检索结果-内蒙古大学图书馆

蚕业科学 2013年第3期39卷 514-521页

作者：费伟强陈琴陈倩梅文枫边腾飞吕正兵于威陈健张耀洲吴祥甫浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江中烟工业有限责任公司杭州310009

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)表达载体系统可以利用线性化技术或通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒。为了解决采用这些方法构建重组病毒需要多步克隆和筛选,无法满足实验室水平快速和高通量表达目的蛋白质需求的问题,建立了一种快速便捷的... 详细信息

家蚕核型多角体病毒(BmNPV)表达载体系统可以利用线性化技术或通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒。为了解决采用这些方法构建重组病毒需要多步克隆和筛选,无法满足实验室水平快速和高通量表达目的蛋白质需求的问题,建立了一种快速便捷的重组病毒构建方法。首先以BmNPV基因组为基础构建家蚕杆状病毒穿梭载体BmBacmid,进而利用Red重组技术敲除病毒复制必需基因orf1629的部分序列,构建了一种复制缺陷型BmNPV穿梭载体RD-BmBacmid。利用RD-BmBac-mid单独转染或者与pBacPAK8-AcGFP共转染BmN细胞,证实了该载体的复制缺陷性,即需经同源重组修复orf1629基因后方可产生重组病毒。利用复制缺陷型BmNPV载体正筛选可以快速构建重组病毒表达目的蛋白质。

关键词：家蚕杆状病毒穿梭载体 Red重组复制缺陷型转染正筛选

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

利用家蚕杆状病毒表达系统表达葡萄白藜芦醇芪合酶基因

引用

药物生物技术 2014年第2期21卷 107-110页

作者：潘晶晶潘华晔严珍珍叶甫云张耀洲吕正兵浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018 上海科爱生物技术有限公司上海200233

通过提取葡萄幼叶总RNA,用RT-PCR的方法获得白藜芦醇芪合酶基因,并将其成功克隆到pFastBac HTA中,获得重组pFastBac HTA-STS载体,转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,筛选获得重组Bacmid DNA后转染家蚕BmN细胞,进一步筛选获得重组杆状病毒,... 详细信息

通过提取葡萄幼叶总RNA,用RT-PCR的方法获得白藜芦醇芪合酶基因,并将其成功克隆到pFastBac HTA中,获得重组pFastBac HTA-STS载体,转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,筛选获得重组Bacmid DNA后转染家蚕BmN细胞,进一步筛选获得重组杆状病毒,重组病毒接种家蚕蛹,工程蚕蛹匀浆后经初步纯化收获粗酶液,利用粗酶液对葡萄提取液进行转化,体外生物合成白藜芦醇,提取液中的白藜芦醇含量显示出明显的上升。该研究为体外生物合成白藜芦醇提供了新途径。

关键词：白藜芦醇家蚕杆状病毒表达系统体外生物合成

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Bm59基因缺失对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制、转录及组装的影响

引用

蚕业科学 2016年第2期42卷 266-273页

作者：蒋磊田星巩成见于威舒建洪吴银丽童富淡浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 宁海县动物卫生监督所浙江宁海315600

Bm59是家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)的核心基因之一。利用λRed重组技术和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒wt Bacmid-polh-egfp、缺失型病毒Bm59ko-Bacmid-polh-egfp以及补回型病毒Bm59re-Bacmidpolh-egfp,并分别转染家蚕卵巢培养细胞Bm N,研究Bm59基因在病毒侵染、增殖和组装中的功能。对病毒滴度的检测结果表明3种类型病毒都能产生有活力的子代病毒并使细胞感染发病,但Bm59ko-Bacmid-polh-egfp在各个时相的滴度值均显著低于其他2种类型病毒(P<0.05)。电子显微镜下观察Bm59ko-Bacmid-polh-egfp转染的细胞中只有少量细长的杆状病毒粒子,而其他2种类型病毒转染细胞后则能产生大量具有囊膜包裹的成熟病毒粒子。qRT-PCR检测结果显示,Bm59缺失型病毒基因组DNA的复制能力显著降低(P<0.05),早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平显著低于野生型病毒(P<0.05)。综上所述,Bm59基因虽然是家蚕核型多角体病毒复制的非必需基因,但会显著影响病毒的增殖速度和病毒粒子的组装,对病毒各个时期的基因转录水平具有下调作用。

