检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2016年第7期24卷 1073-1082页

作者：张媛媛魏铭李俊张婷全滟平舒特俊于威浙江理工大学生命科学学院/浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)bro(baculovirus repeated ORF)-d基因普遍存在于多种感染鳞翅目昆虫的多角体病毒基因组中,是杆状病毒中一类重复开放阅读框序列。为了解bro-d基因在病毒感染过程中的作用... 详细信息

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)bro(baculovirus repeated ORF)-d基因普遍存在于多种感染鳞翅目昆虫的多角体病毒基因组中,是杆状病毒中一类重复开放阅读框序列。为了解bro-d基因在病毒感染过程中的作用及其与宿主细胞凋亡之间的关系,本研究利用Red重组技术敲除Bm NPV基因组中的bro-d基因,构建基因缺失型病毒bro-d-ko-Bacmid,并将该缺失型病毒转染家蚕Bm N细胞,利用q RT-PCR技术检测bro-d基因的缺失对病毒基因组复制、转录水平以及抑制凋亡蛋白2基因(inhibitor of apoptosis protein 2,iap2)的影响。结果显示,bro-d基因缺失后会导致病毒基因组的复制水平显著下降(P<0.05),同时病毒的早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平也都显著下降(P<0.05);iap2的转录水平显著下调(P<0.05)。在bro-d基因缺失型病毒的复制水平明显低于野生型病毒的情况下,仍会导致细胞活力显著下降(P<0.05);bro-d基因缺失引起细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白含量明显低于野生型病毒,而Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)含量显著高于野生型病毒(P<0.05),进而导致细胞凋亡水平上升。结果表明,bro-d基因不仅对病毒各时期基因表达水平具有调控作用,也可通过调控iap2的表达进而调控宿主细胞的凋亡水平。研究成果为深入了解bro-d基因在病毒感染过程中的功能提供了基础资料,也为通过延长宿主细胞寿命、提高目的蛋白表达产量来进行杆状病毒表达载体的改造提供了新思路。

关键词：家蚕核型多角体病毒(BmNPV) bro-d 基因敲除转录细胞凋亡

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肿瘤SDH基因突变的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2017年第1期44卷 31-43页

作者：曹智发陈伟才杨佩佩周海梦欧文斌浙江理工大学生命科学学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江清华长三角研究院浙江省应用酶学重点实验室嘉兴314006

线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)是三羧酸循环和有氧电子传递呼吸链中的关键酶之一,包含A、B、C、D 4个亚基.4个亚基分别由4个基因编码,即SDHA、SDHB、SDHC和SDHD,4个基因突变可以诱发癌症,包括副神经节瘤(paraganglio... 详细信息

线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)是三羧酸循环和有氧电子传递呼吸链中的关键酶之一,包含A、B、C、D 4个亚基.4个亚基分别由4个基因编码,即SDHA、SDHB、SDHC和SDHD,4个基因突变可以诱发癌症,包括副神经节瘤(paraganglioma,PGL)、嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PHEO)、肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)、胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)、Leigh综合症等.近年来,突变的SDH已经被证实是一种重要的诊断与预后的生物标志物和治疗分子标靶.本文就SDH存在的各种突变以及在肿瘤发生、发展与转移的作用机理研究的进展进行全面的论述.

关键词：琥珀酸脱氢酶 SDH突变副神经节瘤嗜铬细胞瘤肾细胞癌胃肠道间质瘤

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39K基因对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制和转录的影响

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农业生物技术学报 2016年第3期24卷 416-425页

作者：李俊张婷张媛媛全滟平舒特俊聂作明于威浙江理工大学生命科学学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室

39K同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒基因组中,其编码产物为一种磷蛋白。迄今的研究表明,39K基因与病毒基因表达调控有关,但家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)39K基因对病毒复制和转录的具体调控作用... 详细信息

