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第二届全国果树分子生物学学术研讨会

作者：秦于玲秦永华胡桂兵徐昌杰张上隆华南农业大学园艺学院园艺生物技术研究所浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室

以猕猴桃品种"布鲁诺"实生无菌苗叶片为外植体,在探讨不同浓度甘露糖对猕猴桃再生影响的基础上,用根癌农杆菌介导法将构建的以PMI为筛选基因、韧皮部特异启动子(PSP)驱动的抗菌肽D基因(图1)导入到猕猴桃基因组中。结果表明,... 详细信息

以猕猴桃品种"布鲁诺"实生无菌苗叶片为外植体,在探讨不同浓度甘露糖对猕猴桃再生影响的基础上,用根癌农杆菌介导法将构建的以PMI为筛选基因、韧皮部特异启动子(PSP)驱动的抗菌肽D基因(图1)导入到猕猴桃基因组中。结果表明,甘露糖对猕猴桃叶片不定芽的分化有显著影响。猕猴桃叶片接种在不加甘露糖的分化培养基上,30天后,不定芽分化率达100%,平均每个外植体再生芽6.8个;随着甘露糖浓度的提高,不定芽分化率逐渐降低,当甘露糖为20g/L时,不定芽分化率为8.2%,平均每个外植体再生芽2.0个;当甘露糖为25 g/L时,不定芽的分化则完全受到抑制。因此,在猕猴桃遗传转化中用甘露糖为筛选剂时,筛选浓度以25 g/L为宜。利用建立的甘露糖筛选体系,对猕猴桃进行遗传转化,获得了抗性植株(图2 A,B)。根据甘露糖代谢时可使培养基酸化,指示剂氯酚红在pH6.4时呈紫红色,随着pH下降转变为黄色的原理,随机取30株抗性植株幼叶进行氯酚红(CPR)检测,结果表明,有6株可以使检测培养基(MS+甘露糖2.5 g/L+CPR 50 mg/L)呈现黄色或橙黄色的变化,说明PMI表达活性;而对照培养基(MS+蔗糖2.5 g/L+CPR 50 mg/L)溶液颜色无变化(图2 B),氯酚红检测的转化率为20%。分别以PMI、GUSA、PSP、CAPD,ChvA基因和35S启动子两端序列设计特异引物(表1),随机取46株抗性植株,以未转化猕猴桃植株DNA为阴性对照,以质粒pCAMBIA1301-PMI-PSP-CAPD为阳性对照进行PCR检测。结果46株抗性植株中共有7株扩增出特异条带,且与阳性对照扩增出的特异条带一致,而非转基因的猕猴桃植株则没有特异性条带出现(图3 A-E)。而用ChvA基因两端引物对抗性植株进行PCR检测则没有特异性条带出现,从而排除了农杆菌污染造成的假阳性(图3 F);PCR检测的转化率为15.2%。PCR和CPR检测结果初步表明,PMI基因已经整合猕猴桃基因组中并得到表达,目前正在进行标记基因和目的基因的Southern和RT-PCR等分子检测。

关键词：猕猴桃 6-磷酸甘露糖异构酶(PMI) 抗菌肽D基因韧皮部特异启动子(PSP) 甘露糖遗传转化分子检测

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基于EST库的猕猴桃脂氧合酶基因家族成员的克隆

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园艺学报 2008年第3期35卷 337-342页

作者：张波李鲜陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室杭州310029

利用猕猴桃EST库及相关生物信息学手段,从果肉组织克隆了LOX基因家族成员6个,命名为AdLox1-6。AdLox1、AdLox2、AdLox3和AdLox4为全长cDNA,编码区长度分别为2739、2595、2739和2709bp,AdLox5和AdLox6为cDNA片段,长度为1359和1557bp。猕猴桃AdLox2和AdLox5氨基酸序列同源性最高,约74%,而AdLox3和AdLox5仅为49%。生物信息学分析表明,AdLox1、AdLox3、AdLox4和AdLox6可能具有13-LOX活性,在N端含有额外约60个氨基酸残基,而AdLox2和AdLox5则属于9-LOX类型。猕猴桃AdLox1与番茄TomLoxD具有最高氨基酸序列同源性(约80%),AdLox2和AdLox5与TomLoxA高度聚类,序列同源性分别为68%和75%,AdLox4和AdLox6与TomLoxC的氨基酸序列同源性分别为62%和63%,AdLox3与番茄LOX基因序列同源性低于55%。

关键词：猕猴桃脂氧合酶 LOX基因家族 EST 克隆

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猕猴桃6个LOX基因家族成员实时定量PCR引物特异性的检测与应用

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中国生物化学与分子生物学报 2008年第3期24卷 262-267页

作者：张波徐昌杰陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室浙江杭州310029

从基因家族成员的视角开展基因表达研究是阐明基因功能的重要组成内容,实时定量PCR(QPCR)技术是分析基因表达的有效手段.以猕猴桃脂氧合酶(LOX)基因家族6个成员为对象,分析了引物特异性的检测方法.该方法整合了熔点曲线分析、琼脂糖电... 详细信息

从基因家族成员的视角开展基因表达研究是阐明基因功能的重要组成内容,实时定量PCR(QPCR)技术是分析基因表达的有效手段.以猕猴桃脂氧合酶(LOX)基因家族6个成员为对象,分析了引物特异性的检测方法.该方法整合了熔点曲线分析、琼脂糖电泳、交叉PCR扩增和PCR产物测序等分析手段,有效消除其它成员的交叉扩增干扰,为利用QPCR检测基因家族成员表达提供了特异、准确与可行的途径.

