检索结果-内蒙古大学图书馆

浙江农业学报 2019年第5期31卷 777-783页

作者：张岩亓玉华鲁燕华杨乾坤何雨娟李俊敏陈剑平福建农林大学植物保护学院福建福州350002 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业农村部/浙江省植保生物技术重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021 宁波大学植物病毒学研究所浙江宁波315211

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能... 详细信息

小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)隶属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus),其基因组由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。先前的研究表明,马铃薯Y病毒组多种病毒编码的保守蛋白P3具有多种功能,在病毒复制、致病性、克服宿主抗性、细胞间移动等方面均具有重要作用,而P3在大麦黄花叶病毒属中是否有类似功能目前还未见报道。本研究利用烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的本氏烟基因沉默系统,明确了WYMV的P3碳端在本氏烟上具有致病功能域P3-C,但完整的P3则不具有致病能力。进一步移码突变研究表明,P3-C的致病性是由其编码的多肽引起的,而非病毒来源的小干扰RNA介导的宿主基因沉默。同时P3-C的两个跨膜结构域对致病性具有重要作用,单独表达任何一个跨膜结构域P3-C均不能在本氏烟上引起明显症状。

关键词：小麦黄花叶病毒 P3蛋白致病性

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本氏烟DnaJ-like蛋白在芜菁花叶病毒侵染过程中的作用

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浙江农业学报 2018年第12期30卷 2056-2064页

作者：孙超尘燕飞陈剑平云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业农村部植保生物技术重点实验室浙江省植保生物技术重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021

热休克蛋白40(HSP40)因其蛋白家族含有保守的J结构域又被称为DnaJ蛋白,其同源蛋白被称为DnaJ-like蛋白。研究表明,DnaJ蛋白家族响应了多种病毒的侵染,但发挥作用的方式各不相同。芜菁花叶病毒(TuMV)是一类重要的蔬菜病毒,给蔬菜生产造... 详细信息

热休克蛋白40(HSP40)因其蛋白家族含有保守的J结构域又被称为DnaJ蛋白,其同源蛋白被称为DnaJ-like蛋白。研究表明,DnaJ蛋白家族响应了多种病毒的侵染,但发挥作用的方式各不相同。芜菁花叶病毒(TuMV)是一类重要的蔬菜病毒,给蔬菜生产造成严重经济损失。DnaJ-like蛋白是否响应TuMV侵染,是否在TuMV侵染过程中发挥作用目前尚不清楚。本实验在本氏烟中克隆了分属DnaJ蛋白A类亚家族和B类亚家族的16条基因; qRT-PCR分析表明,DnaJ-like蛋白家族基因在TuMV侵染后表达上调。分别沉默2个亚家族的典型基因NbJ1和NbJ5后,TuMV在沉默植株上的病毒积累量显著较少。结果表明,DnaJ-like蛋白可能在TuMV侵染过程中发挥作用,这为深入了解TuMV的致病机制提供了新思路。

关键词：热休克蛋白40 芜菁花叶病毒同源性分析

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水稻WRKY转录调控因子研究进展

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生物技术通讯 2018年第2期29卷 286-294页

作者：郑超郑二松王栩鸣李冬月杨勇余初浪周洁严成其陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植保生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江杭州310021

WRKY转录调控因子是植物中最大的转录调控因子家族之一,包含1或2个大约由60个氨基酸残基组成的高度保守的WRKY结构域。WRKY结构域的N端有严格保守的WRKYGQK氨基酸序列,其C端有锌指结构模型Cys(2)-His(2)或Cys(2)-His Cys。WRKY转录调控... 详细信息

WRKY转录调控因子是植物中最大的转录调控因子家族之一,包含1或2个大约由60个氨基酸残基组成的高度保守的WRKY结构域。WRKY结构域的N端有严格保守的WRKYGQK氨基酸序列,其C端有锌指结构模型Cys(2)-His(2)或Cys(2)-His Cys。WRKY转录调控因子与靶基因启动子区域的DNA序列(T)TGAC(C/T)(W盒)特异性结合,调节目的基因的表达,在调控植物生长发育、物质代谢、抗病耐逆及氧化衰老过程中起重要作用。我们就有关水稻WRKY转录调控因子的结构分类及其生物学功能的研究进展做简要综述。

