检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2009年第1期17卷 1-6页

作者：张鑫尹伟金玉兰何嘉玲颜焰周继勇浙江大学农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室杭州310029 浙江大学传染病诊治国家重点实验室杭州310003 浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室杭州310058

为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero... 详细信息

为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero细胞中表达。结论认为pEGFP-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞和Vero细胞后48h,PCV2的Rep蛋白主要定位在PK15细胞和Vero细胞的细胞核。

关键词：猪圆环病毒2 Rep蛋白细胞定位

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传染性支气管炎病毒疫苗株H52的全基因组克隆与分析

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中国动物传染病学报 2009年第2期17卷 17-23页

作者：肖朝庭时莉宋翥远刘然阿合买提.买买提周继勇浙江大学农业部动物疫病病原学与免疫控制重点开放实验室杭州310029 浙江大学传染病诊治国家重点实验室杭州310003 浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室杭州310058 新疆农业大学动物医学院乌鲁木齐830000 湖南农业大学动物医学院长沙410128

采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组... 详细信息

采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组全长为27630bp（不包括polyA），A＋T含量为61．8％，它与我国IBV分离株全基因组同源性在83．9％～95．2％之间，其中与KQ6的同源性最高（95．2％），与其余株均在88％以下。在基因组内基因的同源性中，以S1、S2与E变异最大，除KQ6外，其余各株（含台湾株）与H52在S1蛋白上的同源性只有72．4％～80．7％，在S2蛋白上的同源性为85．5％～88．1％，E蛋白为82．9％～93．3％。系统进化分析表明，国内分离株，除KQ6外，在进化分支中已独立于H52和其它Massachusetts型衍生毒株。H52与我国地方分离株存在较大的分子遗传差异，这些差异可能导致单纯Massachusetts型疫苗（如H120，H52）不能有效地免疫保护我国的鸡群。

关键词：传染性支气管炎病毒疫苗株H52 克隆

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麋鹿血液cDNA文库的构建

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兽类学报 2007年第4期27卷 380-384页

作者：吴海龙万秋红方盛国张林源夏经世钟震宇浙江大学生命科学学院濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室北京麋鹿生态实验中心

为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA纯化试剂盒纯化后,根据Stratagene公司的cDNA文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA文库。初始文库滴度为1.96×106pfu/ml,总库容为1.96×106个独立克隆;... 详细信息

为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA纯化试剂盒纯化后,根据Stratagene公司的cDNA文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA文库。初始文库滴度为1.96×106pfu/ml,总库容为1.96×106个独立克隆;cDNA插入片段平均长度约为1.0kb;重组率为95.6%。文库各项指标均达标准经典cDNA文库的基本要求。利用本实验室设计的可扩增MHCⅡ类DQA基因第二外显子的引物检测扩增后的文库,得到了特异性非常好的目标条带,说明本文所建文库可以用于麋鹿MHC相关基因的分离。

关键词：麋鹿血液组织 cDNA文库主要组织相容性复合体

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传染性法氏囊病毒的抗原及分子特征(英文)

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生物化学与生物物理进展 2005年第1期32卷 37-45页

作者：周继勇叶菊秀叶伟成陈庆新郑肖娟郭军庆浙江大学动物预防医学研究所国家濒危野生动植物种质基因保护中心教育部濒危野生动物保护遗传与繁殖生物学重点实验室杭州310029

用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并... 详细信息

用鸡胚成纤维细胞对来自野外的5个传染性法氏囊病毒株(IBDV-JD1、JD2、NB、HZ1、HZ2)进行分离,测定理化特性、致病性,同时进行血清亚型测定及A片段基因组的克隆分析.试验所用5个法氏囊组织悬液在鸡胚成纤维细胞盲传2～14代后适应细胞并产生细胞病变.细胞适应的IBDV毒株的理化和形态特征与经典传染性法氏囊病毒株一致.除IBDV-HZ1、HZ2属经典IBDV血清型外,IBDV-JD1、JD2和NB毒株分属不同的血清亚型.人工感染实验结果显示,分离的IBDV毒株产生与野外病例相似的临床症状和病变,出现法氏囊滤泡髓质的淋巴细胞变性、坏死和消失.基因组序列分析显示,IBDV-NB毒株A片段由3 264个核苷酸组成,编码由145个氨基酸残基组成的VP5和由1 012个氨基酸残基组成的多聚蛋白.与来自GenBank的IBDV Ⅰ型毒株比较,NB毒株A片段编码的多聚蛋白与JD1毒株的同源性最高,达99.5%,VP2与JD1、CEF94、D78的同源性为99.8%,VP3与JD1的同源性为99.2%,VP4与JD1的同源性为100%,VP5与JD1,HZ2,P2,CEF94,CT,Cu-1和D78毒株的同源性为99.3%.NB毒株VP2蛋白的第253、280、284位氨基酸残基与IBDV变异毒株和经典毒株一致,但不同于IBDV超强毒株.这些结果暗示IBDV的抗原表位是构象依赖性表位,IBDV血清亚型的形成与IBDV弱毒疫苗病毒株密切相关.

