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中国水稻科学 2012年第1期26卷 9-15页

作者：吕明芳羊健张恒木陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江杭州310021

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL2... 详细信息

水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)基因组片段S7含有2个非重叠的阅读框,所编码的蛋白分别为p7a和p7b。根据RBSDV S7序列(EU111804)设计特异性引物分别扩增编码p7a和p7b蛋白的基因片段,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)和pSBET上,再以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS或BL21(DE3)pLysE为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的蛋白免疫小鼠,制备了p7a和p7b蛋白的特异性抗血清。蛋白质印迹分析表明p7a和p7b蛋白均在水稻病株中表达,但p7a含量较为丰富,易于在病株中检测到,而p7b在病株中含量则很低;在病毒粒子中,两者均未检测到任何信号,表明两者均为RBSDV的非结构蛋白。

关键词：水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白原核表达

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五个抗稻瘟病基因在浙江省水稻品种中的分布和抗性评价

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浙江农业学报 2019年第6期31卷 922-929页

作者：何海燕柴荣耀邱海萍毛雪琴王艳丽孙国仓中国农业科学院研究生院北京100080 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021 浙江省植物有害生物防控重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地浙江杭州310021

为了明确浙江省部分水稻主栽品种和中国稻瘟菌生理小种鉴别品种中稻瘟病抗性基因分布情况,本研究采用5个基于稻瘟病抗感等位基因序列设计的功能性分子标记,对40份浙江省水稻主栽品种和6份稻瘟菌鉴别品种中Pit、Pib、Pii/Pi3/Pi5、Pia、... 详细信息

为了明确浙江省部分水稻主栽品种和中国稻瘟菌生理小种鉴别品种中稻瘟病抗性基因分布情况,本研究采用5个基于稻瘟病抗感等位基因序列设计的功能性分子标记,对40份浙江省水稻主栽品种和6份稻瘟菌鉴别品种中Pit、Pib、Pii/Pi3/Pi5、Pia、Pi1等5个稻瘟病抗性基因进行了分子检测。结果发现,这5个抗性基因在浙江省栽培品种中分布频率不同,其中Pib基因分布最广,占63.04%;其次是Pia,占58.70%;携带Pii/Pi3/Pi5和Pit抗性基因的材料较少,分别为21.74%和10.87%。同时用2015—2017年田间采集到的141个稻瘟菌菌株检测46个水稻品种苗瘟抗性水平,结果显示,其中仅15个品种的抗性频率在70%以上,大部分品种携带其中1~2个抗性基因。聚合了多个抗性基因的品种抗性水平相对较高。

关键词：水稻稻瘟病抗病基因分子标记

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基于Gateway技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统

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浙江农业学报 2013年第5期25卷 1024-1030页

作者：周洁王栩鸣陈斌陈娟杨勇余初浪严成其陈剑平浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所省部共建国家重点实验室培育基地农业部植物保护与生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江杭州310021 浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321000

创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染... 详细信息

创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景。同时由XcmⅠ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致。此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究。

关键词：入门载体 BiFC 基因互作 Gateway

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茉莉素调控植物生长发育的研究进展

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植物生理学报 2015年第4期51卷 407-412页

作者：冯孟杰徐恒张华朱英浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所、浙江省植物有害生物防控重点实验室、省部共建国家重点实验室培育基地浙江杭州310021

茉莉素(jasmonates,JA)是一类重要的植物内源激素,有着广泛的生物学功能,在植物的生长发育、抵抗逆境胁迫的过程中扮演着重要的角色。本文将对茉莉素调控植物生长发育的功能及相应的分子机制做简要的综述。

关键词：茉莉素生长发育分子机制

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与水稻黑条矮缩病毒p5b互作的水稻基因片段筛选

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中国水稻科学 2012年第5期26卷 537-541页

作者：陆颖羊健张恒木陈剑平南京农业大学植物保护学院江苏南京210095 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植保生物技术重点开放实验室浙江杭州310021

由水稻黑条矮缩病毒基因组S5片段第2个开放阅读框(ORF)编码的p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白。构建了酵母双杂交体系的含水稻cDNA表达文库的pGADT7载体,同时将p5b基因构建到诱饵质粒pGBKT7上(pGBK-p5b),Western Blot和自激活实验结... 详细信息

由水稻黑条矮缩病毒基因组S5片段第2个开放阅读框(ORF)编码的p5b是一个功能未知的病毒非结构蛋白。构建了酵母双杂交体系的含水稻cDNA表达文库的pGADT7载体,同时将p5b基因构建到诱饵质粒pGBKT7上(pGBK-p5b),Western Blot和自激活实验结果显示p5b可在酵母中正确表达且无自激活活性。进一步利用p5b蛋白作为诱饵用酵母双杂交筛选水稻cDNA表达文库,鉴定出一些参与光合作用、呼吸作用等重要代谢过程的关键酶基因片段,这些酶可能与p5b蛋白之间存在相互作用,推测这些互作在病株症状发展过程中起作用。

关键词：水稻黑条矮缩病毒互作蛋白酵母双杂交

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河南省主要推广品种对小麦黄花叶病毒抗性的评价

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植物保护学报 2011年第2期38卷 102-108页

作者：孙炳剑李洪连杨新志谢联辉陈剑平福建农林大学植物病毒研究所福州350002 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植物保护与生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021 河南农业大学植物保护学院郑州450002 河南省西平县植保植检站西平463900

为了评价河南省主要推广品种对小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的抗性,于2006—2010年在河南省西平县病圃进行了田间抗性鉴定试验和室内间接ELISA检测,并分析了病害严重程度对产量的影响。结果表明,在供试的62个品种中... 详细信息

