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华东地区第15届实验动物科学学术交流会

作者：方杰张欢欢王志远余陈欢应华忠浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性评价重点实验室杭州 310013

目的探讨在四氯化碳致小鼠肝纤维化进程中长链非编码RNA(lncRNA)的表达变化及其与肝组织病理学损害的关系。方法小鼠腹腔注射20%四氯化碳100μl,每周两次,连续6周。采用HE、MASSON染色、ELISA法和荧光定量PCR检测法,分别对造模0、2、4... 详细信息

目的探讨在四氯化碳致小鼠肝纤维化进程中长链非编码RNA(lncRNA)的表达变化及其与肝组织病理学损害的关系。方法小鼠腹腔注射20%四氯化碳100μl,每周两次,连续6周。采用HE、MASSON染色、ELISA法和荧光定量PCR检测法,分别对造模0、2、4、6周小鼠的肝组织病理、血清肝纤生化指标及肝脏特异性lncRNAs定量分析。

关键词：肝纤维化 lncRNAs H19 HULC MEG3

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长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤后半胱氨酰白三烯受体表达变化的研究

长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤后半胱氨酰白三烯受体表达变化的研究

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华东地区第15届实验动物科学学术交流会

作者：石巧娟王浩褚晓峰卢领群楼琦郭红刚周文伟应华忠浙江省医学科学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州 310013

目的研究半胱氨酰白三烯受体(Cysteinyl Leukotriene receptor,CysLTR)在长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤后表达情况,并初步探讨半胱氨酰白三烯受体拮抗剂在脑缺血损伤中的意义。方法采用结扎双侧颈总动脉结扎再灌注法制作长爪沙鼠全脑缺... 详细信息

目的研究半胱氨酰白三烯受体(Cysteinyl Leukotriene receptor,CysLTR)在长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤后表达情况,并初步探讨半胱氨酰白三烯受体拮抗剂在脑缺血损伤中的意义。方法采用结扎双侧颈总动脉结扎再灌注法制作长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型。全脑缺血10min后,分别再灌注3、6、12、24h、3、7、14d,使用Western blotting的方法检测各个时间点CysLT1R、CysLT2R的蛋白表达情况,使用免疫组化的方法检测再灌注24 h、14 d这两个时间点CysLT1R、CysLT2R在皮层及海马中表达情况。

关键词：长爪沙鼠全脑缺血半胱氨酰白三烯受体表达

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石荠苧二酮哌嗪类化合物通过抑制病毒复制和血小板聚集改善流感病毒诱导的肺部炎症

石荠苧二酮哌嗪类化合物通过抑制病毒复制和血小板聚集改善流感病...

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第十五届世界中医药大会暨“一带一路”中医药文化周

作者：俞文英张欢欢杨扬吴方余陈欢浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江省医学科学院310013中国杭州

与民族药相关性：石荠苧具有抗病毒、解热、抗凝功效，被广泛用于治疗咳嗽、哮喘、咽炎、感冒和流感等呼吸道疾病。目的：甲型流感严重感染的基本病理特征是肺部过度炎症，而血小板聚集及继发的微血管血栓会加速流感病毒诱导的肺损伤。... 详细信息

与民族药相关性：石荠苧具有抗病毒、解热、抗凝功效，被广泛用于治疗咳嗽、哮喘、咽炎、感冒和流感等呼吸道疾病。目的：甲型流感严重感染的基本病理特征是肺部过度炎症，而血小板聚集及继发的微血管血栓会加速流感病毒诱导的肺损伤。因此，抑制血小板凝聚可能成为流感病毒治疗的潜在靶点。以往的研究主要集中在石荠苧中的黄酮类化合物及其抗炎活性，而石荠苧中的抗凝化合物及潜在分子机制尚不清楚。本研究旨在从石荠苧中分离和表征二酮哌嗪类化合物(DKPs)，并探讨其抗凝机制。方法：采用乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱色谱法等分离得到6 个化合物;并通过光谱、质谱等方法对化合物的结构进行鉴定。通过体内外实验评价6 个DKPs 的抗病毒活性;此外，借助5'-二磷酸腺苷(ADP)诱导的急性肺栓塞和流感病毒诱导的肺损伤小鼠体内模型考察DKPs 的抗凝效果，并进一步通过体外实验考察DKPs 对血小板活化因子、花生四烯酸以及对ADP 诱导的血小板凝聚的抑制作用;采用酶联免疫法测定血清中血栓烷素B2 和6-酮-前列腺素F1α的含量;采用免疫印迹法测定CD41 介导的PI3K/AKT 通路中关键蛋白的表达。结果：首次从石荠苧中分离得到6 个二酮哌嗪类化合物，并鉴定为：(1)环-(酪氨酸-亮氨酸)、(2)环-(苯丙氨酸-苯丙氨酸)、(3)环-(苯丙氨酸-酪氨酸)、(4)环-(丙氨酸-异亮氨酸)、(5)环-(丙氨酸-亮氨酸)、(6)橙黄胡椒酰胺酯。这6 个化合物中，化合物4 和6 对MDCK 细胞具有较低的细胞毒性，并能显著抑制流感病毒(H1N1 和H3N2)诱导的细胞病变作用。此外，化合物4 和6 还能通过抑制CD41/PI3K/AKT 信号通路显著改善流感病毒诱导的血小板活化和肺部炎症。结论：体内外研究结果表明，从石荠苧中分离得到的化合物4 和6 具有显著的抗病毒和抗凝作用，可作为流感病毒治疗的潜在药物。

