检索结果-内蒙古大学图书馆

华中科技大学学报（医学版） 2008年第3期37卷 290-294页

作者：彭国平周承吴炜孙雯田锋贺纪凯陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室杭州310031 浙江大学医学院附属口腔医院杭州310003 浙江大学医学院临床医学系杭州310023

目的构建具有免疫学活性的抗小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region),为进一步将其应用到动物体内奠定基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗小鼠CTLA-4单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细... 详细信息

目的构建具有免疫学活性的抗小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region),为进一步将其应用到动物体内奠定基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗小鼠CTLA-4单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至pGMET载体,测序正确后将其克隆至真核分泌型表达载体pSect2-GFP,将pSect2-GFP-ScFv纯化质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)并进行表达,同时经Zeocin筛选稳定表达株。用Western blot方法检测ScFv融合蛋白的表达,采用ELISA检测ScFv的亲和活性。结果经Zeocin筛选2周后,CHO细胞株可稳定表达GFP-ScFv蛋白。Western blot法证实GFP-ScFv蛋白在细胞上清和细胞裂解液中均有表达,大小约55kD。ELISA检测表明,CHO培养上清中的GFP-ScFv蛋白经浓缩初纯后能与重组小鼠CTLA-4纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力。结论成功构建了抗小鼠CTLA-4的ScFv真核表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv融合蛋白。

关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 单链抗体真核表达免疫学活性

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猴空泡病毒40核酸序列检测法的优化研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 550-554页

作者：葛长勇李鸿钧谢忠平孙茂盛吴南屏浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003 中国医学科学院医学生物学研究所

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设... 详细信息

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设计两对SV40 DNA检测引物，用Oligo 6．71软件和DNAMAN 6．0．40软件对引物参数进行分析，将分析结果与通常使用的检测引物进行比较。用不同稀释度SV40核酸序列作模板，比较4对引物检测的敏感性。分别用无菌水、Vero细胞DNA、SV40DNA作模板检测4对引物的特异性。结果对于21个SV40病毒株，优化引物对VP1和T的序列是保守的；对于接受号为J02400、NC_001669、AF316139和AF316141的4个病毒株，通常使用的引物对GCVP1和GCT的序列是保守的；用同一稀释度的SV40DNA作模板，引物对VP1和T的扩增效率明显高于引物对GCVP1和GCT；在特异性检测比较中，引物对VP1和T没有出现非特异性扩增条带，引物对GCVP1和GCT在100bp处出现非特异性扩增条带。结论优化的SV40核酸序列检测法具有敏感性高、特异性强、检测面广、引物及其PCR产物序列保守等特点。

关键词： SV40检测 PCR引物猴空泡病毒核酸序列检测法

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人巨细胞病毒感染中的细胞免疫机制

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国际流行病学传染病学杂志 2008年第3期35卷 182-184,I0004页

作者：赵宏马伟杭浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室杭州310003

人巨细胞病毒（HCMV）在人群中普遍易感，免疫力正常者多为隐性感染，可终身携带病毒。感染后，病毒激活机体免疫系统，产生病毒清除作用。在机体清除HCMV的免疫应答中，与机体其他免疫相比，固有免疫中的免疫细胞和获得性免疫中的细胞... 详细信息

人巨细胞病毒（HCMV）在人群中普遍易感，免疫力正常者多为隐性感染，可终身携带病毒。感染后，病毒激活机体免疫系统，产生病毒清除作用。在机体清除HCMV的免疫应答中，与机体其他免疫相比，固有免疫中的免疫细胞和获得性免疫中的细胞免疫起着更为重要的作用，同时巨细胞病毒也通过一系列的逃逸反应来对抗上述免疫的清除作用。

关键词：巨细胞病毒细胞免疫逃逸反应

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载脂蛋白A—Ⅰ与病毒感染的关系

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国际流行病学传染病学杂志 2008年第3期35卷 168-170,177页

作者：翁俊华陈智刘艳宁李淑萍浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室杭州310003

载脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）是高密度脂蛋白的主要结构蛋白之一。apoA-Ⅰ和动脉粥样硬化的负相关性已得到广泛的认同，对它们之间的关系已有了广泛而深入的研究。近年研究发现，apoA-Ⅰ和病毒感染之间也有很大相关性。此文综述了apoA-Ⅰ的... 详细信息

载脂蛋白A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）是高密度脂蛋白的主要结构蛋白之一。apoA-Ⅰ和动脉粥样硬化的负相关性已得到广泛的认同，对它们之间的关系已有了广泛而深入的研究。近年研究发现，apoA-Ⅰ和病毒感染之间也有很大相关性。此文综述了apoA-Ⅰ的基本结构、功能、在病毒感染中的作用，在其基础上，展望了apoA-Ⅰ的应用前景。

关键词：载脂蛋白A-Ⅰ 高密度脂蛋白病毒感染

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问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定

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浙江大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 585-591,621页

作者：姜久昆林旭瑷严杰薛峰浙江大学医学院病原生物学系浙江杭州310058 浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室基础医学微生物学研究室浙江杭州310003

