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2007年传染病诊治高峰论坛暨浙江省感染病学、肝病学学术年会

作者：赵刚吴南屏姚航平浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室 310003

在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染中，细胞介导的免疫反应发挥着主导作用。本研究将具有上调细胞免疫反应的Th1型细胞因子— gamma 干扰素与具有良好抗原性及特异性且体外表达稳定的HIV-1的衣壳蛋白-gp120 N端基因片段，构建成抗原-细胞因子... 详细信息

在人类免疫缺陷病毒(HIV)感染中，细胞介导的免疫反应发挥着主导作用。本研究将具有上调细胞免疫反应的Th1型细胞因子— gamma 干扰素与具有良好抗原性及特异性且体外表达稳定的HIV-1的衣壳蛋白-gp120 N端基因片段，构建成抗原-细胞因子的DNA 重组体，研究了IFN-对HIV-1gp120 抗原刺激小鼠后的免疫调节作用，为临床治疗HIV-1感染进行了探讨。

关键词： HIV感染融合蛋白免疫调节细胞病理学

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中国儿童AIDS患者与成人患者多种免疫因子的相关分析和比较

中国儿童AIDS患者与成人患者多种免疫因子的相关分析和比较

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传染病诊治高峰论坛暨2007年浙江省感染病学、肝病学学术年会

作者：吴南屏张福杰靳昌忠赵燕姚航平赵红心吴灵娇魏红山李在村浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室北京地坛医院浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室北京地坛医院北京佑安医院

儿童 AIDS 患者的病情特点不同于成人患者,有其特殊之处,表现为免疫功能较低,发病早, 病毒载量高,疾病进展快,常伴有营养不良、发育迟缓、代谢异常等,而且机会性感染、卡波西肉瘤等并发症也较成人多见,病程比较复杂。目前我国儿童艾滋... 详细信息

儿童 AIDS 患者的病情特点不同于成人患者,有其特殊之处,表现为免疫功能较低,发病早, 病毒载量高,疾病进展快,常伴有营养不良、发育迟缓、代谢异常等,而且机会性感染、卡波西肉瘤等并发症也较成人多见,病程比较复杂。目前我国儿童艾滋病方面的资料较少,治疗经验更是有限,我国儿童感染者有何免疫学特点,与成人比较有哪些不同,均无详细的资料。因此,就我国儿童 AIDS 患者的免疫状况进行研究十分必要。本实验对我国儿童 AIDS 患者 Th1/Th2免疫因子、趋化因子及 MSP 等进行了初步分析研究,并与成人患者做比较,为我国儿童艾滋病的防治提供基础资料。

关键词：成人患者儿童患者免疫因子相关分析

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中国儿童AIDS患者与成人患者多种免疫因子的相关分析和比较

中国儿童AIDS患者与成人患者多种免疫因子的相关分析和比较

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2007年传染病诊治高峰论坛暨浙江省感染病学、肝病学学术年会

作者：吴南屏张福杰靳昌忠赵燕姚航平赵红心吴灵娇魏红山李在村浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室310003 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京地坛医院北京佑安医院

儿童AIDS患者的病情特点不同于成人患者，有其特殊之处，表现为免疫功能较低，发病早，病毒载量高，疾病进展快，常伴有营养不良、发育迟缓、代谢异常等，而且机会性感染、卡波西肉瘤等并发症也较成人多见，病程比较复杂。本文对我... 详细信息

儿童AIDS患者的病情特点不同于成人患者，有其特殊之处，表现为免疫功能较低，发病早，病毒载量高，疾病进展快，常伴有营养不良、发育迟缓、代谢异常等，而且机会性感染、卡波西肉瘤等并发症也较成人多见，病程比较复杂。本文对我国儿童AIDS患者Th1/Th2免疫因子、趋化因子及MSP等进行了分析研究，并与成人患者做比较，为我国儿童艾滋病的防治提供了基础资料。