关键词：石荠苧流感病毒抗病毒和抗凝作用

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水杨梅根黄酮类成分抑制血小板聚集和血栓形成的作用及机制研究

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中国临床药理学与治疗学 2018年第6期23卷 640-645页

作者：方晴霞邹小舟俞文英方杰莫丽余陈欢浙江省人民医院药学部杭州医学院附属人民医院浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室

目的:研究水杨梅根黄酮类(adina rubella flavonoids,ARF)成分对血小板活化聚集及血栓形成的影响并对其机制进行初步研究。方法:利用不同的聚合剂5'-二磷酸腺苷(adenosine 5'-diphosphate,ADP)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA... 详细信息

目的:研究水杨梅根黄酮类(adina rubella flavonoids,ARF)成分对血小板活化聚集及血栓形成的影响并对其机制进行初步研究。方法:利用不同的聚合剂5'-二磷酸腺苷(adenosine 5'-diphosphate,ADP)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA)、血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)诱导体外血小板聚集;分别建立ADP诱导的大鼠急性肺栓塞模型、小鼠尾部出血模型、大鼠动静脉旁路血栓模型,检测ARF对血小板聚集及血栓形成的抑制作用。Western blot检测CD41的蛋白表达及PI3K/Akt信号通路的活化情况。结果:ARF低、中、高剂量组能够显著提高急性肺栓塞大鼠存活率、延长小鼠尾部凝血时间、抑制动静脉旁路血栓模型大鼠血栓形成。ARF还能显著抑制ADP所诱导的血小板聚集及血小板标记蛋白CD41的上调及PI3K/Akt信号通路的活化。结论:ARF能够显著抑制血小板聚集及血栓形成,其机制可能与CD41/PI3K/Akt信号通路调控相关。

关键词：水杨梅根黄酮类血小板聚集血栓信号通路

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柠檬苦素对脂多糖致小鼠急性肺损伤的作用

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中国临床药理学与治疗学 2018年第1期23卷 8-12,28页

作者：王棣张欢欢方杰钟宇森余陈欢杭州市江干区人民医院内科浙江杭州310016 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的:探讨柠檬苦素(LM)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的影响。方法:40只ICR雄性小鼠,按体质量随机分为4组:正常组、模型组、地塞米松(Dex)给药组和LM给药组,每组10只。Dex和LM均在滴注LPS前2 h分别小鼠腹腔注射10 mg/kg给药,之后除正... 详细信息

目的:探讨柠檬苦素(LM)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的影响。方法:40只ICR雄性小鼠,按体质量随机分为4组:正常组、模型组、地塞米松(Dex)给药组和LM给药组,每组10只。Dex和LM均在滴注LPS前2 h分别小鼠腹腔注射10 mg/kg给药,之后除正常组小鼠只给予腹腔注射等体积的生理盐水外,其余小鼠气管滴注致死量的5 mg/kg LPS。LPS注射6 h后,处死小鼠,解剖小鼠取肺脏,计算小鼠肺指数、湿干比值。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态。采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量;比色法检测血清髓过氧化物酶(MPO)含量。实时定量PCR检测TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA表达情况。Western blot检测TLR4和NF-κB p65蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺指数和湿干比值明显升高,肺组织间质炎性细胞浸润,伴明显的肺泡充血、水肿,血清MPO、TNF-α、IL-1β和IL-6含量及其肺组织mRNA表达量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,LM给药组小鼠肺指数和湿干比值明显降低,肺组织病理状态明显改善,血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平及肺组织TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TLR4和NF-κB p65蛋白表达量均明显降低(P<0.01)。结论:LM可通过调控TLR4/NF-κB通路抑制炎症因子的表达从而改善LPS诱导的小鼠肺组织损伤。

关键词：柠檬苦素抗炎作用脂多糖急性肺损伤

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半胱氨酰白三烯受体拮抗剂通过下调自噬减轻长爪沙鼠的全脑缺血再灌注损伤

半胱氨酰白三烯受体拮抗剂通过下调自噬减轻长爪沙鼠的全脑缺血再...

