检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术 2013年第6期23卷 80-86页

作者：袁志林王佳莹章初龙陈益存陈连庆中国林业科学研究院亚热带林业研究所浙江富阳311400 浙江大学生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室浙江杭州310058

从新疆荒漠生长的一种白刺属植物茎韧皮部组织中分离到一株内生真菌(菌株编号:BCS-1)。该菌株不形成有性或无性繁殖结构,显微形态和培养性状与类丝核菌(Rhizoctonia-like fungi)十分相似,呈现形态各异的"念珠状"膨大细胞;基于... 详细信息

从新疆荒漠生长的一种白刺属植物茎韧皮部组织中分离到一株内生真菌(菌株编号:BCS-1)。该菌株不形成有性或无性繁殖结构,显微形态和培养性状与类丝核菌(Rhizoctonia-like fungi)十分相似,呈现形态各异的"念珠状"膨大细胞;基于ITS序列的BLAST搜索并没找到相似性高(≤90%)的匹配记录,然而LSU基因分析表明该菌株属于子囊菌盘菌目火丝菌科。查阅文献可知该菌株的培养性状与Tricharina属的一个无性型Ascorhizoctonia最为接近。以2份标准菌株(***和***)为材料,利用LSU、ITS和RPB2为分子标记进行多基因系统发育分析,结果表明BCS-1菌株与Tricharina物种在同一进化分支(100%自展支持率),结合形态学特征将其鉴定为***(中国新记录种)。该研究提出了特殊无孢内生真菌鉴定的策略,对快速鉴定疑难标本和认识菌物生物多样性具有一定的参考价值。

关键词：内生真菌类丝核菌 “念珠状”细胞多基因系统发育分析

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植物病原真菌对杀菌剂抗性的研究进展

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植物保护 2023年第5期49卷 243-259页

作者：吴小美王海霞云英子马忠华浙江大学生物技术研究所浙江省作物病虫生物学重点实验室杭州310058 镇江市植保植检站镇江212002 福建农林大学植物保护学院闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室福州350002

科学施用杀菌剂是植物病害综合治理的重要措施之一,然而由于杀菌剂的长期使用,病菌抗药性问题逐渐加重,严重影响药剂的防治效果和使用寿命。近年来,随着分子生物学技术的快速发展,人们对杀菌剂抗性机制有了更深入的理解,并开发出了病菌... 详细信息

科学施用杀菌剂是植物病害综合治理的重要措施之一,然而由于杀菌剂的长期使用,病菌抗药性问题逐渐加重,严重影响药剂的防治效果和使用寿命。近年来,随着分子生物学技术的快速发展,人们对杀菌剂抗性机制有了更深入的理解,并开发出了病菌抗药基因型快速检测的方法。本文总结了植物病原真菌对苯并咪唑类杀菌剂(BZD)、肌球蛋白合成抑制剂、甾醇脱甲基抑制剂(DMI)、QoI类抑制剂、琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)和二甲酰亚胺类杀菌剂(DC)的抗药性现状与抗性机制。在此基础上,介绍了聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)、等位基因特异性PCR和环介导等温扩增(LAMP)技术在杀菌剂抗性快速检测方面的研究进展。此外,对抗药性治理对策进行了讨论和展望。

关键词：植物病原真菌杀菌剂抗性机制抗性检测抗性治理对策

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植物诱导免疫及其应用研究进展

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浙江农业学报 2008年第1期20卷 72-77页

作者：李国钧李大勇宋凤鸣浙江大学水稻生物学国家重点实验室生物技术研究所浙江杭州310029

概述了植物诱导免疫的特点、诱导因子、生理生化与分子机理,简要介绍了诱导免疫技术在植物病害防治中的应用,并讨论了植物诱导免疫研究中存在的问题和今后的发展前景。

关键词：诱导免疫诱导因子病害防治机理

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GCK家族蛋白激酶MoSOK1调控稻瘟病菌的生长发育与致病性

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浙江农业学报 2018年第6期30卷 999-1007页