关键词： WRKY转录调控因子 W盒抗病耐逆氧化衰老

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侵染蚕豆ClYVV的鉴定及其衍生的小干扰RNA的深度测序鉴定研究

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浙江农业学报 2018年第3期30卷 406-412页

作者：张趁华郑红英严丹侃韩科雷彭杰军鲁宇文林林章东方陈剑平燕飞福建农林大学生命科学学院福建福州350002 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省和农业部植保生物技术重点实验室省部共建浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地浙江杭州310021 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全所安徽合肥230031 南京农业大学植物保护学院江苏南京210095

对安徽省合肥市采集到的具有明显典型花叶症状的蚕豆叶片进行深度测序,鉴定到样品中存在三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus,Cl YVV),并获得了Cl YVV的完整基因组序列,随后通过直接测序扩增基因组区域获得完整的基因组Cl YVV-HF... 详细信息

对安徽省合肥市采集到的具有明显典型花叶症状的蚕豆叶片进行深度测序,鉴定到样品中存在三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus,Cl YVV),并获得了Cl YVV的完整基因组序列,随后通过直接测序扩增基因组区域获得完整的基因组Cl YVV-HF。获得的Cl YVV-HF基因组由9 585个核苷酸组成,不包括poly(A)尾巴。Cl YVV-HF的全部核苷酸序列与之前报道的来自日本的分离株(AB011819、NC_003536)和来自韩国的分离株(KF975894)分别具有95.45%和95.10%的核苷酸同源性。进一步分析了Cl YVV-HF衍生的小干扰RNA的表征。vsiRNAs的大小为21~22 nt,vsiRNAs的5'末端碱基偏向于A/U。Cl YVV-HF来源的小干扰RNA大多来源于其基因组链中的7个热点,其中5个热点以21 nt vsiRNAs为主。生物学实验表明,Cl YVV可通过汁液摩擦接种多种豆科作物。这是有关中国Cl YVV分离株全部核苷酸序列的首次报道。

关键词：蚕豆 ClYVV 小干扰RNA

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bZIP转录因子在植物激素介导的抗病抗逆途径中的作用

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浙江农业学报 2017年第1期29卷 168-175页

作者：李冬月原文霞郑超王栩鸣周洁严成其陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植保生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江杭州310021

植物体内有一套复杂精细且交叉调控的激素信号网络,在植物应对不良环境胁迫的过程中起着至关重要的作用。bZIP转录因子作为基因表达的关键调控因子,在植物抗病抗逆相关基因的表达中行使着重要的功能。文章首先介绍了bZIP转录因子的结构... 详细信息

植物体内有一套复杂精细且交叉调控的激素信号网络,在植物应对不良环境胁迫的过程中起着至关重要的作用。bZIP转录因子作为基因表达的关键调控因子,在植物抗病抗逆相关基因的表达中行使着重要的功能。文章首先介绍了bZIP转录因子的结构和功能,阐述了其在几种主要的激素抗性调控途径中的作用机理,之后对各种激素信号通路之间的交叉调控途径及其关键调控节点蛋白进行了概括,以期阐明植物激素介导的抗性调控网络,并为新的抗性相关基因的挖掘和利用提供理论依据。

关键词： bZIP转录因子植物激素抗病抗逆信号调控

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利用CRISPR/Cas9技术靶向编辑水稻基因

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浙江农业学报 2017年第5期29卷 685-693页

作者：原文霞王栩鸣李冬月周洁严成其陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植保生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江杭州310021 云南农业大学植物保护学院云南昆明650201