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华东地区第15届实验动物科学学术交流会

作者：石巧娟郭红刚楼琦卢领群潘若真应华忠周文伟褚晓峰浙江省医学科学院实验动物中心浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州 310013 浙江省实验动物公共服务平台杭州 310031

目的探讨半胱氨酰白三烯受体拮抗剂(普鲁司特、HAMI3379)对长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法采用结扎双侧颈总动脉缺血10 min再灌注24h,建立长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、普鲁... 详细信息

目的探讨半胱氨酰白三烯受体拮抗剂(普鲁司特、HAMI3379)对长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法采用结扎双侧颈总动脉缺血10 min再灌注24h,建立长爪沙鼠全脑缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、模型组、普鲁司特、HAMI 3379组,每组20只,术前3d开始腹腔注射给药,1次/日,术前30 min给药1次。

关键词：长爪沙鼠全脑缺血普鲁司特 HAMI 3379 自噬

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扶正康复合剂与顺铂联用抑制移植性肺癌的实验研究

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中华中医药学刊 2017年第5期35卷 1219-1224,I0008-I0011页

作者：韩淑萍余道军潘莉余陈欢胡毅翔杭州市第一人民医院浙江杭州310006 浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移... 详细信息

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移植性裸鼠肺癌模型,接种15 d后开始给药,连续给药7 d,称取体重及瘤重,计算抑瘤率,ELISA法检测裸鼠血清BUN、Cr、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6的表达水平,免疫组化法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin的表达情况,q-PCR法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin mRNA的表达水平。结果:扶正康复合剂高剂量组、顺铂组、顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组与模型对照组相比:荷瘤裸鼠瘤质量显著减轻(P<0.05),血清TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-2水平显著升高(P<0.05),血清IL-6水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达量显著减少,Bax表达量增加。其中顺铂+扶正康复合剂高剂量给药组裸鼠抑瘤率最高,两者具有协同作用。与顺铂组相比:顺铂+扶正康复合剂高剂量组裸鼠血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),顺铂+扶正康复合剂中、高剂量组裸鼠血清TNF-α、INF-γ水平显著升高(P<0.01);顺铂+扶正康复合剂高剂量组Bcl-2、Survivin、VEGF表达量降低,Bax表达量增加。结论:扶正康复合剂与顺铂联用能够降低顺铂的肾损伤作用,调节机体的Th1/Th2细胞免疫平衡,通过抑制Bcl-2、Survivin、VEGF并促进Bax的表达,进而促进肺癌细胞的凋亡。

关键词：扶正康复合剂肺癌凋亡免疫调节 NOD/SCID裸鼠

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苍术酮对急性肺损伤小鼠保护作用的研究

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现代中西医结合杂志 2018年第24期27卷 2623-2626页

作者：陈天阳刘廷亮侯天禄平键胡毅翔成扬陈建杰上海市浦东新区传染病医院上海201299 上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心上海200127 浙江省医学科学院/浙江省实验动物与安全性研究重点实验室浙江杭州310013

目的观察苍术酮对急性肺损伤小鼠的保护作用。方法将144只雄性SPF级ICR小鼠分为正常组、模型组、利巴韦林组及苍术酮高、中、低剂量组,除正常组外,其余组均通过呼吸道感染甲型流感病毒诱导小鼠急性肺损伤模型。在造模2 h后,利巴韦林组... 详细信息

目的观察苍术酮对急性肺损伤小鼠的保护作用。方法将144只雄性SPF级ICR小鼠分为正常组、模型组、利巴韦林组及苍术酮高、中、低剂量组,除正常组外,其余组均通过呼吸道感染甲型流感病毒诱导小鼠急性肺损伤模型。在造模2 h后,利巴韦林组给予利巴韦林50 mg/kg灌胃,苍术酮低、中、高剂量组分别给予10 mg/kg、20 mg/kg、40mg/kg灌胃,正常组和模型组灌胃等量生理盐水,每天1次,连续5 d。5 d后处死小鼠取出肺组织,计算肺指数,HE染色法观察肺组织病理变化。另取雄性SPF级ICR小鼠120只,按上述实验方法处理,灌胃5 d后继续观察,第15天统计各组小鼠存活情况及存活时间。结果模型组的肺指数明显高于正常组(P<0.05),利巴韦林组和苍术酮各组的肺指数均明显低于模型组(P均<0.05),且苍术酮高剂量组明显低于苍术酮低剂量组(P<0.05);HE染色显示,与模型组比较,各给药组肺组织肺泡明显,细胞相对较完整,炎性渗出减少,肺细胞间隔增厚较轻,细支气管上皮柱状细胞脱落减少。利巴韦林组和苍术酮各组小鼠存活时间显著长于模型组,生存率明显高于模型组,且苍术酮高剂量组存活时间显著长于苍术酮低剂量组,生存率明显高于苍术酮低剂量组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论苍术酮对甲型流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤具有保护作用,可延长存活时间,提高生存率,且呈剂量依赖性,但其作用机制仍需进一步研究。

