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2006年浙江省医学会传染病肝病会议

作者：吴南屏姚航平靳昌忠张福杰冯磊魏红山吴灵娇郜桂菊浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所，卫生部病染病重点实验室（310003）中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心浙江大学医学院基础医学系北京地坛医院传染科

本文研究了经高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的艾滋病(AIDS)患者单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1，MCP-1)及巨噬细胞刺激蛋白(macrophage stimulated protein，MSP)又称肝细胞生长因子样蛋白水平的影响关系。

关键词：高效抗逆转录病毒治疗艾滋病病毒载量细胞因子单核细胞趋化蛋白1 巨噬细胞刺激蛋白

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浙江省首例人禽流感病例调查分析

浙江省首例人禽流感病例调查分析

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中华医学会全国第九次感染病学学术会议

作者：李兰娟杨仕贵夏时畅陈恩富浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室浙江省疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心

2006年2月20日,浙江省报告了该省首例人禽流感病例。患者,女,1997年11月出生,浙江省安吉县人。患者临床表现包括高热、头痛、胸痛,口唇紫绀,肺部有明显湿罗音,上呼吸道卡他症状不明显,胸片示右侧白肺、左肺中上大片阴影,初期白细胞降低... 详细信息

2006年2月20日,浙江省报告了该省首例人禽流感病例。患者,女,1997年11月出生,浙江省安吉县人。患者临床表现包括高热、头痛、胸痛,口唇紫绀,肺部有明显湿罗音,上呼吸道卡他症状不明显,胸片示右侧白肺、左肺中上大片阴影,初期白细胞降低;病程中出现黑便等上消化道出血症状;并出现躁动、惊叫等精神症状;病程中出现急性呼吸道窘迫症,急性上消化道出血,继发性细菌和真菌感

关键词：人禽流感病例调查浙江省

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质粒介导AmpC酶的结构及传播机制研究

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中华医学杂志 2005年第43期85卷 3043-3047页

作者：陆玮新魏泽庆俞云松陈亚岗李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的明确多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶基因及周围序列的结构特征,阐明质粒介导AmpC酶传播机制。方法抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切DNA片段的黏末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-T Easy... 详细信息

目的明确多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶基因及周围序列的结构特征,阐明质粒介导AmpC酶传播机制。方法抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切DNA片段的黏末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-T Easy载体进行T-A克隆。在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组质粒,酶切分析,克隆片段用步移法测序。对重组菌进行药敏试验和等电点分析。结果克隆筛选到含5.2kb插入片段的重组质粒pT948,插入片段测序发现其含有一个ampC(blaDHA-1)基因和一个ampR调节基因。在blaDHA-1结构基因的侧翼发现一个插入序列IS26及Ⅰ类整合子的qacE△1和sulI基因。重组菌表达等电点为7.7,药敏试验显示对头孢西丁耐药,对头孢他啶的耐药性能被头孢西丁诱导。结论克隆到质粒介导的AmpC酶为DHA-1型,其相邻的插入序列IS26参与DHA-1的转移。

关键词：克隆,分子质粒 DNA可移植因子 AmpC酶

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拉克替醇对慢性病毒性肝炎患者肠道菌群及内毒素血症的影响

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中华传染病杂志 2005年第6期23卷 395-397页

作者：李兰娟陈春雷吴仲文陈湖光傅素珍盛吉芳浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室杭州310003

目的观察拉克替醇对慢性病毒性肝炎患者肠道菌群及血内毒素水平的影响。方法60例慢性病毒性肝炎伴血内毒素升高的患者随机分为两组.对照组30例采用常规保肝降酶治疗.治疗组30例在常规治疗的基础上加用拉克替醇.观察两组患者治疗前及治疗... 详细信息

目的观察拉克替醇对慢性病毒性肝炎患者肠道菌群及血内毒素水平的影响。方法60例慢性病毒性肝炎伴血内毒素升高的患者随机分为两组.对照组30例采用常规保肝降酶治疗.治疗组30例在常规治疗的基础上加用拉克替醇.观察两组患者治疗前及治疗3周后肠道菌群、血内毒素水平的变化。结果治疗组患者肠道内乳杆菌和双歧杆菌数量明显增加(P<0.01).产气荚膜梭菌显著降低(P<0.01).血内毒素水平显著降低(P<0.01)。结论拉克替醇能通过调节慢性病毒性肝炎患者肠道菌群,更有效降低血内毒素水平。

关键词：拉克替醇肝炎,病毒性,人肠道菌群内毒素类

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SV40介导的永生化人源性肝细胞表型鉴定

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 300-301页

作者：李兰娟盛国平李君章益民俞海英曹红翠徐威应红芳盛吉芳浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室 310003 浙江省立同德医院

本研究采用免疫组织化学和分子生物学方法等对SV40介导的永生化人源性肝细胞(HepLL细胞)进行生物学功能和表型特征评价.