关键词：家蚕核型多角体病毒 Bm59基因 λRed重组系统 Bac-to-Bac系统 qRT-PCR

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

lef-12基因缺失对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制和基因转录的影响

引用

蚕业科学 2014年第3期40卷 468-474页

作者：袁佳解纯刚汪凤梅聂作明陈健吕正兵童富淡于威浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

晚期表达因子12(late expression factor 12,LEF-12)是昆虫核型多角体病毒(nucleopolyhedrovirus,NPV)基因组编码的转录调控因子之一。为了研究家蚕核型多角体病毒(BmNPV)LEF-12的生物学功能,通过Red重组技术敲除BmNPV的lef-12基因,构建lef-12缺失型病毒lef12-ko-Bacmid,再利用Bac-to-Bac系统将lef-12重新补回到病毒基因组中,获得补回型病毒lef12-re-Bacmid。将野生型病毒wtBacmid、lef12-ko-Bacmid和lef12-re-Bacmid分别转染BmN细胞,发现3种病毒均可在转染的细胞中产生具有感染活性的病毒粒子,但病毒滴度测定结果显示lef12-ko-Bacmid的病毒粒子产量比wtBacmid下降了3倍左右,而lef12-re-Bacmid的病毒粒子产量基本上恢复到了野生型病毒的水平,表明lef-12的缺失会影响病毒在宿主细胞中的增殖。进一步研究lef-12敲除对病毒基因组复制和基因转录的影响,结果表明当lef-12缺失后,BmNPV DNA复制没有受到明显影响,说明lef-12不是病毒复制的必需基因;但lef-12缺失后,病毒晚期基因vp39、极晚期基因p10的转录水平均明显低于野生型和补回型病毒。透射电子显微镜观察结果也进一步证实lef-12缺失后,病毒仍能进行正常复制和装配,但与野生型病毒相比其增殖数量有所下降。上述研究结果提示:BmNPV lef-12不是病毒基因组复制的必需基因,但其缺失将导致宿主细胞的感病时间延迟,对病毒晚期和极晚期基因的转录也具有显著影响。

关键词：家蚕核型多角体病毒 z萨12基因 Red重组系统 Bac-to-Bac系统病毒复制基因转录

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕Bm595的表达、组织分布及亚细胞定位

引用

中国农业科学 2010年第3期43卷 648-654页

作者：王帅玉盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所

【目的】从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条新基因Bm595,分析Bm595在家蚕体内的表达和定位情况。【方法】利用生物信息学分析Bm595序列,并构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,以纯化的融合蛋白抗原,制备多克隆抗体。用荧光定量PCR和Weste... 详细信息

【目的】从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条新基因Bm595,分析Bm595在家蚕体内的表达和定位情况。【方法】利用生物信息学分析Bm595序列,并构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,以纯化的融合蛋白抗原,制备多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法分析Bm595基因在家蚕各组织中的分布。用免疫细胞化学的方法研究Bm595蛋白的定位情况。【结果】Bm595在五龄幼虫的转录水平最高,卵中最低。Bm595在家蚕五龄幼虫各组织中的转录水平由高到低依次为:睾丸、丝腺、肠、头、卵巢、脂肪体、表皮、气管。在表达水平方面,睾丸的表达量最高,其次是丝腺和头,脂肪体有较明显的表达。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学试验,Bm595主要分布于细胞核内。【结论】在mRNA、蛋白质表达和细胞水平对Bm595进行初步表达分析和定位分析,为进一步研究该蛋白在家蚕中的功能提供重要依据。