目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增... 详细信息

目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。

关键词：钩端螺旋体,问号/免疫学细菌外膜蛋白质类/生物合成细菌外膜蛋白质类/分离外膜脂蛋白/属特异性抗原 LipL41/1/LipL41/2 抗原表位/预测噬菌体展示免疫学鉴定

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问号钩端螺旋体诱导J774A．1细胞凋亡及caspase-3、-6活化对凋亡的影响

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浙江大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 558-563页

作者：金丹丹董海艳严杰李立伟毛亚飞浙江大学医学院病原生物学系浙江杭州310058 浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室基础医学微生物学研究室浙江杭州310003

目的:了解问号钩端螺旋体(钩体)诱导小鼠单核-巨噬样细胞(J774A.1)凋亡的作用,以及caspase-3、-6活化对凋亡的影响。方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株J774A.1细胞感染模型。采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋... 详细信息

目的:了解问号钩端螺旋体(钩体)诱导小鼠单核-巨噬样细胞(J774A.1)凋亡的作用,以及caspase-3、-6活化对凋亡的影响。方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株J774A.1细胞感染模型。采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况。分别采用荧光比色法和WesternBlot,检测感染细胞caspase-3、-6活性及其底物(PARA和LaminA/C)剪切情况。结果:多种不同浓度的问号钩体赖株感染均可使J774A.1细胞发生凋亡,其中以问号钩体∶细胞=100∶1的比例感染时凋亡率最高(48.81%±5.95%)。感染细胞caspase-3和-6最大活性分别为(1453.41±36.07)FU和(618.65±39.82)FU,是未感染细胞的16.38和9.98倍。感染细胞的PARP和Lamin A/C均被剪切。Caspase-3、-6抑制剂对问号钩体赖株诱导的J774A.1细胞凋亡有明显的阻断作用。结论:问号钩体可诱导J774A.1细胞凋亡,caspase-3和-6与该细胞凋亡密切相关。

关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶酶/代谢钩端螺旋体,问号/致病力流式细胞术细胞凋亡信号传导/caspase

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不同血清群问号钩端螺旋体mce基因序列分析及表达模式的研究

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浙江大学学报（医学版） 2008年第6期37卷 564-571页

作者：张磊薛峰严杰毛亚飞李立伟浙江大学医学院病原生物学系浙江杭州310058 浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室基础医学微生物学研究室浙江杭州310003

目的:确定问号钩端螺旋体(简称钩体)株携带侵袭相关mce基因情况,原核表达mce基因并制备其抗血清,了解问号钩体感染细胞前后mce基因转录水平的变化。方法:采用PCR扩增13株问号钩体和1株双曲钩体全长mce基因片段,T-A克隆后测序。采用基因... 详细信息

目的:确定问号钩端螺旋体(简称钩体)株携带侵袭相关mce基因情况,原核表达mce基因并制备其抗血清,了解问号钩体感染细胞前后mce基因转录水平的变化。方法:采用PCR扩增13株问号钩体和1株双曲钩体全长mce基因片段,T-A克隆后测序。采用基因工程技术构建mce基因原核表达系统,SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图象分析系统检查目的重组蛋白rMce表达情况,采用Western Blot对表达的rMce进行鉴定。采用皮内免疫法制备兔抗rMce血清,免疫双扩散试验测定其效价。采用实时荧光定量RT-PCR,检测问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染J774A.1细胞前后mce基因转录水平的变化。结果:我国13株问号钩体株均携带mce基因,双曲钩体三宝垄群patoc型Patoc株则否。与报道的序列(GenBank accession No.:NP_712236)比较,所克隆的mce基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.02%～100%和97.91%～100%。所构建的mce基因原核表达系统能表达rMce,其产量为细菌总蛋白的5%。问号钩体56601株全菌抗血清能有效识别rMce。问号钩体56601株感染细胞后mce基因转录水平明显上调。结论:mce基因仅存在于致病性的问号钩体中,且其转录水平呈细胞接触上调模式,表明该基因与问号钩体致病性密切相关。mce基因产物是序列保守的外膜蛋白。所构建的mce基因原核表达系统及所制备的rMce抗血清为深入研究该基因功能提供了有效的手段。

关键词：钩端螺旋体,问号基因表达序列分析,DNA mce基因克隆/表达实时荧光定量RT—PCR

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慢性乙型肝炎抗病毒治疗若干进展——2008年APASL和ESAL会议精粹

慢性乙型肝炎抗病毒治疗若干进展——2008年APASL和ESAL会议精粹

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2008年浙江省感染病、肝病学术年会

作者：刘克洲浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室传染病研究所

近3年来,由于新的抗乙肝病毒药物的不断研发,一批新的抗病毒药物上市,包括聚乙二醇干扰素,恩替卡韦,替比夫定等,以及发表了大量长期随访研究资料,对于乙肝病毒感染自然史和疾病进展以及核苷(酸)类似物(NAs)疗效及耐药(包括耐药预测和耐... 详细信息