关键词：传染性法氏囊病毒理化特性血清亚型基因组A片段

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基因组文库构建及其在保护遗传学中的应用前景

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兽类学报 2005年第1期25卷 86-90页

作者：林翙方盛国 310029 浙江大学生命科学学院杭州 310029濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室浙江大学生命科学学院

基因组文库是进行分子克隆和基因组结构与功能研究的基础。完整的基因组文库的构建 ,使任何DNA片段的筛选和获得成为可能。随着不同克隆载体的相继出现 ,基因组文库也经历了一系列的发展过程。其中 ,BAC文库因其转化效率高、嵌合体少、... 详细信息

基因组文库是进行分子克隆和基因组结构与功能研究的基础。完整的基因组文库的构建 ,使任何DNA片段的筛选和获得成为可能。随着不同克隆载体的相继出现 ,基因组文库也经历了一系列的发展过程。其中 ,BAC文库因其转化效率高、嵌合体少、插入片段易回收 ,以及容载量较大等优点而被广泛应用。近几十年来 ,随着环境的日益恶化、分子遗传学技术的迅速发展 ,以及保护生物学和分子遗传学的不断相互渗透 ,孕育产生了保护遗传学这一分支学科。作为保护遗传学中物种保护策略的重要部分 ,建立濒危野生动植物的基因组文库 ,是保存其种质资源的最为有效的实际手段和方法 ,并能为进一步开展与生殖、疾病和重要经济性状等方面有关的功能基因的研究 ,提供可靠的材料保证

关键词：基因组文库保护遗传学濒危野生动植物保存

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豫医无毛小鼠皮肤形态及超微结构观察

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浙江大学学报（理学版） 2005年第6期32卷 678-684页

作者：章金涛方盛国浙江大学生命科学学院濒危野生动物保护遗传学及繁殖生物学教育部重点实验室

对豫医无毛小鼠及对照的有毛小鼠皮肤形态及超微结构进行了对比观察,结果发现豫医无毛小鼠出生后被毛状态正常,但是在12日龄前后开始从上眼睑脱毛,接着向头部、尾部扩展,整个脱毛过程约持续2周时间,结果除胡须外全部脱净,并终生不再生.... 详细信息

对豫医无毛小鼠及对照的有毛小鼠皮肤形态及超微结构进行了对比观察,结果发现豫医无毛小鼠出生后被毛状态正常,但是在12日龄前后开始从上眼睑脱毛,接着向头部、尾部扩展,整个脱毛过程约持续2周时间,结果除胡须外全部脱净,并终生不再生.脱毛后的豫医无毛小鼠内脏可视,随年龄的增长,皮肤角化程度和厚度增加,体表面积扩大,形成犀牛状褶痕;指甲过度生长,呈螺旋状弯曲,皮肤表面有淡黄色蜡样粘性物,而且随年龄增长,皮肤表面出现小的丘疹,胡须变得短而稀疏.电镜扫描发现脱毛前毛囊上部的毛管先变大,然后再脱毛,2月龄无毛小鼠皮肤表面有许多形状、大小不规则的泡沬样物质,沿着皮肤沟排列,无毛小鼠毛囊漏斗部极度扩张,内含一些角化样碎片,形成较大的椭圆囊,在真皮及皮下组织出现大小不等的包囊.至8月龄时,无毛小鼠皮肤表面为鳞片状角化物,真皮及皮下组织退化,弹性纤维排列凌乱,真皮及皮下组织几乎全部被几层大的真皮包囊充填.

关键词：无毛小鼠皮肤形态超微结构

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福尔马林固定白鱀豚标本DNA提取及其遗传多样性的初步研究

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水生生物学报 2005年第3期29卷 272-278页

作者：许黎美万秋红王丁中国科学院水生生物研究所浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室杭州310029

福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题。本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马林固定白豚标本线粒体DNA控制区410bp片段。采用了3种预处... 详细信息

福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题。本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马林固定白豚标本线粒体DNA控制区410bp片段。采用了3种预处理方法尽量去除固定标本中残存的甲醛,从试验结果来看,从酒精梯度+临界点干燥处理的标本中提取的DNA在扩增时具有明显优势。通过蛋白酶K消化过程中对于酶的浓度、温浴时间的比较试验,发现随着采用大幅提高酶浓度、延长消化时间等高强度的蛋白酶消化操作后,DNA的质量和产量均得到显著提高。针对标本DNA降解严重的特点,设计特异性好且长度合适的引物以及使用巢式引物扩增,均提高了标本DNA扩增的特异性和灵敏度。通过对所测得的21头白鱀豚线粒体DNA控制区部分序列的对比,发现全部个体在该片段上的序列完全一致,说明白豚遗传多样性极低。

