目的建立基于实时荧光环介导等温扩增的人乳头瘤病58型基因检测体系,用于其快速检测和早期诊断。方法运用LAMP在线引物设计软件Primer Explorer V5,针对人乳头瘤病毒58型的L1区域保守基因设计引物,在反应前加入荧光核酸染料SYBR GreenⅠ...
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目的建立基于实时荧光环介导等温扩增的人乳头瘤病58型基因检测体系,用于其快速检测和早期诊断。方法运用LAMP在线引物设计软件Primer Explorer V5,针对人乳头瘤病毒58型的L1区域保守基因设计引物,在反应前加入荧光核酸染料SYBR GreenⅠ,并对该反应体系中的dNTPs、Mg;和内引物(FIP、BIP)浓度进行优化,优化结果通过"S"型扩增曲线判断,并对优化后的实时荧光环介导等温扩增体系进行特异性、灵敏度检测及临床标本检测。结果针对人乳头瘤病毒58型所建立的实时荧光环介导等温扩增检测体系具有良好的特异性及灵敏度,且与临床实验室检测结果(qPCR方法)的符合率达100%,该检测方法的灵敏度可达10拷贝/μL。结论本研究建立了人乳头瘤病毒58型的实时荧光环介导等温扩增检测体系,它是一种耗时少、操作简便、特异性强、灵敏度高的方法,适用于HPV临床样本的快速检测。
目的建立用于人乳头瘤病毒HPV16及HPV18快速检测的实时荧光环介导等温扩增技术。方法运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V5,针对HPV16、18基因保守序列设计扩增引物,在反应前加入核酸染料SYBR GreenⅠ并对LAMP反应体系中内引物、...
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目的建立用于人乳头瘤病毒HPV16及HPV18快速检测的实时荧光环介导等温扩增技术。方法运用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V5,针对HPV16、18基因保守序列设计扩增引物,在反应前加入核酸染料SYBR GreenⅠ并对LAMP反应体系中内引物、Mg2+、dNTPs进行优化,优化结果通过实时荧光扩增曲线确定;然后对优化的HPV16、18 LAMP反应体系进行特异性、灵敏度检测及临床标本检测。结果建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16及HPV18的特异性为100%,与qPCR方法的符合率为100%。该体系检测HPV16及HPV18质粒的灵敏度为10拷贝/μl。结论建立的实时荧光环介导等温扩增体系检测HPV16、18简便、快速,灵敏度高,可用于HPV感染的早期筛查。
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