近3年来,由于新的抗乙肝病毒药物的不断研发,一批新的抗病毒药物上市,包括聚乙二醇干扰素,恩替卡韦,替比夫定等,以及发表了大量长期随访研究资料,对于乙肝病毒感染自然史和疾病进展以及核苷(酸)类似物(NAs)疗效及耐药(包括耐药预测和耐药管理策略)问题、抗病毒药物联合治疗,HBV与HDV/HCV/HIV重叠感染患者的治疗等都有了许多新认识。

关键词： HBeAg CHB APASL 慢性乙型肝炎抗病毒治疗 HBVDNA 慢乙肝患者

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葡萄糖转运蛋白-1反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞增殖的影响

葡萄糖转运蛋白-1反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞增殖的影响

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浙江省中西医结合学会耳鼻咽喉科专业委员会第六次学术年会暨省级继续教育学习班

作者：周水洪程瑛范骏陈晓明汪审清程可佳王勤瑛俞云松浙江大学医学院附属第一医院耳鼻咽喉科浙江大学医学院附属第一医院麻醉科传染病诊治国家重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所

目的观察反义Glut-1对喉癌Hep-2细胞增殖、Glut-1的表达情况及葡萄糖吸收的影响。方法克隆Glut-1基因,将Glut-1cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA3载体,构建反义Glut-1表达载体反义Glut-1pcDNA3(+)载体,稳定转染人喉癌Hep-2细胞,并通过MT... 详细信息

目的观察反义Glut-1对喉癌Hep-2细胞增殖、Glut-1的表达情况及葡萄糖吸收的影响。方法克隆Glut-1基因,将Glut-1cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA3载体,构建反义Glut-1表达载体反义Glut-1pcDNA3(+)载体,稳定转染人喉癌Hep-2细胞,并通过MTT法检测葡萄糖刺激的Hep-2细胞存活率及葡萄糖摄取的影响,用RT-PCR法检测Hep-2细胞的Glut-1的表达情况及用Western Blot法检测Glut-1蛋白表达情况。结果成功克隆了Glut-1基因,并构建了携带反义Glut-1基因的真核表达载体反义Glut-1pcDNA3(+)载体,将其稳定转染人喉癌Hep-2细胞,获得了稳定表达反义Glut-1的细胞系,反义Glut-1pcDNA3载体的Hep-2细胞葡萄糖的吸收明显减少;RT-PCR结果显示PCR扩增产物为479bp大小的特异性条带,反义组与对照组和空白对照组相比Glut-1扩增条带的亮度明显降低(P<0.001)。随着时间的延长Glut-1表达下降(P<0.001),但随着葡萄糖浓度的增大Glut-1表达上调(P<0.001);在转染后24h,Western Blot法检测Glut-1蛋白表达,发现相同葡萄糖刺激浓度作用,反义Glut-1转染组Glut-1蛋白水平随作用时间延长下明显下降(P<0.01),随葡萄糖浓度的增加,反义Glut-1对Glut-1蛋白水平下调作用就越明显(P<0.01)。结论反义Glut-1基因转染可以有效地抑制喉癌Hep-2细胞的Glut-1的表达及葡萄糖的吸收,抑制喉癌Hep-2细胞的生长,以Glut-1作为靶点,阻断Glut-1的表达,为一种新的喉癌治疗策略。

关键词：反义葡萄糖转运蛋白-1 基因转染喉癌

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猴空泡病毒40核酸序列检测法的优化研究

猴空泡病毒40核酸序列检测法的优化研究

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2008年浙江省感染病、肝病学术年会

作者：葛长勇李鸿钧谢忠平孙茂盛吴南屏浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所

目的:对通常使用的猴空泡病毒40(Simian vacuolating virus 40,SV40)核酸序列检测法进行优化,寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检引物。方法:以21个SV40毒株完全基因组为基础数据,用Primer Premier 5.00软件重新设计两对... 详细信息

目的:对通常使用的猴空泡病毒40(Simian vacuolating virus 40,SV40)核酸序列检测法进行优化,寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检引物。方法:以21个SV40毒株完全基因组为基础数据,用Primer Premier 5.00软件重新设计两对SV40 DNA检测物,用Oligo 6.71软件和DNAMAN 6.0.40软件对引物参数进行分析,将分析结果与通常使用的检测引物进行比较。用不同稀释度SV40核酸序列作模板,比较四对引物检测的敏感性。分别用无菌水、VERO细胞DNA、SV40DNA作模板检测四对引物的特异性。结果:对于21个SV40病毒株而言,优化引物对VP1和T的序列是保守的;对于接受号为J02400、NC-001669、AF316139和AF316141的四个病毒株而言,通常使用的引物对GCVP1和GCT的序列是保守的;用同一稀释度的SV40DNA作模板,引物对VP1和T的扩增效率明显高于引物对GCVP1和GCT;在特异性检测比较中,引物对VP1和T没有出现非特异性扩增条带,引物对GCVP1和GCT在100bp处出现非特异性扩增条带。结论:优化的SV40核酸序列检测法具有敏感性高、特异性强、检测面广、引物及其PCR产物序列保守等特点。

关键词：核酸序列特异性稀释度猴空泡病毒优化研究检测法

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