关键词： SV40介导永生化人源性肝细胞表型鉴定免疫组织化学分子生物学方法

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质粒介导的RNA干扰对AD293细胞中HBcAg表达的抑制作用

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浙江大学学报（医学版） 2005年第2期34卷 104-109页

作者：徐宁羊正纲朱海红姚航平侯晓丽吴炜浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部病毒性传染病重点实验室浙江杭州310003

目的研究质粒介导的RNA干扰效应对HBcAg基因表达的抑制作用。方法设计并构建针对HBcAg基因的小发夹RNA表达载体,将构建好的shRNA表达载体和HBcAg-增强型绿荧光蛋白融合蛋白表达载体共转染人胚肾细胞株AD293,以空载体组以及针对无关序列... 详细信息

目的研究质粒介导的RNA干扰效应对HBcAg基因表达的抑制作用。方法设计并构建针对HBcAg基因的小发夹RNA表达载体,将构建好的shRNA表达载体和HBcAg-增强型绿荧光蛋白融合蛋白表达载体共转染人胚肾细胞株AD293,以空载体组以及针对无关序列的shRNA表达载体组为阴性对照,流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测RNAi的抑制效果。结果构建的特异性shRNA表达载体可以抑制HBcAg基因在AD293细胞中的表达,流式细胞仪检测抑制率可达76%,实时荧光定量PCR法检测HBcAg基因的mRNA,抑制率可达58.6%。结论质粒介导的RNAi可以有效抑制HBcAg基因的表达,为利用RNAi进行抗乙型肝炎病毒复制研究提供了一个可供选择的方法。

关键词：肝炎核心抗原,乙型/分析基因疗法 RNA/遗传学基因表达调控 RNA干扰

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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白激酶R的功能区域研究

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中华传染病杂志 2005年第1期23卷 1-5页

作者：颜学兵陈智 Delphine BOUCREUX Nicole PAVIO Christian BRECHOT 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室法国巴黎第5大学

目的构建并表达丙型肝炎病毒(HCV)不同病毒株:癌中心株(BT)、癌旁珠(BNT)、HCV-J及BT不同截短片段谷胱甘肽(GST)-核心融合蛋白;寻找核心蛋白(Core)与蛋白激酶R(PKR)相互作用区域,探讨它们在HCV持续感染及细胞癌(HCC)发病机制中的作用.... 详细信息

目的构建并表达丙型肝炎病毒(HCV)不同病毒株:癌中心株(BT)、癌旁珠(BNT)、HCV-J及BT不同截短片段谷胱甘肽(GST)-核心融合蛋白;寻找核心蛋白(Core)与蛋白激酶R(PKR)相互作用区域,探讨它们在HCV持续感染及细胞癌(HCC)发病机制中的作用.方法用聚合酶链反应扩增不同片段HCV核心蛋白基因,并将7个不同的基因片段分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,诱导表达并纯化表达蛋白,与两株细胞(HepG2和Huh-7)的PKR的进行相互作用试验.结果7个不同片段Core在体外都得到相应表达,不同片段结合PKR的能力存在一定差异.BT、BNT、C191的Core N端1～172氨基酸(aa)3个片段均能与PKP发生直接结合,BT与PKR结合的区域在Core N端的1～58aa.结论不同片段Core在原核细胞中获得较好的表达;Core/PKP相互作,在HCV持续感染和HCC的发病机制中可能起重要作用.

关键词： HCV核心蛋白表达丙型肝炎病毒核心蛋白 HCC 发病机制结合蛋白功能区域差异目的结论

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拉米夫定联合胸腺肽α1治疗鸭乙型肝炎的效果观察

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浙江大学学报（医学版） 2005年第2期34卷 121-125页

作者：陈祥明柳子明杜心芳羊正纲陈晓明浙江大学医学院附属第二医院浙江杭州310009 宁波市传染病医院浙江宁波315010 浙江大学医学院附属第一医院卫生部传染病重点实验室浙江杭州310003

目的探讨联合应用胸腺肽α1(Tα1)和拉米夫定对樱桃谷鸭乙型肝炎病毒(DHBV)复制的抑制作用。方法以DHBV阳性血清感染1日龄樱桃谷鸭,制备鸭乙型肝炎模型。用拉米夫定治疗12w后,联用Tα1治疗8d,以拉米夫定治疗为对照组,半定量PCR法检测鸭... 详细信息