以现有水稻CRISPR/Cas9载体系统为起点,优化改造了相应的载体及其构建方法,实现了两步法构建基因敲除载体。利用新的载体和方法,针对水稻日本晴(Oryza sativa *** ***)D3基因的3个靶向位点分别构建了相应的CRISPR/Cas9载体,并通过农杆... 详细信息

以现有水稻CRISPR/Cas9载体系统为起点,优化改造了相应的载体及其构建方法,实现了两步法构建基因敲除载体。利用新的载体和方法,针对水稻日本晴(Oryza sativa *** ***)D3基因的3个靶向位点分别构建了相应的CRISPR/Cas9载体,并通过农杆菌介导的遗传转化成功获得一系列转基因植株。T_0代转基因植株靶位点测序结果显示,靶位点DDRC1包括5种突变类型,植株的突变率为35.48%;靶位点DDRC2包括5种突变类型,植株的突变率为25.00%;靶位点DDRC3包括1种突变类型,植株的突变率为20.00%。利用T_1代纯合突变植株,进一步研究了所得纯合突变体的株高、分蘖数表型与CRISPR/Cas9编辑后基因型之间的关系,探讨了CRISPR/Cas9系统的基因编辑效率、位置效应和突变类型等特点,为进一步利用CRISPR/Cas9系统发展具有不同农艺性状的水稻种质材料提供了参考。

关键词：水稻 CRISPR/CaS9 D3基因基因编辑

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水稻类病变突变体中抗病相关基因的研究进展

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浙江农业学报 2015年第7期27卷 1294-1300页

作者：程晨王晶原文霞李冬月杨勇严成其陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部植保生物技术重点实验室浙江省植物病毒重点实验室浙江杭州310021

水稻类病变突变体是一类在水稻叶片表面自发形成类病斑表型的水稻突变体,且其中部分突变体会表现出对于水稻病原菌侵染增强的抗性,但控制该表型的类病变基因却似乎分别参与了各不相同的防御途径。文章主要综述了水稻类病变突变体的发现... 详细信息

水稻类病变突变体是一类在水稻叶片表面自发形成类病斑表型的水稻突变体,且其中部分突变体会表现出对于水稻病原菌侵染增强的抗性,但控制该表型的类病变基因却似乎分别参与了各不相同的防御途径。文章主要综述了水稻类病变突变体的发现与挖掘,类病变基因的克隆及功能分析等,并对其在水稻抗病性研究中的应用作了展望。

关键词：水稻类病变突变体基因克隆功能分析

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水稻OsWRKY7基因的表达研究

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中国水稻科学 2015年第6期29卷 559-570页

作者：李茹周洁李冬月王栩鸣杨勇余初浪程晔严成其陈剑平南京农业大学植物保护学院南京210095 浙江省植物有害生物防控重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部植物保护生物技术重点实验室/浙江省植物病毒学重点实验室/浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021 浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004

WRKY蛋白是植物中一类重要的转录因子,不仅参与植物生长发育的调控,还参与植物对各种生物和非生物胁迫的响应。本研究从水稻日本晴中分离OsWRKY7基因的编码序列(CDS),并克隆其启动子序列进行表达研究。首先通过实时定量PCR的方法检测不... 详细信息

WRKY蛋白是植物中一类重要的转录因子,不仅参与植物生长发育的调控,还参与植物对各种生物和非生物胁迫的响应。本研究从水稻日本晴中分离OsWRKY7基因的编码序列(CDS),并克隆其启动子序列进行表达研究。首先通过实时定量PCR的方法检测不同组织中OsWRKY7基因的相对表达量,结果表明,OsWRKY7在叶片中的表达水平较高,且开花期的剑叶中表达量高于7d苗龄的幼叶。进一步将OsWRKY7启动子与GUS报告基因融合,构建了植物表达载体pOsWRKY7-GUS,并将此载体转化日本晴。转基因植株不同组织染色分析结果显示,该启动子在植株的主根尖、叶片、颖壳中有GUS活性,其中叶片上可见全叶范围分布的大量蓝色斑点,这些染色结果与实时定量PCR的结果一致。进一步的接菌和激素处理还显示,OsWRKY7启动子在根和叶中的表达均受水稻白叶枯病菌[Xanthomonas oryzae ***(Xoo)]P10生理小种侵染的诱导,同时还受外源施加的细胞分裂素和生长素诱导,而水杨酸则会抑制其在根和叶中的表达。此外,我们还将OsWRKY7基因的CDS序列分别与绿色荧光蛋白和酵母GAL4的DNA结合域融合,对该基因进行水稻茎原生质体亚细胞定位分析和酵母自激活检验,结果显示该基因定位于细胞核中并具有转录自激活活性。上述结果表明OsWRKY7具有明显的转录激活因子特征,其很可能参与了水稻对白叶枯菌的防御反应以及对多种激素信号的转导过程。