作者：冯晓晓李海娇李玲王教瑜林福呈卢建平水稻生物学国家重点实验室浙江大学生物技术研究所浙江杭州310058 浙江大学生命科学学院浙江杭州310058 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所浙江杭州310021 浙江农林大学农业与食品科学学院浙江杭州311300

稻瘟病菌致病相关基因功能的研究有助于揭示其致病机理,为稻瘟病防治提供理论依据。本研究利用基因替换技术对稻瘟病菌SOK1同源基因(Mo SOK1)进行了分析。Mo SOK1编码GCK(germinal center kinase)家族的Ste20蛋白激酶,其与全蚀病菌中对... 详细信息

稻瘟病菌致病相关基因功能的研究有助于揭示其致病机理,为稻瘟病防治提供理论依据。本研究利用基因替换技术对稻瘟病菌SOK1同源基因(Mo SOK1)进行了分析。Mo SOK1编码GCK(germinal center kinase)家族的Ste20蛋白激酶,其与全蚀病菌中对应蛋白具有最高同源性。本研究表明,Mo SOK1基因在附着胞分化关键期上调表达;与野生型菌株相比,Mo SOK1基因缺失突变体菌落颜色加深,气生菌丝减少,生长速度变慢,产孢量下降,分生孢子萌发延迟,致病性降低。另外,交配实验表明,Mo SOK1基因缺失突变体能够进行交配,但产子囊壳能力降低。本研究初步表明,Mo SOK1基因参与稻瘟病菌生长发育和致病过程。

关键词：稻瘟病菌致病相关基因 Mo SOK1

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基于单克隆抗体的番茄黑环病毒血清学检测技术

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农业生物技术学报 2020年第10期28卷 1893-1900页

作者：刘莉何宛芹于翠吴建祥浙江经贸职业技术学院应用工程系浙江大学生物技术研究所/国家水稻生物学重点实验室上海海关动植物与食品检验检疫技术中心

番茄黑环病毒(Tomato black ring virus, TBRV)是严重危害多种草本及木本植物的口岸检疫性有害生物,加强口岸检验检疫是防止其入侵我国的关键。本研究以制备的抗TBRV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb)建立TBRV的血清学检测技... 详细信息

番茄黑环病毒(Tomato black ring virus, TBRV)是严重危害多种草本及木本植物的口岸检疫性有害生物,加强口岸检验检疫是防止其入侵我国的关键。本研究以制备的抗TBRV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb)建立TBRV的血清学检测技术,旨在为该病毒的检测和口岸检验检疫提供技术支持。以提纯的TBRV粒子为免疫抗原,利用杂交瘤细胞技术制备4株能分泌抗TBRV单抗的杂交瘤细胞(10A8, 21A8, 21B8和8D3)及其单抗腹水。4株单抗腹水的间接酶联免疫吸附试验(indirect enzymelinked immunosorbent assay, indirect-ELISA)效价达到10-7。Western blot分析单抗特异性表明,4株单抗均与感染植物中的TBRV外壳蛋白亚基发生特异性免疫反应,而不与健康植物组织发生反应。利用制备的单抗建立检测TBRV的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue printELISA) 2种血清学方法。建立的Dot-ELISA和Tissue print-ELISA均能特异性检测感病植物中的TBRV,而与感染烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus, TRSV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus, TSWV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus, ToMV)和番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)的植物和健康植物均呈阴性反应。以4株单抗建立的Dot-ELISA血清学方法检测TBRV病叶粗提液的灵敏度分别为1∶10 240、1∶10 240、1∶5 120和1∶5 120。上述实验结果表明,基于制备的4株单抗所建立的DotELISA和Tissue print-ELISA血清学方法对于TBRV检测具有高度特异性和灵敏性,可以准确、有效地用于口岸TBRV检验检疫和田间植物TBRV的检测诊断。

关键词：番茄黑环病毒(TBRV) 单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) 组织印迹酶联免疫吸附试验(Tissue print-ELISA)

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假眼小绿叶蝉微卫星位点的生物信息学分析

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昆虫学报 2016年第4期59卷 421-426页

作者：李倩陈学新韩宝瑜中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室杭州310018 浙江大学昆虫科学研究所水稻生物学国家重点实验室农业部农业昆虫学重点实验室杭州310058