关键词：猕猴桃脂氧合酶基因家族成员引物特异性实时定量PCR

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果实香气合成与遗传控制研究概述

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果树学报 2008年第5期25卷 708-713页

作者：宋丽娟李雄伟陈琳柴明良高中山浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室杭州310029

香气作为果实品质的一个重要指标,近年来逐渐受到人们的关注。随着化学分析仪器和手段的迅速发展,特别是气相色谱-质谱联用技术的应用和分子生物学技术的广泛应用,香气研究在许多领域都取得了重大的突破。果实香气研究经历了香气组分分... 详细信息

香气作为果实品质的一个重要指标,近年来逐渐受到人们的关注。随着化学分析仪器和手段的迅速发展,特别是气相色谱-质谱联用技术的应用和分子生物学技术的广泛应用,香气研究在许多领域都取得了重大的突破。果实香气研究经历了香气组分分析、特征香气鉴定、香气生物合成途径分析及香气的遗传控制和改良等发展阶段。描述了果实香气的主要组成成分(醇类、酯类、醛类、酚类、萜类),对一些代表性水果的特征香气成分进行了归纳总结,重点介绍了与果实香气合成密切相关的脂肪酸途径、氨基酸途径,萜类合成途径以及关键酶的研究进展,展示了最近果实香气成分的遗传控制和转基因研究方面的最新成果,提出了开展桃果实香气性状遗传控制研究思路。

关键词：果实香气成分合成途径遗传控制

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桃新品系‘北仑02-1’的主要生物学特征及其遗传鉴别

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中国学术期刊文摘 2009年第4期 51页

作者：陈妙金张水明张望舒苏明申徐昌杰郑金土黄大可高中山陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室杭州310029 浙江省宁波市林特科技推广中心宁波315010 浙江省宁波市北仑区白峰镇防大可桃子研究所宁波315813

‘北仑02-1’是在浙江省宁波市北仑区白峰镇一桃园中发现的大果型早熟水蜜桃变异株系．为了鉴别这个株系，对它的主要物候期和果实品质特性进行研究，并用分子标记技术比较‘北仑02-1’与当地栽培品种‘早红宝石’... (共1页)

关键词： ‘北仑02-1’ 水蜜桃新品系遗传鉴别 SSR AFLP

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5个葡萄品种果实生物活性物质的检测与抗氧化活性评价

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果树学报 2008年第5期25卷 635-639页

作者：孙崇德徐昌杰李鲜江文彬陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室杭州310029 浙江省金华市婺江葡萄研究所浙江金华321017

采用高效液相色谱——二极管阵列检测器(HPLC-DAD),以柠檬酸-乙酸铵缓冲液和甲醇为流动相,利用梯度洗脱,分析了玫瑰红、巨峰、藤稔、奶油和马奶子5个葡萄品种果皮、果肉和种子中没食子酸、儿茶素、表儿茶素、芍药素、白藜芦醇、鞣花酸... 详细信息

采用高效液相色谱——二极管阵列检测器(HPLC-DAD),以柠檬酸-乙酸铵缓冲液和甲醇为流动相,利用梯度洗脱,分析了玫瑰红、巨峰、藤稔、奶油和马奶子5个葡萄品种果皮、果肉和种子中没食子酸、儿茶素、表儿茶素、芍药素、白藜芦醇、鞣花酸和山奈酚的含量。结果表明,玫瑰红葡萄果皮、果肉和种子中7种生物活性物质组分的含量均高于其它品种,而奶油和马奶子果实中7种生物活性物质组分的含量较低或未检出。利用改进的过氧化自由基清除能力(PSC)法评价了5个葡萄品种的果实不同部位提取物抗氧化活性,发现所有品种果皮提取物抗氧化活性均高于果肉和种子,其中玫瑰红果皮抗氧化活性为311.5mmol/kg,奶油和马奶子果肉提取物抗氧化活性分别为28.0和17.5mmol/kg。分析表明,葡萄果实3个部位抗氧化活性与7种生物活性物质组分的总量呈显著正相关关系(r=0.949)。红皮葡萄果实生物活性物质水平和抗氧化活性均高于白皮葡萄。

关键词：葡萄果实生物活性物质抗氧化活性

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果实色素含量与水溶、脂溶性抗氧化活性的相关性(英文)