39K同源基因存在于所有鳞翅目昆虫杆状病毒基因组中,其编码产物为一种磷蛋白。迄今的研究表明,39K基因与病毒基因表达调控有关,但家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)39K基因对病毒复制和转录的具体调控作用尚不清楚。本研究利用Red重组技术和Bac-to-Bac系统分别敲除和回补39K基因,构建了39K缺失型病毒39K-ko-Bacmid和修复型病毒39K-re-Bacmid,并分别转染家蚕(Bombyx mori)细胞系Bm N细胞,发现二者均能产生具有感染活力的病毒粒子,表明39K基因不是Bm NPV复制的必需基因,但是该基因的缺失可显著降低病毒滴度。进一步利用q PCR发现,39K基因缺失对病毒基因组早期基因组的复制没有显著影响,但在后期会降低病毒基因组的复制水平,并导致病毒各时期基因转录水平的极显著下降(P<0.01)。为了进一步了解39K基因对Bm NPV极晚期基因多角体启动子的表达调控作用,本研究构建了由Bm NPV多角体启动子驱动的萤火虫萤光素酶和家蚕胞质肌动蛋白A3启动子驱动海肾萤光素酶的双萤光素酶报告系统,通过定量检测荧光素酶活性的变化情况,证明了39K基因对多角体启动子具有显著的负调控作用。综上所述,可知39K基因不是Bm NPV复制的必需基因,但该基因的缺失可显著降低病毒各时期基因的表达水平,并导致多角体基因启动子的启动活性增强。本研究结果将为深入了解Bm NPV 39K基因对病毒基因组复制、转录的影响奠定基础,同时也将为家蚕杆状病毒(Bombyx mori baculovirus)表达系统高效转录机制的研究提供资料。

关键词：家蚕核型多角体病毒(BmNPV) 39K基因基因敲除双萤光素酶报告系统多角体基因启动子

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BmNPV or f98对家蚕核型多角体杆状病毒复制、转录及包装的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2015年第6期41卷 623-630页

作者：史利利蒋彩英于威陈琛蒋磊巩成见童富淡浙江理工大学生命科学学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

为了研究家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)基因orf98的功能,通过λRed重组系统定点敲除BmNPVorf98基因,构建缺失型重组病毒Bm98-ko-Bacmid;以Bac-to-Bac系统补回BmNPVorf98基因,构建补回型重组病毒Bm98-re-Bacmid;将野生型病毒(wtBacmid)、缺失型病毒(Bm98-koBacmid)和补回型病毒(Bm98-re-Bacmid)分别转染家蚕细胞BmN。病毒滴度检测结果显示,Bm98-ko-Bacmid可形成侵染性的病毒粒子,但数量显著降低(P<0.05).透射电子显微镜观察发现,Bm98-ko-Bacmid只产生游离的杆状病毒粒子,数量明显减少,而wtBacmid和Bm98-re-Bacmid产生大量具有囊膜结构的成熟病毒粒子。荧光定量聚合酶链反应分析结果表明,BmNPVorf98基因缺失对BmNPV病毒复制没有影响,而早期基因lef3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显著降低(P<0.05)。综上所述,BmNPVorf98基因对病毒复制是非必需的,但显著影响病毒的繁殖速度和包装(P<0.05);对病毒各个时期的基因转录也具有重要影响。

关键词：家蚕核型多角体病毒 λRed重组系统 Bac-to-Bac系统病毒复制基因转录

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副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应蛋白及其对宿主细胞的操控

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中国生物化学与分子生物学报 2017年第3期33卷 247-251页

作者：李楚楚李伟燕潘建义浙江理工大学生命科学学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

副溶血弧菌是典型的食源性病原菌,也是全球范围内引起肠胃炎的主要病原菌。针筒状的Ⅲ型分泌系统(T3SS)为该菌主要的毒力因子,细菌感染时可将其效应蛋白直接注射至宿主细胞中,通过效应蛋白操纵宿主细胞,介导毒力的发挥。多数临床分离的... 详细信息

副溶血弧菌是典型的食源性病原菌,也是全球范围内引起肠胃炎的主要病原菌。针筒状的Ⅲ型分泌系统(T3SS)为该菌主要的毒力因子,细菌感染时可将其效应蛋白直接注射至宿主细胞中,通过效应蛋白操纵宿主细胞,介导毒力的发挥。多数临床分离的副溶血弧菌含有2套T3SSs,其中T3SS1分泌的效应蛋白主要通过诱导细胞自噬、变圆和裂解等过程来发挥其细胞毒性,而T3SS2分泌的效应蛋白则主要通过破坏细胞骨架和操控细胞信号传导来发挥肠毒性。本文主要对副溶血弧菌T3SSs的组成和目前已发现的效应蛋白及其对宿主细胞的操控进行介绍。该研究不仅对深入了解该菌的致病机制有重要意义,而且也为宿主细胞信号转导机制研究提供新视角。