关键词：福尔马林固定标本 DNA提取白暨豚遗传多样性极度濒危物种

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中国大鲵四种群的遗传结构和地理分化

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Zoological Research 2005年第2期26卷 162-167页

作者：陶峰勇王小明郑合勋方盛国华东师范大学生命科学学院上海200062 浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室浙江杭州310029

为了确定栖息地的破碎化和片断化引起中国大鲵的地理分化和遗传结构变异,本文测定了来自广西、河南、陕西和湖南4个地理种群的28条大鲵的mtDNAD loop基因全序列。根据这4个地理种群的地理分布,分成珠江单元(广西种群)、黄河单元(河南种... 详细信息

为了确定栖息地的破碎化和片断化引起中国大鲵的地理分化和遗传结构变异,本文测定了来自广西、河南、陕西和湖南4个地理种群的28条大鲵的mtDNAD loop基因全序列。根据这4个地理种群的地理分布,分成珠江单元(广西种群)、黄河单元(河南种群)和长江单元(湖南和陕西种群)。通过ClustalX、MEGA2.0、DnaSP4.0、Arlequin1.1分析发现,全序列长度为771bp,其中64个多态性核苷酸变异位点,占全部碱基数的8.26%。转换和颠换分别为6和2个,插入/缺失11个。27个单倍型间的序列差异平均为1.32%。3个单元的单倍型多样性指数和核苷酸多样性指数值都偏低,而且珠江单元的这两个指数值都低于长江和黄河两个单元。珠江单元和黄河、长江单元之间分化程度显著(P<0.001),而长江和黄河单元之间差异不显著(P>0.05)。地理单元内分化程度占99.31%,而单元间只有0.69%,表明遗传差异主要发生在单元内,而且各地理单元之间的基因流较频繁。构建的NJ树和MP树显示,27个单倍型呈现一种混杂的分布格局,并未分成代表3个地理单元的聚合群。

关键词：大鲵 D-loop 基因序列种群遗传结构遗传多样性地理分化

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基于Cyt b基因探讨羚羊亚科原羚属系统发生关系

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兽类学报 2005年第2期25卷 105-114页

作者：王江方盛国 310029浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所 310018 教育部濒危野生动物保护遗传学与繁殖生物学重点实验室杭州浙江大学生命科学学院浙江大学生命科学学院国家濒危野生动植物种质基因保护中心

原羚属物种在羚羊亚科中的分类地位尚存在很多争议。本文测定了原羚属的黄羊和藏原羚细胞色素b基因全序列(114 0bp) ,并与牛科其它属31个种的同源序列进行比较,对其碱基组成变异情况及核苷酸序列差异进行了分析。基于细胞色素b基因全序... 详细信息

原羚属物种在羚羊亚科中的分类地位尚存在很多争议。本文测定了原羚属的黄羊和藏原羚细胞色素b基因全序列(114 0bp) ,并与牛科其它属31个种的同源序列进行比较,对其碱基组成变异情况及核苷酸序列差异进行了分析。基于细胞色素b基因全序列,用简约法(MP)、邻接法(NJ)和似然法(ML)构建了系统进化树。结果表明:黄羊和藏原羚的序列差异为3 78% ,颠换数目近乎为0 ,其突变远未饱和;原羚属内黄羊和藏原羚为不同种,单系发生;原羚属与赛加羚羊属、犬羚属及跳羚属等并系发生,原羚属隶属于羚羊亚科,应为独立属;羚羊亚科组成属间多为并系起源。根据序列差异值2 % /百万年的细胞色素b分子钟,推测黄羊和藏原羚分歧时间大约为1～2百万年;原羚属与羚羊亚科其它属分歧时间大约在5 7～8百万年

关键词：羚羊亚科原羚属细胞色素b 系统发育树

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唐家河保护区大熊猫的家庭网络及当代基因流的评价

唐家河保护区大熊猫的家庭网络及当代基因流的评价

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第二届全国野生动物生态与资源保护学术讨论会

作者：万秋红方盛国李建国张黎明欧维富鲜方海陈万里浙江大学生命科学学院国家濒危野生动植物种质资源保护中心濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室四川省林业厅四川省野生动物资源调查保护管理站唐家河自然保护区

利用福尔马林固定的粪便材料、寡核苷酸指纹技术以及SRY基因的性别判定技术,构建了唐家河自然保护区大熊猫的家庭网络图,同时对当代基因流(个体迁移)进行了评估,从124份粪便样品中,鉴定出37只大熊猫(22只雌性和15只雄性),通过分析这些... 详细信息

利用福尔马林固定的粪便材料、寡核苷酸指纹技术以及SRY基因的性别判定技术,构建了唐家河自然保护区大熊猫的家庭网络图,同时对当代基因流(个体迁移)进行了评估,从124份粪便样品中,鉴定出37只大熊猫(22只雌性和15只雄性),通过分析这些个体的家庭

关键词：基因流唐家河保护区唐家河自然保护区家庭网络

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