检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第12期26卷 1108-1111页

作者：皮博睿陈亚岗俞云松俞美红须欣李兰娟浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室传染病研究所杭州310003

目的明确甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和溶血性葡萄球菌(MRSH)所包含的葡萄球菌染色体mec盒(staphylococcal cassette chromosome meg,SCCmec)类型,并比较两者的差异。方法分别收集本院住院患者临床标本中分离的60株MRSA和88株MRS... 详细信息

目的明确甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和溶血性葡萄球菌(MRSH)所包含的葡萄球菌染色体mec盒(staphylococcal cassette chromosome meg,SCCmec)类型,并比较两者的差异。方法分别收集本院住院患者临床标本中分离的60株MRSA和88株MRSH。共设计10对引物,采用PCR法分别扩增mec复合体和ccr复合体的各个特征序列,分析其SCCmec类型。结果60株MR- SA均为Ⅲ型SCCmec;88株MRSH中7株为V型SCCmec,1株为Ⅲ型SCCmec,其余均为新的组合或是无法分型。结论SCCmec在MRSA和MRSH中分布特点差别较大,MRSH中可能存在较多新的型别。

关键词：甲氧西林细菌耐药葡萄球菌葡萄球菌染色体mec盒

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10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒X基因表达的抑制作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 841-845页

作者：侯伟倪勤沃健儿李敏伟刘克洲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院感染科

目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X... 详细信息

目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X基因开放阅读框(ORF)的A1376UG。将内有HBV X全基因片段(不含终止密码)的融合表达质粒pHBx-EGFP与10-23 DNAzyme共转染AD293细胞作为共转染组,用pHBx-EGFP单独转染AD293细胞作为对照组,分别用荧光显微镜观察并用流式细胞仪检测细胞荧光强度,同时用半定量一步法RT-PCR分析融合荧光蛋白HBx-EGFP mRNA的相对表达量。结果各共转染组细胞荧光蛋白HBx-EGFP的表达均明显弱于对照组(P<0．05);各试验组HBx-EGFP mRNA的相对表达量与对照组比较也均明显减少(P<0．05);各共转染组细胞之间HBx-EGFP的表达及HBx-EGFP mRNA的相对表达量差异无统计学意义(P>0．05)。结论10-23 DNAzyme对HBV X基因的表达有特异抑制作用,在HBV感染的基因治疗中会有潜在的应用价值。

关键词： 10-23 DNAzyme 乙型肝炎病毒(HBV) X基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)

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IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用

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浙江大学学报（医学版） 2006年第6期35卷 610-614页

作者：赵刚吴南屏姚航平浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室

目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与I... 详细信息

目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与IFN-γ基因的原核质粒p et44b-gp 120/IFN-γ,在*** BL 21(DE 3)细胞中进行低温诱导蛋白表达,然后经纯化后免疫BALB/c小鼠。实验设皮下注射gp120/IFN-γ组、gp120组和PBS三组,以检测H IV-1gp120诱导的T细胞增殖能力,CTL杀伤作用以及Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4,IL-10)的表达情况。结果:通过PAGE和W estern b lot检测,证实上述两种蛋白在DE 3细胞中得到表达。免疫学实验表明,针对H IV-1 gp120的特异性T淋巴细胞增殖作用、特异性CTL杀伤作用,以及Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ表达在三组之间均有显著性差异(P<0.05),gp120/IFN-γ组高于gp120组,gp120组高于PBS组(P<0.05)。反映体液免疫反应的Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达在三组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:协同应用IFN-γ基因可明显加强H IV-1gp 120基因的细胞免疫反应。

关键词：干扰素Ⅱ型 HIV包膜蛋白质gp120/代谢佐剂,免疫 HIV gp120 IFN-γ 融合表达

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原发性肝癌组织中Kruppel样因子6基因的变异及其抗细胞增殖功能的改变

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中华肝脏病杂志 2006年第2期14卷 109-113页

作者：潘修成陈智陈峰陈晓红周承羊正纲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部重点实验室杭州310003

目的初步探讨基因突变对Kruppel样因子6(KLF6)抗肝癌细胞增殖功能的影响及机制。方法以聚合酶链反应(PCR)扩增原发性肝癌及其癌旁组织KLF6基因外显子2序列,对扩增的PCR产物进行双向序列测定。构建野生型及突变型KLF6真核表达质粒并分别... 详细信息

