检索结果-内蒙古大学图书馆

乙型肝炎病毒感染不同阶段患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的测定

中华传染病杂志 2008年第1期26卷 40-45页

作者：彭国平孙雯孙箴蔡乃青陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室杭州310003 浙江大学医学院附属口腔医院正畸科

目的测定HBV感染不同阶段患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）的频率及标记分子，并分析其与临床指标的相关性。方法采集79例慢性乙型肝炎（CHB）、12例急性乙型肝炎（AHB）患者、26例无症状HBV携带者（ASC）和20例健康对照的... 详细信息

目的测定HBV感染不同阶段患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）的频率及标记分子，并分析其与临床指标的相关性。方法采集79例慢性乙型肝炎（CHB）、12例急性乙型肝炎（AHB）患者、26例无症状HBV携带者（ASC）和20例健康对照的外周血，流式细胞仪分析Treg频率、Treg细胞表面和胞内特征性分子的表达。普通RT—PCR和相对荧光定量PCR测定叉头／翼状转录因子3（Foxp3）在CD25^＋Treg细胞的表达水平。所有患者及健康对照均经ELISA检测HBV血清标记物水平，实时荧光定量PCR测定血清HBVDNA载量，并进行肝功能检测。结果总CD4^＋CD25^＋T细胞占外周血CD4^＋T细胞的比率，在各患者组和健康对照组之间差异均无统计学意义（P〉0．05）。HBeAg阳性CHB组CD4^＋CD25高表达T细胞频率（3．42％±0．81％）与HBeAg阴性CHB组（3．19％±0．67％）、ASC组（3．05％±0．64%）比较，差异无统计学意义（均P〉0．05），但明显高于健康对照组（2．72％±0．71％，P=0．034）和AHB组（2．25％±0．54％，P=0．013）。CD4^＋CD25高表达T细胞表面高表达CD45RO、CD25分子，低表达CD45RA，细胞内高表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和Foxp3。各患者组及健康对照组Treg中Foxp3表达水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。CHB组患者的Treg频率与血清病毒载量呈正相关（r=0．48，P=0．018）。结论Treg可能通过抑制T细胞免疫应答反应而影响病毒清除，并与CHB患者的持续感染密切相关。

关键词：肝炎乙型 CD4阳性T淋巴细胞受体白细胞介素2 免疫耐受 Foxp3

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干扰素γ与肝纤维化治疗

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中华肝脏病杂志 2008年第12期16卷 955-957页

作者：翁红雷蔡卫民 Molecular Alcohol Research in gastroenterology Department of Medicine Ⅱ Faculty of Medicine at MannheimUniversity of Heidelberg Germany 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所、传染病诊治国家重点实验室

干扰素γ（IFNγ）具有很强的抗肝纤维化作用，近年来IFNγ治疗肝纤维化的临床和基础研究已有很大进展，现就此作一综述。

关键词：干扰素γ 肝纤维化治疗

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碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵和外膜孔蛋白表达水平的研究

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中国感染与化疗杂志 2008年第6期8卷 414-418页

作者：李红玲廖康陈亚岗俞云松李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江省传染病重点实验室杭州310003 中山大学附属第一医院检验医学部

目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外... 详细信息

目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙(CCCP)前后对亚胺培南和美罗培南的MIC;RT-PCR检测外排泵MexAB-OprM和孔蛋白OprD2的表达水平;十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western-blot)检测外膜孔蛋白OprD2。结果收集到的655株铜绿假单胞菌菌株对亚胺培南和美罗培南敏感率分别为52.5%和59.2%,加入CCCP前后其对亚胺培南和美罗培南的敏感率无明显变化;52.0%(51/98)美罗培南耐药株MexAB-OprM显著高表达(P<0.05),43.7%(59/135)亚胺培南耐药株OprD2显著低表达(P<0.05),14.8%(20/135)亚胺培南耐药株OprD2表达缺失;SDS-PAGE和Western-blot显示与标准菌株PAO1相比,OprD2表达水平减低菌株ZZ20显影减低,表达缺失菌株BJ1不显影。结论MexAB-OprM表达升高和OprD2表达降低甚至缺失是我国铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南耐药的重要机制。

关键词：铜绿假单胞菌外排泵外膜孔蛋白羟基氰氯苯腙实时荧光定量反转录聚合酶链反应

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耐万古霉素肠球菌二株的耐药基因及传播机制研究

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中华检验医学杂志 2008年第4期31卷 433-435页