【目的】为开发假眼小绿叶蝉Empoasca vitis分子标记,采用高通量测序技术对假眼小绿叶蝉DNA进行了测序与分析。【方法】本研究基于Illumina Hi Seq测序技术,构建了PE文库（~400bp）,对获得的测序数据利用生物信息学分析手段完成全基因... 详细信息

【目的】为开发假眼小绿叶蝉Empoasca vitis分子标记,采用高通量测序技术对假眼小绿叶蝉DNA进行了测序与分析。【方法】本研究基于Illumina Hi Seq测序技术,构建了PE文库（~400bp）,对获得的测序数据利用生物信息学分析手段完成全基因组扫描,并进一步使用MISA分析鉴定基因组序列中出现的微卫星序列（SSR）。针对微卫星序列共设计10对引物,并使用3步法进行引物多态性筛选。【结果】共计检测Scaffold数量为183 194条,其中包含SSR的Scaffold共计1 545条,共计筛选出1 569个SSR位点。在假眼小绿叶蝉的微卫星中,共包括87种重复基元类型,二核苷酸与三核苷酸重复序列为主要重复类型,分别占SSRs总数的70.26%和27.84%;二核苷酸重复基元CA/TG和三核苷酸重复基元AAT/ATT是优势重复基元,分别占SSRs总数的33.96%和5.86%。在设计的10对引物中,5对具有多态性,在8个假眼小绿叶蝉个体中共发现16个等位基因。【结论】结果说明假眼小绿叶蝉SSR位点在多态性方面具有极大的可开发性,具有多态性的SSR位点可对假眼小绿叶蝉种群间的分化,种群间的扩散机理和途径及影响因素等问题提供分子视角。

关键词：假眼小绿叶蝉基因组微卫星生物信息学高通量测序

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稻曲球形态与超微结构研究

稻曲球形态与超微结构研究

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：胡东维阿布都拉徐颖何黎平浙江大学生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室

本文对采自我国不同地区的稻曲球的超微结构进行了比较研究。结果表明,在所解剖的1082个稻曲球中均包含花药;其中,花粉粒已经形成相对完整的花粉内壁和外壁结构,有结构发育良好的萌发孔。说明稻曲病菌的侵染发生在花药发育的后期,病原... 详细信息

本文对采自我国不同地区的稻曲球的超微结构进行了比较研究。结果表明,在所解剖的1082个稻曲球中均包含花药;其中,花粉粒已经形成相对完整的花粉内壁和外壁结构,有结构发育良好的萌发孔。说明稻曲病菌的侵染发生在花药发育的后期,病原菌菌落在水稻开花之前已经生长充满了整个颖壳。扫描和透射电子显微镜观察表明,花药室内充满稻曲病菌菌丝,但所有花药壁的内壁和外壁上均没有发现病原菌菌丝侵

关键词：稻曲球病原菌稻曲病菌微结构

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洋葱伯克氏菌群在毛竹根围的分布及其基因型多样性研究

洋葱伯克氏菌群在毛竹根围的分布及其基因型多样性研究

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第四届中国植物细菌病害学术研讨会

作者：楼妙苗方媛谢关林浙江大学生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室

洋葱伯克氏菌群（Burkholderia cepacia complex,Bcc）是一组表型相近但基因型不同的复合物,目前至少有九个基因型。该菌广泛存在于植物根围、土壤、水以及田径场等城市环境中,一方面Bcc菌具有良好的生防潜能,可以净化环境,促进植物的生... 详细信息