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果树学报 2008年第6期25卷 790-796页

作者： Abeysinghe Don Chandana 李鲜孙崇德陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室杭州310029 Department of Plantation Management Wayamba University of Sri LankaMakanduraGonawila60170Sri Lanka

色泽和保健作用是果实的2个重要特征。以杨梅(Myrica rubra)、草莓(Fragaria ananassa)、枇杷(Eriobotrya japonica)、桃(Prunus persica)、猕猴桃(Actinidia deliciosa)、椪柑(Citrus reticulata)、脐橙(Citrus sinensis)等果实为材料,研究了不同颜色果实中色素含量与水溶、脂溶性抗氧化活性的相关性。结果表明,深红色荸荠杨梅中的总酚(3254.7mg/kg)和花青苷(759.4mg/kg)的含量很高,而红色果肉洛阳青枇杷中类胡萝卜素(19551.3μg/kg)含量较高。叶绿素仅在猕猴桃果实中被检测到。利用PSC法研究果实总抗氧化活性(含水溶和脂溶)。结果表明,深红色荸荠杨梅果实提取物的总抗氧化活性(31.14μmol TE/g)最高,白色果肉的大玉白凤桃提取物的总抗氧化活性(10.34μmol TE/g)最低。相关性分析结果表明,水溶性抗氧化活性与酚类(R2=0.84)含量呈显著正相关关系,而脂溶性抗氧化活性与类胡萝卜素含量(R2=0.92)都呈显著正相关关系。维生素C是果实中众所周知的水溶性抗氧化物质,然而,研究发现水溶性抗氧化活性与维生素C的含量相关性不显著。含花青苷较丰富的深红色果肉水果和含类胡萝卜素丰富的红色果肉水果都是天然抗氧化物质的良好来源。

关键词：果实颜色植物色素水溶性脂溶性抗氧化活性

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桃新品系‘北仑02-1’的主要生物学特征及其遗传鉴别

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林业科学 2008年第8期44卷 42-46页

‘北仑02-1’是在浙江省宁波市北仑区白峰镇一桃园中发现的大果型早熟水蜜桃变异株系。为了鉴别这个株系,对它的主要物候期和果实品质特性进行研究,并用分子标记技术比较‘北仑02-1’与当地栽培品种‘早红宝石’、‘大团蜜露’、‘湖景... 详细信息

‘北仑02-1’是在浙江省宁波市北仑区白峰镇一桃园中发现的大果型早熟水蜜桃变异株系。为了鉴别这个株系,对它的主要物候期和果实品质特性进行研究,并用分子标记技术比较‘北仑02-1’与当地栽培品种‘早红宝石’、‘大团蜜露’、‘湖景蜜露’、‘玉露’、‘迟玉露’、‘大玉白凤’遗传特征的异同。结果表明:‘北仑02-1’在当地的成熟期为6月20日左右,果型较大,平均单果质量达196g,果顶红色鲜艳,品质优良。SSR标记分析结果发现‘北仑02-1’不同于‘湖景蜜露’、‘大团蜜露’和‘玉露’,位于桃第6连锁群的SSR标记pchcms5可用于区分‘北仑02-1’和‘湖景蜜露’。所用的24对AFLP引物组合中,有3对可以分辨‘北仑02-1’和‘湖景蜜露’。研究表明‘北仑02-1’与当地栽培品种存在遗传差异,可能是变异新株系。

关键词： '北仑02-1’ 水蜜桃新品系遗传鉴别 SSR AFLP

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脂氧合酶基因家族成员与果实成熟衰老研究进展

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园艺学报 2007年第1期34卷 245-250页

作者：张波李鲜陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室杭州310029

综述了LOX在果实成熟衰老进程中的最新研究进展,主要包括LOX与乙烯合成、果实软化、香气物质合成以及LOX基因家族成员的表达和功能研究。

关键词：果实成熟脂氧合酶基因家族功能综述

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用于多基因表达检测的猕猴桃macroarray阵列

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果树学报 2007年第6期24卷 854-857页

作者：张波徐昌杰陈昆松浙江大学果实分子生理与生物技术实验室农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室杭州310029

基因阵列是开展高通量功能基因组学研究的有效手段之一。对适用于多年生果树猕猴桃的macroarray阵列进行了探索,构建了含有42个基因的macroarray阵列,与α-32P标记的cDNA探针杂交产生清晰信号,有效分辨了不同基因或基因家族不同成员的... 详细信息

基因阵列是开展高通量功能基因组学研究的有效手段之一。对适用于多年生果树猕猴桃的macroarray阵列进行了探索,构建了含有42个基因的macroarray阵列,与α-32P标记的cDNA探针杂交产生清晰信号,有效分辨了不同基因或基因家族不同成员的表达差异。DNase处理可去除基因组DNA污染,提高结果准确性。

关键词：猕猴桃 macroarray 基因表达构建

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