关键词：儿童艾滋病艾滋病防治细胞病理学

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不同结合臂长10-23DNAzymes对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用

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中华内科杂志 2006年第5期45卷 396-399页

作者：侯伟沃健儿刘克洲李敏伟陈离伟胡中荣刘荣华胡敏君浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的探讨不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用。方法设计并合成不同结合臂长的1023DNAzymes,能分别针对乙型肝炎病毒S基因和C基因开放阅读框A157UG和A1816UG。不同的1023DNAzymes分别转染2... 详细信息

目的探讨不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达的抑制作用。方法设计并合成不同结合臂长的1023DNAzymes,能分别针对乙型肝炎病毒S基因和C基因开放阅读框A157UG和A1816UG。不同的1023DNAzymes分别转染2.2.15细胞,放射免疫分析法测定2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg水平,实时荧光定量PCR法测定2.2.15细胞培养上清中HBVDNA水平。MTT法检测细胞毒性。结果不同结合臂长的1023DNAzymes在0.1～2.5μmol/L浓度范围内均能有效抑制HBsAg和HBeAg的表达,抑制效应可长达72h。在同一剂量相同转染时间的条件下,不同结合臂长的1023DNAzymes对HBsAg和HBeAg表达的抑制率呈以下关系:DrzBS9>DrzBS8>DrzBS7;DrzBC9>DrzBC8>DrzBC7。DrzBS9和DrzBC9在2.5μmol/L剂量条件下,转染48h后对HBsAg和HBeAg表达的抑制率可分别高达95%和92%。不同结合臂长的1023DNAzymes对2.2.15细胞培养上清中HBVDNA水平并无明显影响。MTT细胞毒性检测表明,在0.1～2.5μmol/L浓度范围内未见1023DNAzymes对2.2.15细胞的毒性作用。结论不同结合臂长1023DNAzymes在2.2.15细胞内对乙型肝炎病毒S基因和C基因表达均有一定的抑制作用,DrzBS9和DrzBC9的抑制作用较强。

关键词： 10-23 DNAzyme S基因 C基因乙型肝炎病毒

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一种新的质粒介导的肠球菌氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-Ie

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中华医学杂志 2006年第9期86卷 596-599页

作者：瞿婷婷张樱俞云松陈亚岗魏泽庆李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的明确庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)新氨基糖苷类耐药基因及其传播机制。方法采用琼脂筛选法筛选获得HLGR,用琼脂稀释法及K-B纸片法进行抗菌药物的药敏试验,并通过聚合酶链反应(PCR)、质粒提取、Southern杂交、酶切克隆测序对耐药... 详细信息

目的明确庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)新氨基糖苷类耐药基因及其传播机制。方法采用琼脂筛选法筛选获得HLGR,用琼脂稀释法及K-B纸片法进行抗菌药物的药敏试验,并通过聚合酶链反应(PCR)、质粒提取、Southern杂交、酶切克隆测序对耐药基因及其传播机制进行研究。结果肠球菌可通过产新的质粒介导的氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-Ie编码的修饰酶APH(2”)-Ie引起HLGR。酶切克隆测序显示aph(2”)-Ie与染色体介导的aph(2”)-Id有较高的氨基酸同源性,其上游存在编码转座酶TnpA的插入序列,下游存在编码链霉素腺苷转移酶(str)基因。Southern杂交证实该耐药基因位于16kb左右的质粒上。结论HLGR可由一种新的质粒介导的APH(2”)-Ie的氨基糖苷类修饰酶引起,并可通过转座酶与其他耐药基因一起在质粒或染色体之间进行传播。

关键词：肠球菌属抗药性质粒抗生素类氨基糖苷

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中国儿童与成人艾滋病患者的免疫活化水平比较

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中国医学科学院学报 2006年第5期28卷 647-650页