洋葱伯克氏菌群（Burkholderia cepacia complex,Bcc）是一组表型相近但基因型不同的复合物,目前至少有九个基因型。该菌广泛存在于植物根围、土壤、水以及田径场等城市环境中,一方面Bcc菌具有良好的生防潜能,可以净化环境,促进植物的生长;另一方面它又是一种人体条件致病菌,可使囊性肺纤维化（CF）病人和慢性肉芽肿疾病（CGD）患者感染后致死。目前国外已有大量关于Bcc菌的研究,但国内外尚无Bcc菌在毛竹根围的记录。本研究以杭州的三大竹类观赏区（杭州植物园、黄龙洞以及云栖竹径景区）为土壤采集点。每个采样点均用五点取样法收集50-100株毛竹根围土壤,放于消毒的塑料袋中,及时送于实验室进行样本根围细菌的分离。对分离到的细菌首先进行表型的初步鉴定,然后对经表型鉴定的Bcc疑似菌株采用recA基因片断的特异性扩增,将菌株准确鉴定到洋葱伯克氏菌群水平。对确认的Bcc菌株采用限制性内切酶HaeⅢ对其recA基因片段进行了限制性酶切（RFLP）分析,以探测Bcc菌的遗传多样性。最后通过基因型特异性PCR确定各菌株的基因型,挑取代表菌株测其RecA基因序列用于聚类分析,以便更好的确定鉴定的准确性。从三个采样地点中共获得300余株Bcc菌,其中70余株分离自PCAT培养基,230余株分离自TBT培养基。鉴定为Bcc的菌株都采用限制性内切酶HaeⅢ对其recA基因片段进行了限制性酶切（RFLP）分析,获得了多种酶切图谱,并且有新的酶切图谱类型出现,说明了Bcc菌在毛竹根围的基因型具有高度多样性。***（基因型Ⅸ）与***（基因型Ⅰ）的酶切图谱不同,但基因型特异性PCR所用引物相同,说明更加有效的区分方法仍待研究。目前为止共获得了5个基因型,部分菌株不属于基因型Ⅰ-Ⅸ种的任何一种,可能为刚报道的新基因型,仍待进一步的鉴定。己鉴定的5个基因型分别为***（基因型Ⅰ）,***（基因型Ⅲ）,***（基因型Ⅳ）,***（基因型Ⅷ）和***（基因型Ⅸ）。其中***菌株的数量最多,其次为***和***。尽管之前有报道表明***在环境中分布较为广泛,但***作为植物根围土壤中的优势基因型则仍属首次发现。国外的研究表明,自然界中以***和***的分布最为广泛,2007年张立新首次报道***为水稻根围的优势基因型而本研究则发现***为毛竹根围的主要基因型,说明Bcc菌优势基因型的存在与其所生长的自然环境具有较大的联系。***由于其强致病性一直备受关注,此次共从毛竹根围土壤中分离到20多株,较之国外的研究来说所占总Bcc分离物的比例较少,但仍然印证了自然环境可能是人体条件致病菌的"天然储存库"这一假设。

关键词：洋葱伯克氏菌群基因型毛竹根围 Burkholderia pyrrocinia

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稻曲病菌菌核降解真菌的筛选

稻曲病菌菌核降解真菌的筛选

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中国植物病理学会第十届全国会员代表大会暨2014年学术年会及第四届中美植物病理学学术研讨会

作者：李丹阳邓启得雍明丽胡东维浙江大学生物技术研究所/水稻生物学国家重点实验室

稻曲病是由稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)侵染水稻花丝造成的一种水稻穗部真菌病害,典型症状是形成外部具有大量厚垣孢子的稻曲球。在一定环境条件下,稻曲球的表面可形成一至数个菌核。本实验室最近从越冬、萌发特性和条件子囊孢子... 详细信息

稻曲病是由稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)侵染水稻花丝造成的一种水稻穗部真菌病害,典型症状是形成外部具有大量厚垣孢子的稻曲球。在一定环境条件下,稻曲球的表面可形成一至数个菌核。本实验室最近从越冬、萌发特性和条件子囊孢子捕捉的分析表明,菌核萌发产生的子囊饱子可能是主要的初侵染源,在病害循环中起重要作用。因此,针对菌核和子囊孢子的控制是稻曲病防治技术的关键环节。目前,国内外主要采用化学农药对其侵染期进行防治,但常常因降雨等环境原因造成防治效果不佳,同时也带来农药残留、环境污染和病原菌产生抗药性等潜在问题。近年来,利用拮抗微生物防治植物病害的研究进展较快,在水稻纹枯病、白叶枯病等作物病害的防治上均已经取得很好效果,而利用拮抗菌防治水稻稻曲病的报道还很少,且现有的一些稻曲病生防菌的筛选试验主要是研究拮抗菌对稻曲病菌丝的抑制。本实验利用28种嗜低温真菌,以及用蘑菇为培养基,从稻田土壤中筛选出的55株生长较好的真菌,进一步与菌核共培养,观察其对菌核的降解效果,筛选出6株对菌核有明显降解作用的生防菌株,利用通用引物ITS5、ITS4扩增出rDNA-ITS对筛选到的真菌进行测序并结合形态学特征分析,筛选出的几种生防菌株分别为:鸡爪菌(Bionectria ochroleuca)、粘鞭霉(Gliomastix polychroma)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、草酸青霉(Penicillium oxalicum)、粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)。被降解菌核的透射电镜(TEM)观察表明,筛选到的几种生防真菌对菌核的降解作用有寄生和腐生两种方式。田间试验进行中。本研究的结果为稻曲病的综合控制提供了新的途径。