目的初步探讨基因突变对Kruppel样因子6(KLF6)抗肝癌细胞增殖功能的影响及机制。方法以聚合酶链反应(PCR)扩增原发性肝癌及其癌旁组织KLF6基因外显子2序列,对扩增的PCR产物进行双向序列测定。构建野生型及突变型KLF6真核表达质粒并分别转染人肝癌细胞株HepG2,流式细胞仪及四甲基偶氮唑盐试验观察KLF6基因对细胞周期及细胞增殖活性的影响。以western blot技术检测外源KLF6 基因对HepG2细胞p21WAF1表达的影响。结果 23例原发性肝癌组织中2例(8.7％)出现KLF6基因突变, 其中1例导致氨基酸改变(W162G)。转染野生型KLF6的HepG2细胞G0～G1期所占细胞的比例明显增高,而转染突变型KLF6实验组G0～G1期细胞无显著增加。转染野生型KLF6对HepG2细胞生长的抑制率显著高于突变型KLF6实验组和空载体实验对照组。外源野生型KLF6基因能上调肝癌细胞p21WAF1表达,而突变型KLF6基因上调p21WAF1表达的能力较低。结论 KLF6基因突变可能在原发性肝癌发病机制中起到一定作用,但基因突变可能不是KLF6基因失活的主要原因。上调p21WAF1表达是KLF6基因抑制肝癌细胞增殖的重要途径。

关键词：基因肿瘤抑制癌肝细胞 p21WAF1

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氨基苷类高水平耐药肠球菌的耐药性及修饰酶基因分布

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中国感染与化疗杂志 2006年第3期6卷 163-167页

作者：瞿婷婷杜小幸陈亚岗俞云松李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的明确临床分离的氨基苷类高水平耐药肠球菌(HLAR)耐药性及修饰酶基因类型。方法用琼脂筛选法筛选出HLAR、庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)及链霉素高水平耐药肠球菌(HLSR);采用K-B法测定粪肠球菌及屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性;PC... 详细信息

目的明确临床分离的氨基苷类高水平耐药肠球菌(HLAR)耐药性及修饰酶基因类型。方法用琼脂筛选法筛选出HLAR、庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)及链霉素高水平耐药肠球菌(HLSR);采用K-B法测定粪肠球菌及屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性;PCR及序列分析法检测7种氨基苷类修饰酶基因。结果肠球菌中HLAR为73.6%。利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁对HLAR的抗菌作用最好,未检出耐药株。屎肠球菌中β内酰胺类抗生素耐药株以及喹诺酮类药物耐药株明显高于粪肠球菌。所有的屎肠球菌氨基苷类高耐株对氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦及环丙沙星均耐药。aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因是HLGR的主要耐药基因,占HLGR的92.6%;3株HLGR存在与aph(2")-Id高同源性的基因。而6-'ant、3"-ant及str基因在HLSR中的检出率低。结论HLAR已成为医院感染的重要耐药菌。HLGR主要通过aac(6')-Ie-aph(2")-Ia基因编码的修饰酶造成对庆大霉素高度耐药。

关键词：肠球菌氨基苷类高水平耐药氨基苷类修饰酶

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10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的切割活性

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浙江大学学报（医学版） 2006年第5期35卷 507-511页

作者：侯伟沃健儿刘克洲李敏伟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室浙江杭州310003

目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的... 详细信息

目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的底物RNA,观察D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9对其的体外切割效应。以D rzBC-9为例,观察不同浓度的M gC l2对体外切割效率的影响,根据L inew eaver Burk作图法,计算相关的酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km。结果:通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA,其大小为300 nt。在特定的切割条件下,D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割,切割产物分别为109 nt和191 n。t以D rzBC-9为例,在切割反应体系中缺乏M gC l2时,未见有切割反应。M gC l2浓度在150 mm ***-1时达到最高切割效率,再提高M gC l2的浓度,切割效率未见明显增大。酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km分别为1.4×10-9m ***-1,1.6 m in-1和1.1×109m ***-1.m in-1。结论:针对乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzym e在体外对相应的转录产物有特异切割作用。