关键词： Bm595 组织分布亚细胞定位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

抗疲劳类食药物质研究进展

引用

药物生物技术 2023年第6期30卷 652-656页

作者：汪睿颀周志奎田琦单继雷黄丽思刘立丽鲍康德吕正兵浙江理工大学生命科学与医药学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310063 浙江国邦药业有限公司药物研究所浙江绍兴312369

由于现代社会生活节奏快、压力大等等原因造成的亚健康疲劳已成为威胁人类健康的重要因素之一。亚健康疲劳不仅影响人们的日常生活,还严重危害人类的身体健康,因此引起了国内外学者的广泛关注,抗疲劳药物开发也成为研究的重点。中医药... 详细信息

由于现代社会生活节奏快、压力大等等原因造成的亚健康疲劳已成为威胁人类健康的重要因素之一。亚健康疲劳不仅影响人们的日常生活,还严重危害人类的身体健康,因此引起了国内外学者的广泛关注,抗疲劳药物开发也成为研究的重点。中医药中关于“药食同源”的理论可以满足现代人对于增强体质、维持健康和提高防病抗病能力的需求,食药物质与西药相比,在更加安全、副作用小、依赖性低等方面具有突出的优势,可应用于具有抗疲劳药物及其制品的研究与开发。文章从具有抗疲劳作用的药食同源药材出发,并对其产品包括制剂及保健品与有效成分检验的研究状况进行综述,以期为抗疲劳食药物质的普通食品开发以及远期抗疲劳保健食品和药品的研发提供理论依据。

关键词：亚健康疲劳抗疲劳食药物质 “药食同源” 活性成分活性成分分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕具有CHCH结构域的蛋白家族基因BmCH的原核表达和亚细胞定位

引用

蚕业科学 2011年第2期37卷 238-245页

作者：舒建洪梁莉惠郑青亮牛伟涛张耀洲浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 邢台学院生化系河北邢台054001

含有CHCH保守结构域的蛋白在不同物种中行使不同的功能。从家蚕蛹cDNA文库筛选获得一条cDNA序列,经生物信息学分析发现其编码蛋白含有一个CHCH保守结构域,将该基因命名为BmCH(GenBank登录号:DQ443425.1)。该序列开放阅读框大小为435 bp... 详细信息

含有CHCH保守结构域的蛋白在不同物种中行使不同的功能。从家蚕蛹cDNA文库筛选获得一条cDNA序列,经生物信息学分析发现其编码蛋白含有一个CHCH保守结构域,将该基因命名为BmCH(GenBank登录号:DQ443425.1)。该序列开放阅读框大小为435 bp,编码144个氨基酸残基。将成功构建的重组质粒pET-28a(+)-BmCH转化到*** Rosetta(DE3)菌株,经IPTG诱导表达BmCH融合蛋白,用亲和层析进行纯化后,将融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过Westernblotting检测BmCH在家蚕4个发育时期和5龄幼虫组织中的表达情况与用荧光定量PCR检测BmCH在家蚕不同发育时期及5龄幼虫组织中的转录结果基本一致:该蛋白在卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,其中在5龄幼虫期的表达量最高;该蛋白在5龄幼虫的表皮、精巢、中肠、丝腺和卵巢中有明显表达,在血淋巴、马氏管、脂肪体中的表达量较少,但差异不大,而在气管和头部没有表达。利用抗体的免疫荧光标记对BmCH在家蚕BmN细胞中的定位进行研究,观察到该蛋白主要分布在细胞质中。初步推测BmCH可能是家蚕生长发育的必需蛋白,参与多种细胞生命活动的过程。

关键词：家蚕 CHCH保守结构域基因克隆荧光定量PCR Westernblotting分析细胞定位

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕核型多角体病毒Bm90基因缺失对病毒增殖和组装的影响

引用

蚕业科学 2016年第3期42卷 458-465页

作者：巩成见田星蒋磊于威舒建洪吴银丽童富淡浙江理工大学生命科学学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 宁海县动物卫生监督所浙江宁海315600

