检索结果-内蒙古大学图书馆

不同结合臂长10-23DNAzymes对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用

中华内科杂志 2006年第5期45卷 396-399页

作者：侯伟沃健儿刘克洲李敏伟陈离伟胡中荣刘荣华胡敏君浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的探讨不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用。方法设计并合成不同结合臂长的1023DNAzymes,能分别针对乙型肝炎病毒S基因和C基因开放阅读框A157UG和A1816UG。不同的1023DNAzymes分别转染2... 详细信息

目的探讨不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用。方法设计并合成不同结合臂长的1023DNAzymes,能分别针对乙型肝炎病毒S基因和C基因开放阅读框A157UG和A1816UG。不同的1023DNAzymes分别转染2.2.15细胞,放射免疫分析法测定2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg水平,实时荧光定量PCR法测定2.2.15细胞培养上清中HBVDNA水平。MTT法检测细胞毒性。结果不同结合臂长的1023DNAzymes在0.1～2.5μmol/L浓度范围内均能有效抑制HBsAg和HBeAg的表达,抑制效应可长达72h。在同一剂量相同转染时间的条件下,不同结合臂长的1023DNAzymes对HBsAg和HBeAg表达的抑制率呈以下关系:DrzBS9>DrzBS8>DrzBS7;DrzBC9>DrzBC8>DrzBC7。DrzBS9和DrzBC9在2.5μmol/L剂量条件下,转染48h后对HBsAg和HBeAg表达的抑制率可分别高达95%和92%。不同结合臂长的1023DNAzymes对2.2.15细胞培养上清中HBVDNA水平并无明显影响。MTT细胞毒性检测表明,在0.1～2.5μmol/L浓度范围内未见1023DNAzymes对2.2.15细胞的毒性作用。结论不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达均有一定的抑制作用,DrzBS9和DrzBC9的抑制作用较强。

关键词： 10-23 DNAzyme S基因 C基因乙型肝炎病毒

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一种新的质粒介导的肠球菌氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-Ie

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中华医学杂志 2006年第9期86卷 596-599页

作者：瞿婷婷张樱俞云松陈亚岗魏泽庆李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的明确庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)新氨基糖苷类耐药基因及其传播机制。方法采用琼脂筛选法筛选获得HLGR,用琼脂稀释法及K-B纸片法进行抗菌药物的药敏试验,并通过聚合酶链反应(PCR)、质粒提取、Southern杂交、酶切克隆测序对耐药... 详细信息

目的明确庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)新氨基糖苷类耐药基因及其传播机制。方法采用琼脂筛选法筛选获得HLGR,用琼脂稀释法及K-B纸片法进行抗菌药物的药敏试验,并通过聚合酶链反应(PCR)、质粒提取、Southern杂交、酶切克隆测序对耐药基因及其传播机制进行研究。结果肠球菌可通过产新的质粒介导的氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-Ie编码的修饰酶APH(2”)-Ie引起HLGR。酶切克隆测序显示aph(2”)-Ie与染色体介导的aph(2”)-Id有较高的氨基酸同源性,其上游存在编码转座酶TnpA的插入序列,下游存在编码链霉素腺苷转移酶(str)基因。Southern杂交证实该耐药基因位于16kb左右的质粒上。结论HLGR可由一种新的质粒介导的APH(2”)-Ie的氨基糖苷类修饰酶引起,并可通过转座酶与其他耐药基因一起在质粒或染色体之间进行传播。

关键词：肠球菌属抗药性质粒抗生素类氨基糖苷

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质粒介导AmpC酶的结构及传播机制研究

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中华医学杂志 2005年第43期85卷 3043-3047页

作者：陆玮新魏泽庆俞云松陈亚岗李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的明确多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶基因及周围序列的结构特征,阐明质粒介导AmpC酶传播机制。方法抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切DNA片段的黏末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-T Easy... 详细信息

目的明确多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶基因及周围序列的结构特征,阐明质粒介导AmpC酶传播机制。方法抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切DNA片段的黏末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-T Easy载体进行T-A克隆。在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组质粒,酶切分析,克隆片段用步移法测序。对重组菌进行药敏试验和等电点分析。结果克隆筛选到含5.2kb插入片段的重组质粒pT948,插入片段测序发现其含有一个ampC(blaDHA-1)基因和一个ampR调节基因。在blaDHA-1结构基因的侧翼发现一个插入序列IS26及Ⅰ类整合子的qacE△1和sulI基因。重组菌表达等电点为7.7,药敏试验显示对头孢西丁耐药,对头孢他啶的耐药性能被头孢西丁诱导。结论克隆到质粒介导的AmpC酶为DHA-1型,其相邻的插入序列IS26参与DHA-1的转移。

关键词：克隆,分子质粒 DNA可移植因子 AmpC酶

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中国儿童与成人艾滋病患者的免疫活化水平比较

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中国医学科学院学报 2006年第5期28卷 647-650页

