检索结果-内蒙古大学图书馆

SV40介导的永生化人源性肝细胞表型鉴定

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 300-301页

作者：李兰娟盛国平李君章益民俞海英曹红翠徐威应红芳盛吉芳浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室 310003 浙江省立同德医院

本研究采用免疫组织化学和分子生物学方法等对SV40介导的永生化人源性肝细胞(HepLL细胞)进行生物学功能和表型特征评价.

关键词： SV40介导永生化人源性肝细胞表型鉴定免疫组织化学分子生物学方法

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对拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒基因型与病毒载量及其核苷酸序列分析

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中华传染病杂志 2007年第5期25卷 285-288页

作者：潘小平李兰娟杜维波李敏伟曹红翠陈智浙江大学医学院附属第一医院传染内科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的探讨对拉米夫定耐药患者HBV B、C基因型的病毒载量及其核苷酸序列突变等病毒学特性的差异。方法采用ELISA、实时荧光定量PCR和DNA序列分析的方法,检测53例对拉米夫定耐药患者的HBV基因型、病毒载量及其C、P基因核苷酸序列,并将测序... 详细信息

目的探讨对拉米夫定耐药患者HBV B、C基因型的病毒载量及其核苷酸序列突变等病毒学特性的差异。方法采用ELISA、实时荧光定量PCR和DNA序列分析的方法,检测53例对拉米夫定耐药患者的HBV基因型、病毒载量及其C、P基因核苷酸序列,并将测序结果与基因库中标准HBV基因型序列进行比较分析。结果53例拉米夫定耐药患者中,B基因型22例,C基因型31例;C基因型的YIDD突变率明显高于B基因型(87.1%比36.4%,P<0.01),且C基因型的病毒载量为(7.71±0.80)lg拷贝/mL,明显高于B基因型的(6.97±0.77)lg拷贝/mL(P<0.01);而B基因型的YVDD突变率和前C区突变(G1896A)明显高于C基因型(分别为63.6%比12.9%、77.3%比32.3%,P值均<0.01)。B、C基因型的核心启动子突变(T1762/A1764)比较,差异无统计学意义(31.8%比35.5%,P>0.05)。前C区/核心启动子的突变影响拉米夫定耐药患者的病毒水平。结论拉米夫定耐药患者HBV B、C基因型的YMDD基序分别以YVDD和YIDD变异为主,且基因型C的病毒载量比B基因型要高;B基因型易出现前C区突变(G1896A)。

关键词：启动区(遗传学) 变异(遗传学) 拉米夫定药物耐变性基因型肝炎病毒,乙型

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永生化猪肝细胞的建立及其鉴定

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中华传染病杂志 2008年第7期26卷 406-409页

作者：潘小平杜维波郝邵瑞曹红翠陈瑜盛国平朱春侠盛吉芳李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染内科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的建立永生化的猪肝细胞系，为生物人工肝、肝细胞移植、体外药物代谢模型提供合适的细胞源。方法应用胶原酶等四步灌流法分离获得原代猪肝细胞，以SV40大T抗原（SV40LT）和含人端粒酶反转录酶（hTERT）的重组反转录病毒感染，对其进... 详细信息

目的建立永生化的猪肝细胞系，为生物人工肝、肝细胞移植、体外药物代谢模型提供合适的细胞源。方法应用胶原酶等四步灌流法分离获得原代猪肝细胞，以SV40大T抗原（SV40LT）和含人端粒酶反转录酶（hTERT）的重组反转录病毒感染，对其进行永生化；然后，对建立的猪肝细胞系进行生物学特性鉴定。结果原代猪肝细胞经转染含人端粒酶反转录酶和SV40大T抗原的重组反转录病毒后4～6周获得三个肝细胞样细胞克隆，其中，一个猪肝细胞克隆（HepLP）传代60代以上；永生化猪肝细胞在相差显微镜、扫描电镜和透射电镜下具有典型的肝细胞的形态；Western印迹法检测该细胞系表达人端粒酶反转录酶和SV40大T抗原。RT-PCR检测到永生化猪肝细胞表达白蛋白mRNA、ELISA双抗体夹心法检测到永生化猪肝细胞培养上清液中自蛋白的分泌，以5．0×10^6细胞数接种裸鼠，观察6个月无肿瘤形成。结论新建立的无致瘤性的永生化猪肝细胞系具有正常猪肝细胞的生物学基本功能。