关键词：苍术酮急性肺损伤肺指数生存率

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长爪沙鼠体外受精与早期胚胎体外培养体系的初步建立

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中国实验动物学报 2017年第6期25卷 624-631页

作者：郭红刚李莉周生来卢领群李坤杜江涛石巧娟金秀清李长龙萨晓婴应华忠褚晓峰浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室杭州310013 杭州市疾病预防控制中心杭州310021 中国医科大学实验动物部沈阳110001 首都医科大学基础医学院北京100069

目的探讨自配的获能液和受精液用于长爪沙鼠体外受精的可行性,为长爪沙鼠的胚胎保种提供参考。方法用自配的获能液和受精液对长爪沙鼠进行体外受精,并用改良后的KSOM培养液对长爪沙鼠的2细胞胚胎进行体外培养试验。结果长爪沙鼠体外受... 详细信息

目的探讨自配的获能液和受精液用于长爪沙鼠体外受精的可行性,为长爪沙鼠的胚胎保种提供参考。方法用自配的获能液和受精液对长爪沙鼠进行体外受精,并用改良后的KSOM培养液对长爪沙鼠的2细胞胚胎进行体外培养试验。结果长爪沙鼠体外受精率在60%以上,沙鼠2细胞胚胎能够在体外进一步发育。结论初步建立了长爪沙鼠体外受精和胚胎发育体系,但需要进一步优化。

关键词：长爪沙鼠体外受精体外培养

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ICH S5(R3)新技术要求的挑战

ICH S5(R3)新技术要求的挑战

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中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第二次（2017年）学术交流大会

作者：张立将浙江省医学科学院安全性评价研究中心(国家浙江新药安全评价研究重点实验室)毒理部浙江省医学科学院浙江省人用物品安全性评价技术研究重点实验室

ICH S5关于人用药物生殖毒性的指导原则已有20多年(最早于1994年发布,1995年增加了"雄性生育力毒性"附录,2005年整合重新命名为ICH S5(R2))。从2015年第2季度开始,ICH启动了对现行生殖毒性指导原则ICH S5(R2)的修订改版工作。... 详细信息

ICH S5关于人用药物生殖毒性的指导原则已有20多年(最早于1994年发布,1995年增加了"雄性生育力毒性"附录,2005年整合重新命名为ICH S5(R2))。从2015年第2季度开始,ICH启动了对现行生殖毒性指导原则ICH S5(R2)的修订改版工作。ICH专家组对生殖毒性试验一系列问题进行了讨论修订,并起草了S5(R3):ICH Harmonised Guideline:Detection Of Toxicity To Reproduction For Human Pharmaceuticals(人用药物生殖毒性检测指导原则)。该指导原则于2017年7月5日达到ICH进程的第二阶段。其引入了许多新的评价理念及技术要求,将对药物生殖毒性研究产生重大的影响。为了让国内更多的专家、学者和相关人员及时了解该指导原则,本文就其新技术方法要求以及其带来的新挑战作以下汇报交流。一、新内容之归纳1、明确了适用范围;2、整体试验策略的新思路;3、替代试验方法的使用及其方法学验证,以及其他试验系统的使用;4、兼顾与其他指导原则(ICHM3(R2)、ICH S6(R1)和ICH S9)的一致性;5、基于暴露的剂量选择及风险评估;6、疫苗的特殊考虑;7、体内试验的方法设计上的更新,如传统三段式生殖毒性试验方法的细化与修改,并增加了初步EFD(pEFD)、增强的pEFD、增强的PPND(ePPND)等试验方法;8、组合式试验设计的新思路,如重复给药毒性试验与生育力试验组合设计;9、强调人体风险评估的理念;10、可用于生殖发育毒性评价的动物种属优劣势详细比较……二、新挑战之思考1、申请者、研究者的挑战;2、审评人员/机构的挑战。

关键词：生殖毒性试验 ICH S5

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