作者：吴南屏张福杰靳昌忠赵燕姚航平赵红心吴灵娇魏红山李在村浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的比较中国儿童及成人艾滋病(AIDS)患者的免疫活化水平。方法以103例儿童AIDS患者、38例成人AIDS患者、88名健康儿童和72名健康成人为研究对象,取抗凝血进行流式细胞计数检测CD4+T细胞数,荧光定量RT-PCR测定血清HIV-RNA滴度,采用ELIS... 详细信息

目的比较中国儿童及成人艾滋病(AIDS)患者的免疫活化水平。方法以103例儿童AIDS患者、38例成人AIDS患者、88名健康儿童和72名健康成人为研究对象,取抗凝血进行流式细胞计数检测CD4+T细胞数,荧光定量RT-PCR测定血清HIV-RNA滴度,采用ELISA法检测血清中Th1/Th2免疫因子(IL-10、IL-16、IL-18)、趋化因子[包括调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)]及巨噬细胞刺激蛋白(MSP)的水平,并以β2微球蛋白(β2-MG)和可溶性Fas(sFas)的表达水平作为机体免疫活化指标。结果儿童AIDS患者组的CD4+T细胞数显著低于儿童正常对照组(P<0.01),各细胞因子水平较儿童正常对照组显著升高(P均<0.01)。成人AIDS患者组的CD4+T细胞数显著低于成人正常对照组(P<0.01),除MSP水平显著低于成人对照组(P<0.01)外,其余各细胞因子均显著高于成人对照组(P<0.01)。儿童AIDS患者组各因子水平除SDF-1α和β2-MG与成人AIDS患者组差异无显著性(P>0.05)外,其余均显著高于成人AIDS患者组(P<0.01)。结论儿童和成人AIDS患者的免疫系统均表现为明显的异常活化,儿童患者的免疫活化水平高于成人患者。

关键词：获得性免疫缺陷综合征趋化因子白细胞介素巨噬细胞刺激蛋白免疫活化

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甲氧西林耐药葡萄球菌SCCmec研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第12期26卷 1108-1111页

作者：皮博睿陈亚岗俞云松俞美红须欣李兰娟浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室传染病研究所杭州310003

目的明确甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和溶血性葡萄球菌(MRSH)所包含的葡萄球菌染色体mec盒(staphylococcal cassette chromosome meg,SCCmec)类型,并比较两者的差异。方法分别收集本院住院患者临床标本中分离的60株MRSA和88株MRS... 详细信息

目的明确甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和溶血性葡萄球菌(MRSH)所包含的葡萄球菌染色体mec盒(staphylococcal cassette chromosome meg,SCCmec)类型,并比较两者的差异。方法分别收集本院住院患者临床标本中分离的60株MRSA和88株MRSH。共设计10对引物,采用PCR法分别扩增mec复合体和ccr复合体的各个特征序列,分析其SCCmec类型。结果60株MR- SA均为Ⅲ型SCCmec;88株MRSH中7株为V型SCCmec,1株为Ⅲ型SCCmec,其余均为新的组合或是无法分型。结论SCCmec在MRSA和MRSH中分布特点差别较大,MRSH中可能存在较多新的型别。

关键词：甲氧西林细菌耐药葡萄球菌葡萄球菌染色体mec盒

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生物型人工肝用肝细胞源研究现状及展望

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中华肝脏病杂志 2007年第3期15卷 217-218页

作者：黄建荣浙江大学医学院附属第一医院感染病中心、卫生部传染病重点实验室 310003

作为肝衰竭（hepatic failure，FHF）有效治疗手段，生物型人工肝（Bioarti ficial liver，BAL）可以比较全面的替代肝脏解毒，生物合成和分泌代谢等功能。BAL由三部分组成：（1）生物成分；（2）生物反应器；（3）辅助循环装置：包括... 详细信息

作为肝衰竭（hepatic failure，FHF）有效治疗手段，生物型人工肝（Bioarti ficial liver，BAL）可以比较全面的替代肝脏解毒，生物合成和分泌代谢等功能。BAL由三部分组成：（1）生物成分；（2）生物反应器；（3）辅助循环装置：包括外部控制系统和体外循环系统。肝细胞作为其生物成分是BAL发展的关键因素，理想的BAL肝细胞应具有人源化，易获取，可快速、稳定增殖，而且能在数天或数周内保持良好的分化状态，能在体外完成合成和解毒功能。但BAL的细胞来源问题仍未完全解决。长期以来国内外学者不断进行研究，目前研究的肝细胞从来源来看包括人和动物肝细胞、肝干细胞、胚胎肝细胞、骨髓干细胞、人肿瘤来源的肝细胞系及永生化入肝细胞等。现就目前BAL用肝细胞源研究现状作一介绍。

关键词：肝人工肝细胞永生化细胞

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SV40介导的永生化人源性肝细胞表型鉴定

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 300-301页

作者：李兰娟盛国平李君章益民俞海英曹红翠徐威应红芳盛吉芳浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室 310003 浙江省立同德医院

本研究采用免疫组织化学和分子生物学方法等对SV40介导的永生化人源性肝细胞(HepLL细胞)进行生物学功能和表型特征评价.

