检索结果-内蒙古大学图书馆

人类免疫缺陷病毒HIV-1（human immunodeficiency virus,HIV）是艾滋病（AIDS）的主要病原之一。Gag基因编码HIV病毒的核心蛋白,Gag蛋白有自我装配功能,并能激发体液免疫和细胞免疫。本实验将Gag基因克隆到家蚕杆状病毒中,得到重组家蚕杆状病毒,命名为BmNPV-Gag,并用该重组病毒感染家蚕BmN细胞和5龄幼虫。SDS-PAGE、Western blotting检测显示在与Gag蛋白大小相符的55kD处,重组病毒感染的细胞和家蚕五龄幼虫血淋巴均有特异性条带出现,证明Gag蛋白在家蚕中成功表达。我们用ELISA法测定目的蛋白的表达量以及蛋白表达量与感染时间（感染后2-7天）的关系。检测结果表明,家蚕BmN细胞中的Gag蛋白含量在感染后的第4天达到最大值6.995μg/1*10～6个细胞。然而在第5天后,出现下降趋势。五龄幼虫血淋巴中的Gag蛋白含量在感染后的第7天达到最高,0.7901μg/mL。Gag基因成功在家蚕杆状病毒中的成功表达为艾滋病基因工程疫苗的研究提供了一个新的可用材料。

关键词： Gag蛋白家蚕反应器 HIV

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马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

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科技通报 2009年第3期25卷 300-304页

作者：陈新江毛洁孟庆来张晓燕张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒与免疫研究室北京100050

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋... 详细信息

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1∶13,000。

关键词： gp90基因原核表达纯化 EIAV 诊断

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二步超离心法分离纯化人血浆Apo B100及兔抗人Apo B100抗血清制备

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2012年第1期29卷 115-118页

作者：张海花王婕高慧付彩云童富淡浙江理工大学浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江理工大学生命科学学院浙江省畜牧技术服务中心杭州310021

建立一种从人血浆中分离纯化Apo B100的方法,并制备兔抗人Apo B100抗血清。将血浆用溴化钾调成1.019g/mL的密度液进行差分超速离心,将分离产物在溴化钾不连续密度梯度液(1.006～1.210g/mL)中进行等密度超速离心。用G-100葡聚糖凝胶柱纯... 详细信息

建立一种从人血浆中分离纯化Apo B100的方法,并制备兔抗人Apo B100抗血清。将血浆用溴化钾调成1.019g/mL的密度液进行差分超速离心,将分离产物在溴化钾不连续密度梯度液(1.006～1.210g/mL)中进行等密度超速离心。用G-100葡聚糖凝胶柱纯化Apo B100,以ELISA双抗体夹心法检测浓度,真空冷冻干燥。取冻干粉与弗氏佐剂混合后免疫新西兰白兔,制备兔抗人Apo B100抗血清,利用双向免疫扩散检测抗原纯度与抗血清效价。结果是一步超离法分离的Apo B100最高浓度为0.91μg/mL;二步超离法分离的Apo B100最高浓度为1.40μg/mL,对应的抗血清效价为1∶64。结果表明二步超离心法提高了人血浆Apo B100的分离效果。

关键词： Apo B100 超速离心 ELISA 双向免疫扩散

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一种葡聚糖活性检测的新方法

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2013年第5期30卷 738-741页

作者：张晓菲严珍珍谢辛慈吴佳宋如鋆舒建洪吕正兵浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所杭州310018 浙江理工大学浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

大多具有分支的β-(1-3)-D-葡聚糖具有免疫调节及抗肿瘤活性。文章利用人单核白血病THP-1细胞株建立细胞水平上葡聚糖生物活性的检测方法,实现高通量筛选活性多糖。THP-1细胞在不同浓度的葡聚糖刺激48h后离心收集上清,ELISA法检测其释... 详细信息

大多具有分支的β-(1-3)-D-葡聚糖具有免疫调节及抗肿瘤活性。文章利用人单核白血病THP-1细胞株建立细胞水平上葡聚糖生物活性的检测方法,实现高通量筛选活性多糖。THP-1细胞在不同浓度的葡聚糖刺激48h后离心收集上清,ELISA法检测其释放细胞因子浓度,以筛选有效的评价指标。结果显示:THP-1细胞在不同葡聚糖刺激下,细胞培养液中IFN-α含量变化明显。IFN-α可作为在细胞水平上评价葡聚糖活性的标准检测指标。该方法既克服了动物实验工作量大、成本高,又克服了原代细胞不稳定等因素,为高通量筛选活性多糖提供了新途径。

关键词： THP-1 葡聚糖活性检测高通量筛选

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积雪草苷通过调节钙信号稳态缓解肝纤维化

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中国细胞生物学学报 2024年第6期46卷 1143-1158页

作者：王磊杰林啟浩林佳杰王佳雪庄冬瑞金园庭闫志斌中国计量大学生命科学学院杭州310018 浙江理工大学生命科学与医药学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化和肝细胞癌进展的重要过程。然而,目前尚未有临床批准的特效药物用于治疗肝纤维化。该研究旨在探究积雪草苷的抗肝纤维化作用,并阐明其作用机制。活化的肝星状细胞在肝纤维化的发生和发展过程中起着关键作用... 详细信息