作者：吴南屏张福杰靳昌忠赵燕姚航平赵红心吴灵娇魏红山李在村浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的比较中国儿童及成人艾滋病(AIDS)患者的免疫活化水平。方法以103例儿童AIDS患者、38例成人AIDS患者、88名健康儿童和72名健康成人为研究对象,取抗凝血进行流式细胞计数检测CD4+T细胞数,荧光定量RT-PCR测定血清HIV-RNA滴度,采用ELIS... 详细信息

目的比较中国儿童及成人艾滋病(AIDS)患者的免疫活化水平。方法以103例儿童AIDS患者、38例成人AIDS患者、88名健康儿童和72名健康成人为研究对象,取抗凝血进行流式细胞计数检测CD4+T细胞数,荧光定量RT-PCR测定血清HIV-RNA滴度,采用ELISA法检测血清中Th1/Th2免疫因子(IL-10、IL-16、IL-18)、趋化因子[包括调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)]及巨噬细胞刺激蛋白(MSP)的水平,并以β2微球蛋白(β2-MG)和可溶性Fas(sFas)的表达水平作为机体免疫活化指标。结果儿童AIDS患者组的CD4+T细胞数显著低于儿童正常对照组(P<0.01),各细胞因子水平较儿童正常对照组显著升高(P均<0.01)。成人AIDS患者组的CD4+T细胞数显著低于成人正常对照组(P<0.01),除MSP水平显著低于成人对照组(P<0.01)外,其余各细胞因子均显著高于成人对照组(P<0.01)。儿童AIDS患者组各因子水平除SDF-1α和β2-MG与成人AIDS患者组差异无显著性(P>0.05)外,其余均显著高于成人AIDS患者组(P<0.01)。结论儿童和成人AIDS患者的免疫系统均表现为明显的异常活化,儿童患者的免疫活化水平高于成人患者。

关键词：获得性免疫缺陷综合征趋化因子白细胞介素巨噬细胞刺激蛋白免疫活化

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甲氧西林耐药葡萄球菌SCCmec研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第12期26卷 1108-1111页

作者：皮博睿陈亚岗俞云松俞美红须欣李兰娟浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室传染病研究所杭州310003

目的明确甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和溶血性葡萄球菌(MRSH)所包含的葡萄球菌染色体mec盒(staphylococcal cassette chromosome meg,SCCmec)类型,并比较两者的差异。方法分别收集本院住院患者临床标本中分离的60株MRSA和88株MRS... 详细信息

目的明确甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和溶血性葡萄球菌(MRSH)所包含的葡萄球菌染色体mec盒(staphylococcal cassette chromosome meg,SCCmec)类型,并比较两者的差异。方法分别收集本院住院患者临床标本中分离的60株MRSA和88株MRSH。共设计10对引物,采用PCR法分别扩增mec复合体和ccr复合体的各个特征序列,分析其SCCmec类型。结果60株MR- SA均为Ⅲ型SCCmec;88株MRSH中7株为V型SCCmec,1株为Ⅲ型SCCmec,其余均为新的组合或是无法分型。结论SCCmec在MRSA和MRSH中分布特点差别较大,MRSH中可能存在较多新的型别。

关键词：甲氧西林细菌耐药葡萄球菌葡萄球菌染色体mec盒

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10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒X基因表达的抑制作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 841-845页

作者：侯伟倪勤沃健儿李敏伟刘克洲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院感染科

目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X... 详细信息

目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成3种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7、DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异地识别HBV X基因开放阅读框(ORF)的A1376UG。将内有HBV X全基因片段(不含终止密码)的融合表达质粒pHBx-EGFP与10-23 DNAzyme共转染AD293细胞作为共转染组,用pHBx-EGFP单独转染AD293细胞作为对照组,分别用荧光显微镜观察并用流式细胞仪检测细胞荧光强度,同时用半定量一步法RT-PCR分析融合荧光蛋白HBx-EGFP mRNA的相对表达量。结果各共转染组细胞荧光蛋白HBx-EGFP的表达均明显弱于对照组(P<0．05);各试验组HBx-EGFP mRNA的相对表达量与对照组比较也均明显减少(P<0．05);各共转染组细胞之间HBx-EGFP的表达及HBx-EGFP mRNA的相对表达量差异无统计学意义(P>0．05)。结论10-23 DNAzyme对HBV X基因的表达有特异抑制作用,在HBV感染的基因治疗中会有潜在的应用价值。