作者：王杰瞿婷婷俞云松周建英陈亚岗浙江大学医学院附属第一医院呼吸科杭州310003 传染病诊治国家重点实验室

肠球菌是重要的条件致病菌之一，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。近年来抗菌药物的广泛应用，使肠球菌对多种抗菌药物产生耐药，并成为导致医院感染的重要致病菌。由于... 详细信息

肠球菌是重要的条件致病菌之一，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。近年来抗菌药物的广泛应用，使肠球菌对多种抗菌药物产生耐药，并成为导致医院感染的重要致病菌。由于肠球菌对抗生素的耐药性增加，特别是近年出现的万古霉素耐药肠球菌（VRE）给临床治疗造成困难。本研究分析了杭州市分离到的两株VRE菌株的克隆相关性、耐药性及耐药传播机制，为VRE感染的防治提供基础。

关键词：耐万古霉素肠球菌耐药基因传播机制万古霉素耐药肠球菌皮肤软组织感染条件致病菌尿路感染抗菌药物

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慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞PD-L1表达的相关研究

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浙江大学学报（医学版） 2008年第4期37卷 364-372页

作者：彭国平孙雯吴炜孙箴谈旭翡李淑萍陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003 浙江大学医学院附属口腔医院浙江杭州310031

目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)的PD-L1表达水平,及其对DCs刺激T细胞增殖的影响。方法:采集22例慢性HBeAg阳性CHB患者、8例急性恢复期乙型肝炎(AHB)患者和10例健康人(NC)的外周血,分离单个核细胞(PBMC)并诱导DCs... 详细信息

目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)的PD-L1表达水平,及其对DCs刺激T细胞增殖的影响。方法:采集22例慢性HBeAg阳性CHB患者、8例急性恢复期乙型肝炎(AHB)患者和10例健康人(NC)的外周血,分离单个核细胞(PBMC)并诱导DCs的增殖和活化。相对荧光定量PCR测定DCs的PD-L1、PD-L2分子mRNA水平,流式细胞术测定DCs表面PD-L1和PD-L2的表达率。同时,测定外周血DCs刺激同种异体反应性T细胞增殖的能力,及抗PD-L1单抗对CHB组DCs刺激功能的影响。结果:体外成功诱导了外周血DCs的增殖和成熟。与NC组相比较,CHB组和AHB组患者外周血DCs内PD-L1的mRNA水平均显著增高(P均<0.05),但CHB组和AHB组间差异无统计学意义。CHB组患者外周血DCs表面PD-L1表达率较AHB组、NC组均有明显增高(P均<0.01)。而外周血DCs的PD-L2 mRNA水平及PD-L2在DCs表面的表达率在各实验组之间无明显差异(P均>0.05)。CHB组外周血DCs刺激T细胞增殖的功能较AHB组和NC组明显降低(P均<0.01),抗PD-L1抗体能显著增强CHB患者DCs刺激T细胞反应的能力。CHB患者外周血DCs表面PD-L1表达率与血清HBV病毒载量成正相关(r=0.34,P=0.007)。结论:外周血DCs表面PD-L1表达水平在慢性HBeAg阳性乙肝患者明显升高,抗PD-L1抗体可有效增强CHB患者外周血DCs刺激T细胞增殖反应的能力,表明PD-L1的高表达可能与T细胞免疫反应低下和HBV病毒高复制密切相关。

关键词：肝炎乙型慢性/免疫学树突状细胞免疫抑制病毒载量

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结核分枝杆菌诱导的THP-1细胞转化及其相关信号传导通路的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第5期28卷 385-389页

作者：秦妍妍黄晓燕李淑萍李立伟毛亚飞严杰浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 浙江省宁波市李惠利医院浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室

目的了解结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）体外诱导人单核细胞株THP-1向类上皮细胞（EC）转化的效应及其相关信号传导通路和调控作用。方法建立人结核分枝杆菌H37Rv株、牛分枝杆菌bovis株、草分枝杆菌phlei株THP-1细胞感染... 详细信息