为了评价河南省主要推广品种对小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的抗性,于2006—2010年在河南省西平县病圃进行了田间抗性鉴定试验和室内间接ELISA检测,并分析了病害严重程度对产量的影响。结果表明,在供试的62个品种中,仅有新麦208表现为免疫;豫麦70-36、泛麦5号、阜麦936、山东95519、豫麦70、高优503、豫麦9676、郑麦366和陕麦229等9个品种表现为抗病,占供试品种的14.5%;濮优938、兰考矮早8、新原958、花培2号、温优1号、豫麦18、郑麦9023、豫麦47、豫农201、偃展4110、豫麦36、百农878和豫麦49-198等13个品种表现为中抗,占供试品种的21.0%;另外39个品种表现为感病,占供试品种的62.9%。对48个品种进行了产量与病害严重度分析,发现随着病害的严重度增加,小麦的穗数、千粒重以及产量都有明显下降,严重度为1级时,平均减产9.6%;严重度达到2级和3级时,平均减产分别为30.3%和33.5%。

关键词：小麦黄花叶病毒小麦品种抗性产量损失

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植物激素在种子休眠与萌发中的调控机制

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植物生理学报 2016年第5期52卷 599-606页

作者：于敏徐恒张华朱英浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物有害生物防控重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地杭州310021

种子休眠是重要的农艺性状,它与农业生产中作物的产量和品质息息相关。低休眠水平作物种子容易穗发芽,高休眠水平作物种子会造成播种季节的低萌发率。因此,种子的最佳休眠水平对农业生产非常重要。影响种子休眠的因素众多,本文重点阐述... 详细信息

种子休眠是重要的农艺性状,它与农业生产中作物的产量和品质息息相关。低休眠水平作物种子容易穗发芽,高休眠水平作物种子会造成播种季节的低萌发率。因此,种子的最佳休眠水平对农业生产非常重要。影响种子休眠的因素众多,本文重点阐述了内源激素调控种子休眠与萌发分子机制的研究进展,以期阐明种子休眠和萌发的分子机理,有效防控作物种子穗发芽。

关键词：种子休眠内源激素调控机理

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水稻无叶枕基因克隆及应用研究

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核农学报 2010年第3期24卷 436-441页

作者：许永汉彭建斐邓敏娟吴学龙鲍烈明陈锦清金卫浙江省植物代谢基因工程重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021 湖南农业大学生物安全科学技术学院湖南长沙410128

本研究报道由早籼品种"广陆矮4号"经60Coγ射线辐射诱变产生的水稻无叶枕突变体Oslg1-3。该水稻无叶枕性状受单隐性基因控制,通过图位克隆的方法将基因定位在第4号染色体,并最终克隆出该基因。除了无叶枕以外,Oslg1-3突变体... 详细信息

本研究报道由早籼品种"广陆矮4号"经60Coγ射线辐射诱变产生的水稻无叶枕突变体Oslg1-3。该水稻无叶枕性状受单隐性基因控制,通过图位克隆的方法将基因定位在第4号染色体,并最终克隆出该基因。除了无叶枕以外,Oslg1-3突变体的叶角即叶片与叶鞘之间的夹角也很小,因而叶片直立,可以用来培育叶片直立型水稻新品种。田间试验分析表明,经过遗传改良的Oslg1-3品系在合理密植的条件下能够显著提高水稻的产量,显示出该突变体材料在水稻育种实践中具有重要的应用价值。

关键词：水稻叶枕突变密植增产

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水稻抗稻瘟菌HIGS表达载体的构建及遗传转化

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植物保护 2015年第3期41卷 73-78,114页

作者：王梦颖刘敬瞿绍洪王旭丽王国梁中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021

水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的... 详细信息

水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的抗病技术,即在寄主植物中表达可沉默病原物特定基因的HIGS载体,达到控制病原菌扩展的目的。本研究选取了两个稻瘟菌致病关键基因Nox1和NAC为研究靶标,分别克隆其UTR区和CDS区中的特异区段,利用Gateway技术构建这4个片段HIGS表达载体,再利用农杆菌介导法将各载体分别转化水稻,通过鉴定得到转基因阳性植株,为后续开展该技术在水稻抗稻瘟病方面的深入研究奠定了基础。

关键词：水稻稻瘟病 HIGS 遗传转化

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一种无标记基因植物表达载体的改造方法

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浙江农业学报 2013年第4期25卷 804-807页

作者：周红姜良良燕飞陈剑平安徽农业大学植物保护学院安徽合肥230036 南京农业大学植物保护学院江苏南京210095 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植保生物技术重点实验室浙江省植物病毒学重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021

利用无标记基因表达载体开展转基因植物研究,是获得无标记基因转基因植物、保证转基因生物安全的手段之一。文章报道了一种无标记基因植物转化载体的改造方法,通过AseⅠ单酶切可去除pCAM-BIA1300植物转化载体内潮霉素标记基因完整表达... 详细信息

利用无标记基因表达载体开展转基因植物研究,是获得无标记基因转基因植物、保证转基因生物安全的手段之一。文章报道了一种无标记基因植物转化载体的改造方法,通过AseⅠ单酶切可去除pCAM-BIA1300植物转化载体内潮霉素标记基因完整表达框架。试验应用结果表明,利用此表达载体进行共转化研究,可获得不含标记基因、只含目的基因的转基因植株。此方法可在植物共转化研究中广泛应用。

关键词：无标记载体转基因生物安全

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