目的探讨联合应用胸腺肽α1(Tα1)和拉米夫定对樱桃谷鸭乙型肝炎病毒(DHBV)复制的抑制作用。方法以DHBV阳性血清感染1日龄樱桃谷鸭,制备鸭乙型肝炎模型。用拉米夫定治疗12w后,联用Tα1治疗8d,以拉米夫定治疗为对照组,半定量PCR法检测鸭血清中DHBV,常规病理学方法观察鸭肝组织病理变化情况。结果和生理盐水对照组比较,拉米夫定治疗后鸭血清中DHBV水平显著降低(4483.2±5193.4vs9351.8±5059.6),联合Tα1治疗后抗DHBV效果更加明显(1692.2±589.2)。拉米夫定治疗可减轻肝细胞变性(3.2±0.8vs4.6±0.5)和炎症反应程度(6.2±3.3vs8.6±2.8),联合Tα1治疗后肝脏炎症反应有所加强(9.0±5.2)。结论拉米夫定可抑制DHBV复制,联用Tα1抗病毒效果更好,而且有加强肝脏内免疫功能的作用。

关键词：肝炎病毒,乙型,鸭/药物疗法拉米夫定/治疗应用胸腺素/治疗应用抗病毒药/治疗应用

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一种新的质粒介导的肠球菌氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-le

一种新的质粒介导的肠球菌氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-le

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2005年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术会议

作者：瞿婷婷张樱俞云松陈亚岗魏泽庆李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室

目的:明确庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)新氨基糖苷类耐药基因及传播机制.方法:采用琼脂筛选法筛选得HLGR,用琼脂稀释法及K-B纸片法进行抗菌药物的药敏试验,并通过聚合酶链反应(PCR)、质粒提取、Southern杂交、酶切克隆测序对耐药基... 详细信息

目的:明确庆大霉素高水平耐药肠球菌(HLGR)新氨基糖苷类耐药基因及传播机制.方法:采用琼脂筛选法筛选得HLGR,用琼脂稀释法及K-B纸片法进行抗菌药物的药敏试验,并通过聚合酶链反应(PCR)、质粒提取、Southern杂交、酶切克隆测序对耐药基因及传播机制进行研究.结果:肠球菌可通过产新的质粒介导的氨基糖苷类耐药基因aph(2”)-Ie编码的修饰酶APH(2”)-Ie引起HLGR.醇切克隆测序显示aph(2”)-Ie与染色体介导的APH(2”)-Id有较高的氨基酸同源性,其上游存在编码转座酶TnpA的插入序列,下游存在编码链霉素腺苷转移酶(Str)基因.Southern杂交证实该耐药基因位于35kb左右的质粒上.结论:HLGR可由一种新的质粒介导的APH(2”)-Ie的氨基糖苷类修饰酶所引起.并可通过转座酶与其他耐药基因—起在质粒或染色体之间进行传播.

关键词：肠球菌庆大霉素高水平耐药质粒氨基糖苷类修饰酶

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重型乙型肝炎病人血清HBV全基因克隆及测序

重型乙型肝炎病人血清HBV全基因克隆及测序

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第三届国际暨全国肝衰竭与人工肝学术会议

作者：李兰娟吴炜陈瑜浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室浙江大学医学院附属第一医院传染科卫生部传染病重点实验室

目的建立重型乙型肝炎病人血清HBV DNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系。方法收集10例重型乙型肝炎病人血清,提取HBV DNA,PCR扩增HBV全基因。PCR产物构建到pUCm-T载体上,转化至大肠杆菌感受态DH-5α细... 详细信息

目的建立重型乙型肝炎病人血清HBV DNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系。方法收集10例重型乙型肝炎病人血清,提取HBV DNA,PCR扩增HBV全基因。PCR产物构建到pUCm-T载体上,转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞中,经酶切鉴定,获得含3.2Kb HBV DNA的重组克隆菌,全基因测序,分析各读码框核苷酸和氨基酸变化。结果4例成功构建HBV DNA克隆,并完成全基因测序。其中3例在前C区发生G1896A变异,产生一个终止密码子,阻止了HBeAg的翻译;1例在X区1762、1764双位点出现突变;有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知CTL、B和T细胞的细胞表位。结论该法可用于临床研究HBV病毒基因结构与重症乙型肝炎发病的关系,并为进一步研究其HBV基因功能奠定基础。

关键词：乙型病毒性肝炎重型肝炎病毒基因

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