关键词：肝,人工细胞系端粒,末端转移酶永生化抗原,多瘤病毒转化猪

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以无纺布编织型生物反应器为基础的生物型人工肝治疗暴发性肝功能衰竭

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中华传染病杂志 2006年第1期24卷 24-28页

作者：杜维波李兰娟章益民李君陈佳佳潘小平曹红翠陈瑜陈月美俞海英盛国平浙江大学医学院第一附属医院传染内科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的设计一种新型生物型人工肝,评价其治疗暴发性肝功能衰竭的疗效。方法采用无纺布编织型生物反应器接种原代猪肝细胞构建生物型人工肝,对D-氨基半乳糖胺诱导的猪暴发性肝功能衰竭模型进行治疗。结果生物型人工肝治疗可显著降低受试动... 详细信息

目的设计一种新型生物型人工肝,评价其治疗暴发性肝功能衰竭的疗效。方法采用无纺布编织型生物反应器接种原代猪肝细胞构建生物型人工肝,对D-氨基半乳糖胺诱导的猪暴发性肝功能衰竭模型进行治疗。结果生物型人工肝治疗可显著降低受试动物血氨和血清L-乳酸浓度,稳定血糖水平,改善Fischer指数,并延长动物存活时间。结论以无纺布编制型生物反应器为基础构建的生物型人工肝对暴发性肝功能衰竭具有明显的肝支持作用,具有临床应用可行性。

关键词：肝,人工肝功能衰竭,急性生物反应器半乳糖胺猪

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国产某丙型肝炎病毒抗体试剂中吸光度/临界值的作用

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中华传染病杂志 2007年第4期25卷 206-210页

作者：李兰娟严力行朱发明马伟杭励晓涛庄辉浙江大学医学院附属第一医院传染内科卫生部传染病重点实验室浙江省传染病重点实验室浙江省血液中心卫生部血液安全研究重点实验室北京大学医学部微生物学系

目的研究某国产抗-HCV试剂样本吸光度/临界值(S/Co)的意义,探讨国产试剂检测抗-HCV的初步程序和标准。方法采用某国产试剂通过ELISA法检测295 000例无偿献血者的抗-HCV,对其阳性反应的样本采用Ortho抗-HCV试剂通过ELISA法进行检测。Orth... 详细信息

目的研究某国产抗-HCV试剂样本吸光度/临界值(S/Co)的意义,探讨国产试剂检测抗-HCV的初步程序和标准。方法采用某国产试剂通过ELISA法检测295 000例无偿献血者的抗-HCV,对其阳性反应的样本采用Ortho抗-HCV试剂通过ELISA法进行检测。Ortho试剂阳性反应的样本进行HCV重组免疫印迹实验(RIBA),并对其中的106例Ortho试剂阳性反应的样本进行核酸检测。结果在295 000例样本中,某国产试剂抗-HCV阳性反应为681例,阳性率为0.23%。某国产试剂阳性反应的样本经Ortho试剂检测后阳性反应为367例,符合率为53.8%,其中Ortho试剂S/Co值≥3.8为66.2%。在Ortho试剂S/Co值≥3.8的样本中,某国产试剂S/Co值≥8.0的占94.2%;而Ortho试剂S/Co值<3.8的样本中,某国产试剂S/Co值<8.0的占99.2%。367例Ortho阳性反应样本中,RIBA HCV阳性223例,阳性率为60.8%;在国产试剂S/Co值≥8.0的样本中,RIBA阳性率为95.7%;而同一种国产试剂S/Co值<8.0的样本中,RIBA阳性率为2.2%。106例Ortho试剂阳性反应样本中核酸检测阳性为42例。结论国产抗-HCV试剂在检测无偿献血者样本中存在较高的假阳性率,一定程度上造成了血源和血液的浪费。某国产试剂S/Co值≥8.0和Ortho试剂S/Co值≥3.8具有一定的相关性,在实验室检测抗-HCV上具有一定诊断价值。

关键词：肝炎病毒丙型分光光度法抗体病毒

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基因1b型HCV核心蛋白不同功能区域对HepG2细胞生长的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第5期28卷 411-415页

作者：颜学兵梅蕾陈智郑敏周林福许小燕吴炜徐州医学院附属第一医院传染科 221002 江苏省常熟市第二人民医院感染病科浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所、卫生部传染病重点实验室