关键词：稻曲病菌菌核生防菌

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免疫捕捉PCR和经典PCR法检测水稻细菌性谷枯病菌比较研究

免疫捕捉PCR和经典PCR法检测水稻细菌性谷枯病菌比较研究

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第四届中国植物细菌病害学术研讨会

作者：罗金燕谢关林浙江大学生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室

本研究结合血清学方法和分子生物学方法,利用多克隆抗体技术成功的获得了4种抗水稻细菌性谷枯病菌(Burkholderia glumae)的全菌体抗血清(ASBg14、ASBg32、ASBg26和ASBg04),ODD法测定该4种抗血清的效价都达到1:32以上,所有利用凝聚法测... 详细信息

本研究结合血清学方法和分子生物学方法,利用多克隆抗体技术成功的获得了4种抗水稻细菌性谷枯病菌(Burkholderia glumae)的全菌体抗血清(ASBg14、ASBg32、ASBg26和ASBg04),ODD法测定该4种抗血清的效价都达到1:32以上,所有利用凝聚法测定的抗血清效价均达到了1:5120以上,通过两种方法结合测定效价均显示为合格抗体。通过对4种抗血清的专化性进行研究,结果表明ASBg14和ASBg32专化性较高,但是抗血清ASBg26除了与***产生白色沉淀线外,还和非***菌PA1和PS3产生阳性反应,ASBg04除了与***产生阳性反应外,也和非***菌M258产生白色沉淀线,这两种抗血清的专化性不是很理想,可能是由于这些病原菌存在相似的抗原位点,交叉反应导致的结果。用直接PCR技术和免疫捕捉PCR技术检测水稻细菌性谷枯病菌,所有谷枯病菌都能产生500bp左右的特异性片段,而其它参照菌非***的8个菌株均无特异性扩增片段的产生。对两种PCR检测方法的灵敏度比较发现,在配制的浓度梯度菌悬液检测实验中,直接PCR技术只能检测到1×10～5cfu/ml左右的悬浮液,而免疫捕捉PCR技术在1×10～3cfu/ml浓度时也能检测到,免疫捕捉PCR比直接PCR灵敏度高10～2倍左右。检测人工接种的病稻种实验中,直接PCR技术需要2粒以上带菌种子才能检测到,而免疫捕捉PCR技术仅1粒带菌种子即可,这也显示了免疫捕捉PCR方法检测谷枯病菌比直接PCR的方法要灵敏。将免疫吸附富集(ISE)和经典PCR的优点结合起来的免疫捕捉PCR方法(mACT-PCR),用制备好的合格抗体包被于固相内壁,捕捉目标菌,清洗未吸附微生物,进行PCR反应,提高了检测灵敏度和检测效率,不受抑制因子影响,对单粒种子是否带水稻细菌性谷枯病菌也能检测出来。此外,研究证明如果结合一定量的裂解剂或吐温有利于扩增条带的清晰,提高检测效率,mACT-PCR方法的灵敏度取决于抗体的捕获效率和抗体的亲和力,并且抗体的纯化程度直接影响微量管壁包被后对目标菌的捕捉,另外抗体的制备也和兔子的个体差异、抗原差异和免疫过程有关。

关键词： Burkholderia glumae 检测免疫捕捉PCR

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