关键词： SV40介导永生化人源性肝细胞表型鉴定免疫组织化学分子生物学方法

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对拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒基因型与病毒载量及其核苷酸序列分析

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中华传染病杂志 2007年第5期25卷 285-288页

作者：潘小平李兰娟杜维波李敏伟曹红翠陈智浙江大学医学院附属第一医院传染内科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的探讨对拉米夫定耐药患者HBV B、C基因型的病毒载量及其核苷酸序列突变等病毒学特性的差异。方法采用ELISA、实时荧光定量PCR和DNA序列分析的方法,检测53例对拉米夫定耐药患者的HBV基因型、病毒载量及其C、P基因核苷酸序列,并将测序... 详细信息

目的探讨对拉米夫定耐药患者HBV B、C基因型的病毒载量及其核苷酸序列突变等病毒学特性的差异。方法采用ELISA、实时荧光定量PCR和DNA序列分析的方法,检测53例对拉米夫定耐药患者的HBV基因型、病毒载量及其C、P基因核苷酸序列,并将测序结果与基因库中标准HBV基因型序列进行比较分析。结果53例拉米夫定耐药患者中,B基因型22例,C基因型31例;C基因型的YIDD突变率明显高于B基因型(87.1%比36.4%,P<0.01),且C基因型的病毒载量为(7.71±0.80)lg拷贝/mL,明显高于B基因型的(6.97±0.77)lg拷贝/mL(P<0.01);而B基因型的YVDD突变率和前C区突变(G1896A)明显高于C基因型(分别为63.6%比12.9%、77.3%比32.3%,P值均<0.01)。B、C基因型的核心启动子突变(T1762/A1764)比较,差异无统计学意义(31.8%比35.5%,P>0.05)。前C区/核心启动子的突变影响拉米夫定耐药患者的病毒水平。结论拉米夫定耐药患者HBV B、C基因型的YMDD基序分别以YVDD和YIDD变异为主,且基因型C的病毒载量比B基因型要高;B基因型易出现前C区突变(G1896A)。

关键词：启动区(遗传学) 变异(遗传学) 拉米夫定药物耐变性基因型肝炎病毒,乙型

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永生化猪肝细胞的建立及其鉴定

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中华传染病杂志 2008年第7期26卷 406-409页

作者：潘小平杜维波郝邵瑞曹红翠陈瑜盛国平朱春侠盛吉芳李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染内科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的建立永生化的猪肝细胞系，为生物人工肝、肝细胞移植、体外药物代谢模型提供合适的细胞源。方法应用胶原酶等四步灌流法分离获得原代猪肝细胞，以SV40大T抗原（SV40LT）和含人端粒酶反转录酶（hTERT）的重组反转录病毒感染，对其进... 详细信息

目的建立永生化的猪肝细胞系，为生物人工肝、肝细胞移植、体外药物代谢模型提供合适的细胞源。方法应用胶原酶等四步灌流法分离获得原代猪肝细胞，以SV40大T抗原（SV40LT）和含人端粒酶反转录酶（hTERT）的重组反转录病毒感染，对其进行永生化；然后，对建立的猪肝细胞系进行生物学特性鉴定。结果原代猪肝细胞经转染含人端粒酶反转录酶和SV40大T抗原的重组反转录病毒后4～6周获得三个肝细胞样细胞克隆，其中，一个猪肝细胞克隆（HepLP）传代60代以上；永生化猪肝细胞在相差显微镜、扫描电镜和透射电镜下具有典型的肝细胞的形态；Western印迹法检测该细胞系表达人端粒酶反转录酶和SV40大T抗原。RT-PCR检测到永生化猪肝细胞表达白蛋白mRNA、ELISA双抗体夹心法检测到永生化猪肝细胞培养上清液中自蛋白的分泌，以5．0×10^6细胞数接种裸鼠，观察6个月无肿瘤形成。结论新建立的无致瘤性的永生化猪肝细胞系具有正常猪肝细胞的生物学基本功能。

关键词：肝,人工细胞系端粒,末端转移酶永生化抗原,多瘤病毒转化猪

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10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒X基因表达的抑制作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 841-845页

作者：侯伟倪勤沃健儿李敏伟刘克洲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院感染科

目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X... 详细信息

目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X基因开放阅读框(ORF)的A1376UG。将内有HBV X全基因片段(不含终止密码)的融合表达质粒pHBx-EGFP与10-23 DNAzyme共转染AD293细胞作为共转染组,用pHBx-EGFP单独转染AD293细胞作为对照组,分别用荧光显微镜观察并用流式细胞仪检测细胞荧光强度,同时用半定量一步法RT-PCR分析融合荧光蛋白HBx-EGFP mRNA的相对表达量。结果各共转染组细胞荧光蛋白HBx-EGFP的表达均明显弱于对照组(P<0．05);各试验组HBx-EGFP mRNA的相对表达量与对照组比较也均明显减少(P<0．05);各共转染组细胞之间HBx-EGFP的表达及HBx-EGFP mRNA的相对表达量差异无统计学意义(P>0．05)。结论10-23 DNAzyme对HBV X基因的表达有特异抑制作用,在HBV感染的基因治疗中会有潜在的应用价值。

关键词： 10-23 DNAzyme 乙型肝炎病毒(HBV) X基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)

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