目的研究基因1b型丙型肝炎病毒（HCV）不同病毒株编码的核心蛋白（CORE）：癌中心株（T）、癌旁株（NT）、C191（HCV—J6）及同一病毒株（T）编码的不同功能区域（1～172、1～126、1～58、59～126、127—172AA）在HCV致病机制中的作用... 详细信息

目的研究基因1b型丙型肝炎病毒（HCV）不同病毒株编码的核心蛋白（CORE）：癌中心株（T）、癌旁株（NT）、C191（HCV—J6）及同一病毒株（T）编码的不同功能区域（1～172、1～126、1～58、59～126、127—172AA）在HCV致病机制中的作用，为治疗HCV感染提供靶位。方法将含有3个不同病毒株（T、NT及C191）及T不同功能区域的CORE真核表达质粒，转染到HepG2细胞，用流式细胞仪检测Annexin V／PI，并用细胞生长实时观察仪观察细胞生长曲线。结果基因1b型T、NT、C191和T不同功能区域的CORE均能诱导HepG2细胞凋亡和坏死且抑制了细胞的生长，其中，T诱导细胞凋亡和坏死及抑制细胞生长强于NT和C191，T的CORE的N端1～58AA诱导细胞凋亡和坏死及抑制细胞生长均高于其他功能区域。结论HCV基因1b型不同病毒株及同一病毒株编码的CORE不同功能区域的分子致病机制存在一定的差异，N端的1～58AA在CORE的致病机制中起重要作用，可能是基因治疗的重要靶位之一。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白凋亡/坏死细胞生长曲线

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动态调节人工乳粘稠度和营养成分饲喂无菌大鼠效果研究

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2007年第3期33卷 259-264页

作者：王建国李兰娟卢领群萨晓婴戴方伟浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室浙江杭州310003 浙江省医学科学院浙江省实验动物中心浙江杭州310013

根据无菌大鼠乳鼠吮吸乳汁的规律,建立一套新的人工哺乳(AR)无菌乳鼠的方法.设计并配制6种适合不同日龄乳鼠的人工乳(LWF),并测定人工乳主要的营养成分含量和粘稠度等.无菌剖腹产术得到30只无菌乳鼠,采用吮吸法饲喂乳鼠至21日龄断乳,以3... 详细信息

根据无菌大鼠乳鼠吮吸乳汁的规律,建立一套新的人工哺乳(AR)无菌乳鼠的方法.设计并配制6种适合不同日龄乳鼠的人工乳(LWF),并测定人工乳主要的营养成分含量和粘稠度等.无菌剖腹产术得到30只无菌乳鼠,采用吮吸法饲喂乳鼠至21日龄断乳,以30只代乳母鼠哺乳(MR)的乳鼠为对照,每日称量乳鼠体重,观察生长发育情况,计算离乳时乳鼠的生存率,检查8对100日龄以上AR无菌大鼠的生育能力.6种人工乳除LWF-6外,其余人工乳的蛋白质、脂肪、糖类、灰分、钙、钾、钠、氯、磷的含量、总能量和pH与大鼠乳相似,但这些人工乳的粘稠度不同.从LWF-1至LWF-5,蛋白质、脂肪、糖类的含量、能量和粘稠度不断增加.虽然AR乳鼠的体重增长不如MR乳鼠(2日龄时,P<0.05;3日龄时,P<0.01),但其生长发育正常.AR乳鼠的离乳率为73.3%,MR鼠为100%.8对AR无菌大鼠都有生育力.说明采用动态调节人工乳粘稠度和营养成分含量的方法可以用于饲喂无菌乳鼠,并且存活率较高.

关键词：无菌大鼠人工乳粘稠度营养成分动态调节

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血管紧张素酶基因多态性与乙型肝炎肝纤维化指标的关系

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中华传染病杂志 2007年第7期25卷 403-405页

作者：何泽宝朱坚胜陈智曾文新朱敏王庚歌陈华忠方浩浙江省台州医院感染科临海市317000 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室浙江省台州医院中心实验室临海市317000

肝纤维化是可逆性病变，及时、有效制止肝纤维化的进展，可阻断肝硬化的发生。最近发现，在体外培养的激活的肝星状细胞表面有血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1）表达，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可使这些细胞产生收缩和增生，而肝星状细胞的激活... 详细信息

