讨会

作者：诸葛坚钱羽力浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室(杭州)

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细胞色素P4501A2的转基因细胞及其应用

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癌变．畸变．突变 2000年第4期12卷 249-253页

作者：朱长火昆诸葛坚余应年浙江大学医学院95级七年制学生浙江杭州310031 浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

1引言细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、... 详细信息

1引言细胞色素P450(CYP是一种含血红素酶,广泛分布于从细菌到动物中,能代谢各种外源性和内源性化合物.动物肝微粒体中的CYP能代谢外源性物质,如药物、农药、环境污染物、前突变物和/或前致癌物.细胞色素P450 1A2(CYP1A2)能代谢芳香胺、杂环胺、黄曲霉素B1等许多类化合物.转CYP1A2的各种细胞系的建立为研究CYP1A2的功能提供了新的工具.到目前为止,已经建立的细胞系有细菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞.最近,CYP1A2和其他微粒体电子转运系统如NADPH-细胞色素P450还原酶共同表达成功,提高了异源性CYP1A2的代谢能力.另外,为了重建杂环胺的完全代谢活化系统,建立了同时表达CYP1A2和二相酶(phase Ⅱ enzyme)N-乙酰转移酶的细胞系.各种永生的细胞系已经在毒理学试验领域内取得发展.下面按不同的细胞系说明它们的应用.

关键词：细胞色素P4501A2 转基因细胞应用

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一个新的人细胞色素P450 2B6 cDNA 序列

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中国药理学与毒理学杂志 2000年第1期14卷 25-25页

作者：诸葛坚钱羽力谢海洋余应年浙江大学医学院病理生理学教研室及医学分子生物学实验室浙江杭州310031

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