关键词：副溶血弧菌 Ⅲ型分泌系统(T3SS) 效应蛋白细胞骨架信号转导

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人工抗菌肽的研究进展

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药物生物技术 2017年第4期24卷 364-368页

作者：李倩马慧霞张皓然肖汝钱央央朗忠元吕正兵浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018

抗菌肽由于具有广谱抗菌、半衰期较短的特点,成为有望替代抗生素的产品之一,但是天然抗菌肽仍然存在产量低下、生产成本高等问题,通过设计抗菌肽片段、改变部分氨基酸序列、连接抗菌肽片段等基因工程方法可实现人工抗菌肽的稳定及高产... 详细信息

抗菌肽由于具有广谱抗菌、半衰期较短的特点,成为有望替代抗生素的产品之一,但是天然抗菌肽仍然存在产量低下、生产成本高等问题,通过设计抗菌肽片段、改变部分氨基酸序列、连接抗菌肽片段等基因工程方法可实现人工抗菌肽的稳定及高产量表达,可获得具有更高生物活性的人工抗菌肽,文章分析了近年来人工抗菌肽在生物活性、抗菌机制、设计方法及应用方面的研究进展,为抗菌肽的高效利用和低成本生产提供理论基础。

关键词：人工抗菌肽生物活性抗菌机制临床应用

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TBC蛋白质家族在GLUT4囊泡运输中的研究进展

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药物生物技术 2016年第4期23卷 359-362页

作者：程丹丹吴佳舒建洪吕正兵浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018

TBC域(Tre-2/Bub2/Cdc16),现普遍认为它是真核细胞中由大约200个氨基酸残基组成的保守性蛋白质结构域。进一步研究发现:含TBC域的蛋白质具有针对Rab GTPase的GAPs(GTPase activting Proteins)功能,而Rab蛋白质是一种具有进化保守性的小G... 详细信息

TBC域(Tre-2/Bub2/Cdc16),现普遍认为它是真核细胞中由大约200个氨基酸残基组成的保守性蛋白质结构域。进一步研究发现:含TBC域的蛋白质具有针对Rab GTPase的GAPs(GTPase activting Proteins)功能,而Rab蛋白质是一种具有进化保守性的小GTPase,参与囊泡运输等重要生理过程,且GLUT4囊泡转运对血糖调控有着重要作用,深入研究血糖调节作用的分子机制有助于发现治疗血糖代谢相关疾病(如2型糖尿病)的新的药物靶点。文章主要介绍了近年来TBC蛋白质与囊泡运输的研究进展。

关键词： GLUT4 TBC蛋白质囊泡运输

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海洋鱼类胃肠道微生物的研究进展

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药物生物技术 2016年第6期23卷 561-564页

作者：李倩洪梦佳章雨牧张文杰吕正兵浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018

胃肠道是集消化、吸收、代谢、免疫、内分泌于一体的特殊的"微生物摇篮",菌群数量众多,各菌种之间互相制约,互相依存,在质和量上达成一种生态平衡。随着分子生物技术以及微生物鉴定技术的发展,胃肠道微生物研究也随之进入了... 详细信息

胃肠道是集消化、吸收、代谢、免疫、内分泌于一体的特殊的"微生物摇篮",菌群数量众多,各菌种之间互相制约,互相依存,在质和量上达成一种生态平衡。随着分子生物技术以及微生物鉴定技术的发展,胃肠道微生物研究也随之进入了一个新时期,国内外众多最新研究表明,胃肠道微生物在机体的营养物质代谢、自身发育、自身免疫、疾病产生及癌症治疗等方面都起到极其重要的作用。胃肠道菌群具有的特殊免疫活性,对宿主生理机能的影响也越来越为人们所关注。海洋鱼类种类丰富,其生活环境的多样性及特殊性,使得其胃肠道微生物较为特殊。目前我国对于鱼类的研究主要集中在淡水养殖鱼类上,对于海洋鱼类的研究较少,且此方面的研究主要集中在大黄鱼、大菱鲆等海洋经济鱼类上。近年来陆续有研究表明在海洋鱼类胃肠道中中分离到的微生物种类繁多,但以细菌居多。具有拮抗致病菌活性的菌系,作为胃肠道内的益生菌,其对宿主具有特殊的作用。文章就海洋鱼类胃肠道微生物的研究概况做简述,特别展示海洋鱼类胃肠道微生物巨大的研究价值以及利用前景。