关键词： OsWRKY7基因启动子表达特性亚细胞定位转录活性

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RSV和HiPV在灰飞虱中传播方式的比较与分析

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浙江农业学报 2015年第10期27卷 1768-1772页

作者：周燕茹李林颖李俊敏孙丽英陈剑平浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地农业部/浙江省植保生物技术重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021 南京农业大学植物保护学院江苏南京210095

水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)是由介体灰飞虱(Laodelphax striatellus)传播的重要水稻病毒,严重危害我国水稻生产。Himetobi P病毒(Hi PV)是广泛存在于灰飞虱体内的一类昆虫类微小核糖核酸病毒,灰飞虱感染Hi PV后无明显的致病... 详细信息

水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)是由介体灰飞虱(Laodelphax striatellus)传播的重要水稻病毒,严重危害我国水稻生产。Himetobi P病毒(Hi PV)是广泛存在于灰飞虱体内的一类昆虫类微小核糖核酸病毒,灰飞虱感染Hi PV后无明显的致病表现。对Hi PV不同分离物及Cripavirus属多个病毒的序列同源性分析表明,Hi PV不同分离物之间相似度非常高,但和同属其他病毒的核苷酸及氨基酸序列均存在明显差异。对两种病毒在水稻中的复制情况进行检测,结果表明,RSV可在水稻中复制,Hi PV可在水稻中稳定存在一段时间(7 d),但无法在水稻中复制。进一步的试验表明,灰飞虱的分泌物中存在Hi PV,但无法检测到RSV。

关键词：灰飞虱水稻条纹病毒 Himetobi P病毒传播

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与RBSDV外壳蛋白P10互作植物因子的筛选与验证

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核农学报 2014年第5期28卷 784-789页

作者：孙宗涛魏佳李俊敏王旭沈国新陈剑平浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所/浙江省植物有害生物防控国家重点实验室培育基地/农业部植物保护与生物技术重点开放实验室/浙江省植物病毒重点开放实验室浙江省农业科学院蚕桑所

目前,我们对水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)编码的外壳蛋白P10在该病毒侵染过程中的作用了解甚少。本研究利用酵母双杂交技术,以P10为诱饵钓取拟南芥cDNA文库,得到与P10互作的真核翻译起始因子eIF5A-2。通过分别构建猎物和诱饵载体共转化酵母... 详细信息

目前,我们对水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)编码的外壳蛋白P10在该病毒侵染过程中的作用了解甚少。本研究利用酵母双杂交技术,以P10为诱饵钓取拟南芥cDNA文库,得到与P10互作的真核翻译起始因子eIF5A-2。通过分别构建猎物和诱饵载体共转化酵母,结果表明P10与AteIF5A-2在酵母中互作。利用农杆菌转染烟草表皮细胞瞬时表达体系发现,P10和AteIF5A-2形成融合荧光蛋白后,荧光主要形成囊泡状的结构。通过荧光共定位实验分析发现,P10与AteIF5A-2能够共定位。本研究结果进一步揭示了水稻黑条矮缩病毒的致病机制。

关键词：水稻黑条矮缩病毒外壳蛋白 P10 真核翻译起始因子5A

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