关键词： DNA催化性 DNA,单es,链肝炎病毒,乙型/遗传学基因组,病毒/遗传学重组,遗传转染

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肝移植受者术后巨细胞病毒抗原血症的发生及其影响因素分析

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中华医学杂志 2006年第48期86卷 3442-3444页

作者：范骏陈晓明杨美芳薛寒高海女范维薇马伟杭李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部病毒性传染病重点实验室杭州310003

巨细胞病毒(cytomegalvirus,CMV)感染正常人群后通常呈潜伏状态,当机体处于免疫功能受损或受抑制状态时,潜伏的CMV可能被激活.肝移植受体术后免疫系统功能大大低于正常人群,CMV易被激活而导致严重的CMV病[1],并与移植后急慢性排斥反应有... 详细信息

巨细胞病毒(cytomegalvirus,CMV)感染正常人群后通常呈潜伏状态,当机体处于免疫功能受损或受抑制状态时,潜伏的CMV可能被激活.肝移植受体术后免疫系统功能大大低于正常人群,CMV易被激活而导致严重的CMV病[1],并与移植后急慢性排斥反应有关[2].监测移植术后CMV活动性感染的主要方法是测定外周血白细胞中是否出现CMVpp65抗原--即CMV抗原血症[3].借鉴骨髓移植、肾移植经验[4],肝移植受者术后定期、定量检测CMVpp65,并常规给予抗病毒药物预防而控制CMV感染.但仍有不少肝移植受者术后发生CMV感染,是否与某些因素有关?我们回顾性分析2001年至2004年间我院肝移植受者CMV抗原血症的发生情况及多种因素,期望能为临床诊断和抗病毒治疗提供参考。

关键词：巨细胞病毒抗原血症肝移植受者移植术后 CMVpp65 活动性感染免疫功能受损免疫系统功能慢性排斥反应

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HBsAg重组腺病毒转染的树突状细胞诱导BALB／c小鼠抗HBV免疫的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第6期26卷 553-559页

作者：黄茵陈智贾红宇吴伟蔡玲斐周承浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室 310018 杭州师范学院基础医学部杭州师范学院基础医学部免疫学教研室

目的研究HBsAg重组腺病毒转染的小鼠树突状细胞(DC)体内外免疫刺激活性和诱导小鼠抗HBV免疫的特点。方法BALB／c小鼠的骨髓细胞体外扩增为DC,转染HBsAg重组腺病毒Ad-S或被HBsAg蛋白冲击后,流式细胞术分析DC的表型,混合淋巴细胞反应(MLR... 详细信息

目的研究HBsAg重组腺病毒转染的小鼠树突状细胞(DC)体内外免疫刺激活性和诱导小鼠抗HBV免疫的特点。方法BALB／c小鼠的骨髓细胞体外扩增为DC,转染HBsAg重组腺病毒Ad-S或被HBsAg蛋白冲击后,流式细胞术分析DC的表型,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC的刺激活性;或与pcDNA3．1(+)-S质粒分别免疫小鼠后,LDH法测定脾细胞CTL活性,放免法检测血清抗- HBs;流式细胞术分析体外自体MLR中及免疫后小鼠脾脏T细胞内细胞因子。结果DC／Ad-S、DC／HBsAg和各对照组DC之间的表型和MLR差异无统计学意义,并均刺激TH和Tc分泌IFN-γ。DC／Ad-S免疫后2周能诱导比DNA疫苗更强产生IFN-γ的TH(P<0．05),以及比DC／HBsAg和DNA疫苗更强分泌IFN-γ的Tc(均P<0．01)和特异性CTL(P<0．05,P<0．01)。但DC／Ad-S和DC/HBsAg诱导的CTL反应及Tc分泌IFN-γ在免疫后4周均明显减弱,且诱导抗-HBs作用弱于DNA疫苗。结论HBsAg重组腺病毒转染的DC比HBsAg冲击的DC及DNA疫苗能诱导更强的TH1／Tc1(Ⅰ型)细胞免疫和特异性CTL反应,是诱导抗HBV细胞免疫的有效刺激细胞。

关键词：乙肝表面抗原树突状细胞腺病毒 Ⅰ型免疫应答细胞毒性T淋巴细胞

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转化生长因子β1基因多态性与乙型肝炎肝纤维化的关系研究

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中华传染病杂志 2006年第6期24卷 410-413页