目的了解结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）体外诱导人单核细胞株THP-1向类上皮细胞（EC）转化的效应及其相关信号传导通路和调控作用。方法建立人结核分枝杆菌H37Rv株、牛分枝杆菌bovis株、草分枝杆菌phlei株THP-1细胞感染模型。采用间接免疫荧光法检测感染前后THP-1细胞表面单核细胞或巨噬细胞分化抗原CD115和EC分化抗原CD82的表达情况。采用Sandwich ELISA Kits检测感染前后THP-1细胞p38MAPK（p38丝裂原活化蛋白激酶）、Akt1（丝／苏蛋白激酶）和STAT3（信号转导因子和转录活化因子）磷酸化水平。采用特异性阻断剂，了解各信号通路阻断前后CD115和CD82表达水平变化。结果3株分枝杆菌感染的THP-1细胞均出现CD115表达减弱和CD82明显表达的现象。H37Rv株或bovis株感染的THP-1细胞可出现一过性p38MAPK磷酸化水平上调，但P13K（磷脂酰肌醇3-激酶）／Akt和STAT3磷酸化水平均无明显变化。p38MAPK、P13K／Akt或JAK／STAT通路被阻断后，上述3株分枝杆菌感染的THP-1细胞仍表达CD115。JAK／STAT通路被阻断时，各分枝杆菌感染的THP-1细胞仍表达CD82。但p38MAPK、P13K／Akt通路被阻断时，H37Rv株和bovis株感染的THP-1细胞CD82表达消失。结论结核分枝杆菌H37Rv株和bovis株感染后可诱导THP-1细胞向EC转化，p38MAPK、P13K／Akt参与和调控了该转化过程，其中以p38MAPK通路较为重要。

关键词：结核分枝杆菌细胞转化分化抗原表达信号通路/调控

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抗鼠CTLA-4单链抗体的构建与表达及其免疫学活性的鉴定

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华中科技大学学报（医学版） 2008年第3期37卷 290-294页

作者：彭国平周承吴炜孙雯田锋贺纪凯陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室杭州310031 浙江大学医学院附属口腔医院杭州310003 浙江大学医学院临床医学系杭州310023

目的构建具有免疫学活性的抗小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region),为进一步将其应用到动物体内奠定基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗小鼠CTLA-4单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细... 详细信息

目的构建具有免疫学活性的抗小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)单链抗体ScFv(single chain fragment of variety region),为进一步将其应用到动物体内奠定基础。方法采用RT-PCR技术,从分泌抗小鼠CTLA-4单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中扩增mAb的VH、VL基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL型的ScFv片段。将ScFv片段亚克隆至pGMET载体,测序正确后将其克隆至真核分泌型表达载体pSect2-GFP,将pSect2-GFP-ScFv纯化质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)并进行表达,同时经Zeocin筛选稳定表达株。用Western blot方法检测ScFv融合蛋白的表达,采用ELISA检测ScFv的亲和活性。结果经Zeocin筛选2周后,CHO细胞株可稳定表达GFP-ScFv蛋白。Western blot法证实GFP-ScFv蛋白在细胞上清和细胞裂解液中均有表达,大小约55kD。ELISA检测表明,CHO培养上清中的GFP-ScFv蛋白经浓缩初纯后能与重组小鼠CTLA-4纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力。结论成功构建了抗小鼠CTLA-4的ScFv真核表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv融合蛋白。

关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 单链抗体真核表达免疫学活性

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猴空泡病毒40核酸序列检测法的优化研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 550-554页

作者：葛长勇李鸿钧谢忠平孙茂盛吴南屏浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003 中国医学科学院医学生物学研究所

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设... 详细信息

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设计两对SV40 DNA检测引物，用Oligo 6．71软件和DNAMAN 6．0．40软件对引物参数进行分析，将分析结果与通常使用的检测引物进行比较。用不同稀释度SV40核酸序列作模板，比较4对引物检测的敏感性。分别用无菌水、Vero细胞DNA、SV40DNA作模板检测4对引物的特异性。结果对于21个SV40病毒株，优化引物对VP1和T的序列是保守的；对于接受号为J02400、NC_001669、AF316139和AF316141的4个病毒株，通常使用的引物对GCVP1和GCT的序列是保守的；用同一稀释度的SV40DNA作模板，引物对VP1和T的扩增效率明显高于引物对GCVP1和GCT；在特异性检测比较中，引物对VP1和T没有出现非特异性扩增条带，引物对GCVP1和GCT在100bp处出现非特异性扩增条带。结论优化的SV40核酸序列检测法具有敏感性高、特异性强、检测面广、引物及其PCR产物序列保守等特点。