关键词：海洋鱼类胃肠道菌群肠道益生菌

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家蚕核型多角体病毒orf61基因缺失对病毒复制和各时期基因转录的影响

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蚕业科学 2017年第6期43卷 943-951页

作者：薛圣杰李俊余海鹏张媛媛胡冬冰全滟平于威浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

orf61是杆状病毒晚期表达的核心基因之一。为了研究家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)orf61基因的功能,利用Red重组技术与Bac-to-Bac系统分别敲除和异位补回orf61基因,构建了orf61缺失型病毒orf61-ko-Bacmid以及补回型病毒orf61-reBacmid,然... 详细信息

orf61是杆状病毒晚期表达的核心基因之一。为了研究家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)orf61基因的功能,利用Red重组技术与Bac-to-Bac系统分别敲除和异位补回orf61基因,构建了orf61缺失型病毒orf61-ko-Bacmid以及补回型病毒orf61-reBacmid,然后分别转染家蚕培养细胞Bm N,调查orf61基因缺失对Bm NPV复制和不同时期基因转录的影响。检测orf61基因缺失型病毒转染Bm N细胞液上清中的病毒滴度为0,说明orf61基因缺失导致病毒不能形成有感染活性的芽生型病毒粒子(BV);荧光定量PCR分析orf61基因缺失会显著地降低病毒基因组的复制水平,进而导致病毒各个时期基因转录水平极显著下降(P<0.01)。此外,通过体外EMSA试验和构建双荧光素酶报告基因系统,检测ORF61蛋白对多角体蛋白基因polh启动子的调控作用,结果显示该蛋白质是polh基因转录的负调节因子。研究结果有助于深入阐释Bm NPV orf61基因在病毒基因组复制中的作用以及对极晚期表达的多角体蛋白基因polh的转录调控作用。

关键词：家蚕核型多角体病毒 orf61基因病毒复制基因转录调控多角体蛋白基因启动子

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家蚕N-乙酰基转移酶基因BmNAT的克隆与表达分析

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蚕业科学 2016年第2期42卷 228-236页

作者：程旭升李斌聂作明盛清浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

N-乙酰基转移酶(N-acetyltransferase,NAT)是昆虫体内一种催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的酶,主要与色素沉积、生理节律等有关。对已公布的家蚕(Bombyx mori)N-乙酰基转移酶基因Bm NAT(Gen Bank登录号:NP_001040401.1)进行生物... 详细信息

N-乙酰基转移酶(N-acetyltransferase,NAT)是昆虫体内一种催化乙酰基团在乙酰辅酶A和胺之间转移的酶,主要与色素沉积、生理节律等有关。对已公布的家蚕(Bombyx mori)N-乙酰基转移酶基因Bm NAT(Gen Bank登录号:NP_001040401.1)进行生物信息学分析:该基因序列全长763 bp,ORF为564 bp,编码187个氨基酸残基,分子质量21.4 k D;多序列比对表明Bm NAT与脐橙螟(Amyelois transitella)同源蛋白质的序列相似性最高。通过原核表达的方法制备了融合Bm NAT蛋白,经蛋白质纯化并免疫新西兰兔获得多克隆抗体。亚细胞定位显示Bm NAT主要存在于细胞质和细胞核中。利用Western blotting检测Bm NAT在家蚕不同发育时期和5龄幼虫各组织器官的表达谱,结果表明Bm NAT在蛾、卵期以及5龄幼虫的头部表达量较高,与Bm NAT的qRT-PCR检测结果基本一致,初步推断Bm NAT可能在家蚕的这些组织或发育时期发挥一定的生物学功能。流式细胞实验显示Bm NAT对细胞周期可能存在一定的影响。

关键词：家蚕 N-乙酰基转移酶基因克隆原核表达时空表达谱亚细胞定位

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