作者：朱坚胜何泽宝陈智曾文新朱敏王庚歌陈华忠方浩台州医院感染科浙江省临海市317000 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室台州医院中心实验室浙江省临海市317000

肝纤维化是慢性肝病发展到肝硬化的必经之路，阻断肝纤维化形成对改善肝硬化预后有重要意义。转化生长因子β1（TGF β1）是已知的最强的肝纤维化促进因子之一。临床上肝纤维化的形成具有一定的个体差异，这可能与患者的基因多态有关。G... 详细信息

肝纤维化是慢性肝病发展到肝硬化的必经之路，阻断肝纤维化形成对改善肝硬化预后有重要意义。转化生长因子β1（TGF β1）是已知的最强的肝纤维化促进因子之一。临床上肝纤维化的形成具有一定的个体差异，这可能与患者的基因多态有关。Gewaltig等报道TGF β1＋869（T／C）、＋915（G／C）的多态性与丙型肝炎肝纤维化的发生有关，为明确TGF β1基因多态性与乙型肝炎肝纤维化的关系，进一步从基因水平上探讨、认识肝纤维化的发生机制，为今后肝纤维化基因治疗提供新的理论依据，我们选择＋869（T／C）、＋915（G／C）位点进行此项研究。

关键词：乙型肝炎肝纤维化转化生长因子β1 基因多态性肝纤维化形成慢性肝病促进因子个体差异基因水平

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HBSAg基因修饰的树突状细胞诱导HBV转基因小鼠的免疫应答

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中华传染病杂志 2006年第5期24卷 306-310页

作者：黄茵陈智贾红宇吴炜蔡玲斐周承浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003 杭州师范学院基础医学部杭州师范学院基础医学部免疫学教研室

目的探讨HBsAg重组腺病毒Ad-S转染的小鼠树突状细胞(DC)诱导HBV转基因(Tg)小鼠免疫应答的作用特点及其可能的治疗作用。方法Tg小鼠的骨髓细胞体外扩增为DC,转染Ad-S或被HBsAg蛋白冲击后,与pcDNA3．1(+)-S质粒分别免疫Tg鼠,用流式细胞术... 详细信息

目的探讨HBsAg重组腺病毒Ad-S转染的小鼠树突状细胞(DC)诱导HBV转基因(Tg)小鼠免疫应答的作用特点及其可能的治疗作用。方法Tg小鼠的骨髓细胞体外扩增为DC,转染Ad-S或被HBsAg蛋白冲击后,与pcDNA3．1(+)-S质粒分别免疫Tg鼠,用流式细胞术、乳酸脱氢酶释放法、酶联免疫分析(ELISA)、荧光定量聚合酶链反应(PCR)等分别检测脾脏T细胞内细胞因子和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性、血清HBsAg、抗-HBs、HBV DNA及丙氨酸转氨酶(ALT)水平；病理和免疫组化分析肝脏组织学及HBsAg和HBcAg表达。结果免疫后1～2周,DC/Ad-S比DC/HBsAg和pcDNA3．1(+)-S诱导Tc分泌干扰索γ(IFN-γ)和特异性CTL均显著增强,而DC/ HBsAg组CTL较pcDNA3．1(+)-S组增强(P＜0．05)；DC/HBsAg免疫后1、2、4周CTL迅速减弱,DC/Ad-S在1、2周CTL差异不明显,但至4周时明显减弱。免疫后1～4周,对Tg鼠血清HBsAg、HBV DNA及肝组织HBcAg和HBsAg表达的抑制作用最强为DC/Ad-S免疫,其次为DC/HBsAg,显著强于pcDNA3．1(+)-s(P＜0．05或P＜0．01)。肝脏组织学、血清抗-HBs和ALT水平各组差异无统计学意义。结论Ad-S转染的DC比HBsAR冲击的DC和DNA疫苗诱导更强的Tcl和CTL应答,能较迅速抑制HBV转基因小鼠血清HBsAg、HBV DNA和肝脏HBcAg和HBsAg表达。

关键词：肝炎表面抗原乙型树突细胞腺病毒科 T淋巴细胞细胞毒性小鼠转基因

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