关键词： SV40检测 PCR引物猴空泡病毒核酸序列检测法

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原位肝移植大鼠肠道微生态状况研究

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中华外科杂志 2008年第15期46卷 1139-1142页

作者：俞美红俞秀丽陈春雷高良辉毛卫林严冬陈瑜盛吉芳李兰娟郑树森浙江大学医学院附属第一医院传染科传染病诊治国家重点实验室杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科杭州310003 浙江大学医学院附属第一医院检验科杭州310003 浙江省杭州市第六人民医院传染科

目的探讨肝移植术后大鼠肠道微生态的变化。方法将雄性Brown-Norway（BN）大鼠40只随机分成肝移植组（BN-BN，n=16，共8对）、模拟移植组（n=8）、假手术组（n=8）和对照组（n=8），24h后处死，分析肠道菌群构成、回肠末端超微结构变化... 详细信息

目的探讨肝移植术后大鼠肠道微生态的变化。方法将雄性Brown-Norway（BN）大鼠40只随机分成肝移植组（BN-BN，n=16，共8对）、模拟移植组（n=8）、假手术组（n=8）和对照组（n=8），24h后处死，分析肠道菌群构成、回肠末端超微结构变化、血浆内毒素水平以及细菌易位至肝、脾、肾和肠系膜淋巴结的比例。结果肝移植术后24h存在明显的肠道菌群紊乱，表现为肠杆菌科细菌和肠球菌数量增加（P〈0．05），乳杆菌和双歧杆菌数量下降（P〈0、05），移植组与模拟移植组存在肠黏膜上皮细胞微绒毛的损伤；肝移植组血浆内毒素水平升高（P〈0．01），细菌易位至肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结的阳性率增加（P值均〈0、05）；与模拟移植组比较，肝移植组细菌易位至肝脏的阳性率增加（P〈0．05）。结论肝移植术后存在一定程度的肠道微生态紊乱和肠道屏障功能损伤，可能与肝移植手术过程中所经历的缺血再灌注过程有关。

关键词：肝移植内毒素类细菌易位肠道菌群

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烧伤创面多重耐药鲍氏不动杆菌同源性和碳青霉烯酶基因型及整合子研究

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中华烧伤杂志 2008年第6期24卷 432-436页

作者：蒋丽媛薛晓东司小强魏莲花刘刚周华俞云松甘肃省人民医院烧伤整形科兰州730000 甘肃省人民医院检验中心兰州730000 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室·

目的明确甘肃省人民医院烧伤病房多重耐药鲍氏不动杆菌的耐药性、同源性及与整合子的关系。方法31株多重耐药鲍氏不动杆菌分离自该院烧伤住院患者创面分泌物标本。采用琼脂稀释法测定鲍氏不动杆菌对11种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）... 详细信息

目的明确甘肃省人民医院烧伤病房多重耐药鲍氏不动杆菌的耐药性、同源性及与整合子的关系。方法31株多重耐药鲍氏不动杆菌分离自该院烧伤住院患者创面分泌物标本。采用琼脂稀释法测定鲍氏不动杆菌对11种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株的同源性；PCR扩增I、Ⅱ、Ⅲ类整合酶及整合酶阳性菌株的整合子基因盒，进行序列分析；分析亚胺培南耐药菌株的碳青霉烯酶基因型。结果鲍氏不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、哌抟西林／他唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦的耐药率分别为45．2％、48．4％、48．4％、41．0％，对头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星、阿米卡星、庆大霉素、氨曲南和哌拉西林的耐药率均在80．0％以上。所有菌株PFGE分型共分为A、B、C3型，A克隆18株、B克隆7株、c克隆6株。20株细菌整合子扩增阳性，携带有aadA1、aadA5、aacA4、aac3、aacC1、aac（6’）-Ib、catB8、drfA17和drf8基因，介导对氨基糖苷类抗生素、氯霉素、甲氧苄啶的耐药。14株亚胺培南耐药的菌株均产OXA-23型碳青霉烯酶。结论多重耐药鲍氏不动杆菌在该院烧伤病房播散，以A克隆为主；鲍氏不动杆菌整合子主要介导对氨基糖苷类抗生素及氯霉素的耐药性，碳青霉烯类抗生素耐药鲍氏不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶。

关键词：烧伤感染鲍氏不动杆菌抗药性整合子类碳青霉烯酶

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