肝纤维化是可逆性病变，及时、有效制止肝纤维化的进展，可阻断肝硬化的发生。最近发现，在体外培养的激活的肝星状细胞表面有血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1）表达，血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可使这些细胞产生收缩和增生，而肝星状细胞的激活是肝纤维化的关键因素。血管紧张素酶（ACE）是肾素一血管紧张素系统（RAs）的关键酶，其最显著的作用是激活AngⅡ，在血管及其他组织，ACE能调节间质液内AngⅡ的最终浓度。目前研究表明肝脏局部存在RAS系统，

关键词：血管紧张素酶基因多态性肝纤维化指标血管紧张素Ⅱ1型受体乙型肝炎肾素一血管紧张素系统 AngⅡ 细胞表面可逆性病变

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血清转化生长因子β1水平在慢性乙型肝炎与乙型肝炎肝硬化患者中差异的意义

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世界华人消化杂志 2007年第29期15卷 3104-3106页

作者：何泽宝朱坚胜陈智朱敏曾文新陈华忠王庚歌方浩台州医院感染科浙江省临海市317000 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室浙江省杭州市310003 浙江省台州医院中心实验室浙江省临海市317000

目的:观察血清转化生长因子β1(TGFβ1)水平是否与肝脏炎症、纤维化程度相关及其在慢性乙型肝炎与乙肝肝硬化患者中的差异.方法:慢性乙肝(慢性肝炎组)65例,乙肝肝硬化(肝硬化组)56例,体检健康、乙肝标志物阴性者(正常对照组)50例,均空... 详细信息

目的:观察血清转化生长因子β1(TGFβ1)水平是否与肝脏炎症、纤维化程度相关及其在慢性乙型肝炎与乙肝肝硬化患者中的差异.方法:慢性乙肝(慢性肝炎组)65例,乙肝肝硬化(肝硬化组)56例,体检健康、乙肝标志物阴性者(正常对照组)50例,均空腹采血,肝纤维化指标(HA、CⅣ、PCⅢ、LN)采用放免法测定,血清TGFβ1检测采用ELISA.结果:慢性肝炎组血清TGFβ1水平明显高于肝硬化组和正常对照组(22±13μg/L vs 10±9μg/L,11±9μg/L,P<0.01),肝硬化组血清TGFβ1水平与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05).肝硬化组PCⅢ与血清TGFβ1水平相关(r=0.269,P=0.045),慢性肝炎和肝硬化组血清TGFβ1水平与肝功能、肝纤维化指标无明显相关性(P>0.05).结论:血清TGFβ1水平可协助诊断肝脏炎症程度与纤维化程度,但不能作为他们的判断标准.

关键词：转化生长因子β1 乙型病毒性肝炎纤维化炎症酶联免疫吸附

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转化生长因子β1基因多态性与乙型肝炎肝纤维化的关系研究

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中华传染病杂志 2006年第6期24卷 410-413页

作者：朱坚胜何泽宝陈智曾文新朱敏王庚歌陈华忠方浩台州医院感染科浙江省临海市317000 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室台州医院中心实验室浙江省临海市317000

肝纤维化是慢性肝病发展到肝硬化的必经之路，阻断肝纤维化形成对改善肝硬化预后有重要意义。转化生长因子β1（TGF β1）是已知的最强的肝纤维化促进因子之一。临床上肝纤维化的形成具有一定的个体差异，这可能与患者的基因多态有关。G... 详细信息

肝纤维化是慢性肝病发展到肝硬化的必经之路，阻断肝纤维化形成对改善肝硬化预后有重要意义。转化生长因子β1（TGF β1）是已知的最强的肝纤维化促进因子之一。临床上肝纤维化的形成具有一定的个体差异，这可能与患者的基因多态有关。Gewaltig等报道TGF β1＋869（T／C）、＋915（G／C）的多态性与丙型肝炎肝纤维化的发生有关，为明确TGF β1基因多态性与乙型肝炎肝纤维化的关系，进一步从基因水平上探讨、认识肝纤维化的发生机制，为今后肝纤维化基因治疗提供新的理论依据，我们选择＋869（T／C）、＋915（G／C）位点进行此项研究。

关键词：乙型肝炎肝纤维化转化生长因子β1 基因多态性肝纤维化形成慢性肝病促进因子个体差异基因水平

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