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化和肝细胞癌进展的重要过程。然而,目前尚未有临床批准的特效药物用于治疗肝纤维化。该研究旨在探究积雪草苷的抗肝纤维化作用,并阐明其作用机制。活化的肝星状细胞在肝纤维化的发生和发展过程中起着关键作用。在体外实验中,积雪草苷可显著抑制人肝星状细胞系LX-2的活化、增殖和迁移;之后对积雪草苷处理前后的肝星状细胞进行转录组测序揭示其作用机制,结果提示积雪草苷的抗纤维化作用依赖于钙信号通路;进一步的实验证实积雪草苷诱导胞质钙下调同时促进线粒体钙超载。此外,积雪草苷还可促进细胞凋亡、抑制炎症和降低活性氧水平。最后,在四氯化碳诱导的肝纤维化模型中,积雪草苷可显著缓解肝胶原沉积和钙通路异常,并抑制肝纤维化的发展。综上所述,积雪草苷通过介导钙信号通路改善肝纤维化进程,该研究为临床治疗肝纤维化疾病提供了有前景的候选化合物。

关键词：肝纤维化积雪草苷钙信号通路线粒体钙超载

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家蚕表达人促红细胞生成素口服急性毒性和初步药效学研究

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2014年第6期31卷 728-733页

作者：李杰谭淑敏王小飞舒特俊于威张耀洲陈剑清浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江理工大学浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 天津国际生物医药联合研究院天津300457 天津大学药物科学与技术学院天津300457

为了研究家蚕表达的重组人促红细胞生成素(BmrhEPO)口服治疗肾性贫血的疗效并评价安全性,进行了小鼠口服BmrhEPO急性毒性实验,结果显示其对小鼠基本无毒或毒性极低,小鼠口服BmrhEPO最大耐受剂量大于147 882IU/kg。肾性贫血小鼠以剂量为6... 详细信息

为了研究家蚕表达的重组人促红细胞生成素(BmrhEPO)口服治疗肾性贫血的疗效并评价安全性,进行了小鼠口服BmrhEPO急性毒性实验,结果显示其对小鼠基本无毒或毒性极低,小鼠口服BmrhEPO最大耐受剂量大于147 882IU/kg。肾性贫血小鼠以剂量为62 865IU/kg和20 955IU/kg的两个剂量组连续口服BmrhEPO一周,以小鼠血液网织红细胞数及百分率为药效指标,结果显示口服有药效,并且药效与剂量呈正相关。本实验为开发重组人促红细胞生成素口服药物提供了理论指导和实验基础。

关键词：家蚕 EPO 口服急性毒性肾性贫血

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CFP10-ESAT-6-MPB64在杆状病毒系统中的表达纯化及免疫原性鉴定

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中国生物工程杂志 2014年第6期34卷 23-30页

作者：徐丹刘敏孔菊李校堃姜潮温州医科大学浙江省生物技术与制药工程重点实验室温州325035 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心长春130118 济南康和医药科技有限公司济南250101 巨野县人民医院菏泽274900

目的：在杆状病毒昆虫细胞表达系统（ baculovirus expression vector system,BEVS）中表达结核分枝杆菌蛋白 CFP10-ESAT-6-MPB64,并鉴定其免疫原性。方法：目的基因CFP10-ESAT-6-MPB64连接到pFastBac转移载体并转化DH10Bac感受态,通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-CFP10-ESAT-6-MPB64穿梭载体,脂质体包被后转染Spodoptera frugiperda（Sf9）细胞收获病毒,病毒转染细胞后收集上清通过Co亲和层析纯化得到目的蛋白。纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠并检测血清中特异性抗体滴度及PPD抗体,ELISA检测CFP10-ESAT-6-MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度,MTT法检测目的蛋白对免疫后小鼠脾脏细胞的增殖作用。结果：CFP10-ESAT-6-MPB64在昆虫细胞中成功表达,纯化后蛋白纯度达90%以上,蛋白产量为42mg/L,纯化蛋白能有效刺激Balb/c小鼠产生抗体,提高小鼠脾脏细胞培养基中IFN-γ的含量,目的蛋白在1-50g/ml之间对脾脏细胞有明显的促增殖作用。

关键词： BEVS Sf9细胞结核分枝杆菌

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幼年大鼠和老年大鼠肠道菌群结构及多样性分析

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2021年第1期45卷 76-83页

作者：孙亦阳顾超广华小庆王凯旋盛清聂作明王丹浙江理工大学生命科学与医药学院杭州310018 浙江理工大学浙江省家蚕生物反应器与生物医药重点实验室杭州310018 上海市静安区闸北中心医院上海200040

为研究幼年大鼠和老年大鼠肠道菌群的结构及多样性,对7只幼年大鼠(1.5月龄)和5只老年大鼠(24月龄)肠道菌群的构成进行了比较,收集相同环境下饲养的幼年组和老年组大鼠的粪便,对其进行16S核糖体RNA基因V3+V4区的测序以分析肠道菌群的构... 详细信息

为研究幼年大鼠和老年大鼠肠道菌群的结构及多样性,对7只幼年大鼠(1.5月龄)和5只老年大鼠(24月龄)肠道菌群的构成进行了比较,收集相同环境下饲养的幼年组和老年组大鼠的粪便,对其进行16S核糖体RNA基因V3+V4区的测序以分析肠道菌群的构成。结果表明:幼年组大鼠个体间肠道菌群结构差异较大,而老年组大鼠相对较集中,两组大鼠肠道菌群在门级水平上相对丰度相似;幼年组大鼠乳杆菌科下的微生物所占丰度高于老年组大鼠(p<0.05),而梭菌目瘤胃菌科下微生物丰度低于老年组大鼠(p<0.05);老年组大鼠的肠道生物多样性高于幼年组大鼠,老年组大鼠的肠道菌群多样性较高,菌群种类丰富,但其中有害菌比例显著升高。该结果填补了不同年龄大鼠肠道菌群结构研究的空白,为改善实验用大鼠的健康状况以延长其寿命提供一定的理论基础。

关键词：幼年大鼠老年大鼠肠道菌群结构多样性分析

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