关键词： 10-23 DNAzyme 乙型肝炎病毒(HBV) X基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)

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原发性肝癌组织中Kruppel样因子6基因的变异及其抗细胞增殖功能的改变

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中华肝脏病杂志 2006年第2期14卷 109-113页

作者：潘修成陈智陈峰陈晓红周承羊正纲浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部重点实验室杭州310003

目的初步探讨基因突变对Kruppel样因子6(KLF6)抗肝癌细胞增殖功能的影响及机制。方法以聚合酶链反应(PCR)扩增原发性肝癌及其癌旁组织KLF6基因外显子2序列,对扩增的PCR产物进行双向序列测定。构建野生型及突变型KLF6真核表达质粒并分别... 详细信息

目的初步探讨基因突变对Kruppel样因子6(KLF6)抗肝癌细胞增殖功能的影响及机制。方法以聚合酶链反应(PCR)扩增原发性肝癌及其癌旁组织KLF6基因外显子2序列,对扩增的PCR产物进行双向序列测定。构建野生型及突变型KLF6真核表达质粒并分别转染人肝癌细胞株HepG2,流式细胞仪及四甲基偶氮唑盐试验观察KLF6基因对细胞周期及细胞增殖活性的影响。以western blot技术检测外源KLF6 基因对HepG2细胞p21WAF1表达的影响。结果 23例原发性肝癌组织中2例(8.7％)出现KLF6基因突变, 其中1例导致氨基酸改变(W162G)。转染野生型KLF6的HepG2细胞G0～G1期所占细胞的比例明显增高,而转染突变型KLF6实验组G0～G1期细胞无显著增加。转染野生型KLF6对HepG2细胞生长的抑制率显著高于突变型KLF6实验组和空载体实验对照组。外源野生型KLF6基因能上调肝癌细胞p21WAF1表达,而突变型KLF6基因上调p21WAF1表达的能力较低。结论 KLF6基因突变可能在原发性肝癌发病机制中起到一定作用,但基因突变可能不是KLF6基因失活的主要原因。上调p21WAF1表达是KLF6基因抑制肝癌细胞增殖的重要途径。

关键词：基因肿瘤抑制癌肝细胞 p21WAF1

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IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用

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浙江大学学报（医学版） 2006年第6期35卷 610-614页

作者：赵刚吴南屏姚航平浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室

目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与I... 详细信息

目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与IFN-γ基因的原核质粒p et44b-gp 120/IFN-γ,在*** BL 21(DE 3)细胞中进行低温诱导蛋白表达,然后经纯化后免疫BALB/c小鼠。实验设皮下注射gp120/IFN-γ组、gp120组和PBS三组,以检测H IV-1gp120诱导的T细胞增殖能力,CTL杀伤作用以及Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4,IL-10)的表达情况。结果:通过PAGE和W estern b lot检测,证实上述两种蛋白在DE 3细胞中得到表达。免疫学实验表明,针对H IV-1 gp120的特异性T淋巴细胞增殖作用、特异性CTL杀伤作用,以及Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ表达在三组之间均有显著性差异(P<0.05),gp120/IFN-γ组高于gp120组,gp120组高于PBS组(P<0.05)。反映体液免疫反应的Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达在三组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:协同应用IFN-γ基因可明显加强H IV-1gp 120基因的细胞免疫反应。

关键词：干扰素Ⅱ型 HIV包膜蛋白质gp120/代谢佐剂,免疫 HIV gp120 IFN-γ 融合表达

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