家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)基因组中的orf90基因(Bm90)是一个未知功能的保守基因。利用λRed重组系统和Bac-to-Bac系统构建野生型病毒Wt Bacmid-polh-egfp、Bm90基因缺失型病毒Bm90ko-polh-egfpBacmid及Bm90基因补回型病毒Bm90re-polh-egfp-Bacmid,并制备Bm90蛋白的多克隆抗体,研究Bm90基因在病毒感染周期中的表达以及对病毒增殖和组装的影响。将3种重组病毒分别转染Bm N细胞,Western blot检测显示Bm90蛋白在病毒转染Bm N细胞后72 h有表达;但用荧光显微镜观察Bm90基因缺失型病毒转染的Bm N细胞中没有出现绿色荧光,且检测其病毒滴度为0;用透射电子显微镜观察在Bm90基因缺失型病毒转染的Bm N细胞中没有子代病毒粒子出现。研究结果表明,Bm90基因缺失会抑制子代病毒粒子的组装和产生,使病毒失去侵染性,Bm90基因是病毒增殖及组装的必需基因。

关键词：家蚕核型多角体病毒 Bm90基因 λRed重组系统 Bac-to-Bac系统病毒增殖病毒组装

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

单域抗体的研究进展

引用

药物生物技术 2018年第6期25卷 556-560页

作者：洪梦佳任清榆金佳珂唐玲王师北刘立吕正兵浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室浙江杭州310018 萧山第三高级中学高二(17)班浙江杭州311209

抗体是实验研究和药物应用的重要工具。大多数抗体具有4条多肽链的对称结构,两条较长的重链和两条较短的轻链,两臂末端是相同的抗原结合部位。除了这些传统的抗体,羊驼、一些骆驼和鲨鱼体内会产生一种只含有重链的抗体,称为重链抗体。... 详细信息

抗体是实验研究和药物应用的重要工具。大多数抗体具有4条多肽链的对称结构,两条较长的重链和两条较短的轻链,两臂末端是相同的抗原结合部位。除了这些传统的抗体,羊驼、一些骆驼和鲨鱼体内会产生一种只含有重链的抗体,称为重链抗体。它们的抗原结合部位只由单一结构域构成。这类单域抗体具有分子小、可溶性好、热稳定性高和体内组织渗透性好等优点,引起了药物开发与免疫治疗应用等领域的广泛关注,具有很广阔的研究前景。文章主要概述了抗体药物的研究,单域抗体的特点及天然物种来源的单域抗体的研究概况。

关键词：抗体药物单域抗体 VHH IgNAR 条纹斑竹鲨

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

家蚕去乙酰化酶基因BmSIRT2的克隆、表达和初步功能分析

引用

蚕业科学 2023年第1期49卷 37-44页

作者：耿嘉盛韩花云刘悦祖国威陈燕梅尤征英蒋彩英盛清聂作明浙江理工大学生命科学与医药学院杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江经贸职业技术学院应用工程学院杭州310018

Sirtuin 2(SIRT2)是去乙酰化酶Sirtuin家族蛋白的一员,参与细胞的分化、自噬和氧化应激,与生物的衰老、糖代谢、癌症和神经退行性疾病有关。对家蚕SIRT2基因(BmSIRT2)进行克隆和原核表达,获得的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,获得效... 详细信息

Sirtuin 2(SIRT2)是去乙酰化酶Sirtuin家族蛋白的一员,参与细胞的分化、自噬和氧化应激,与生物的衰老、糖代谢、癌症和神经退行性疾病有关。对家蚕SIRT2基因(BmSIRT2)进行克隆和原核表达,获得的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,获得效价较高的兔多克隆抗体。对家蚕不同发育时期和5龄幼虫的各个组织进行qRT-PCR分析,发现在成虫期和5龄幼虫的性腺中BmSIRT2基因的转录水平较高。免疫荧光试验发现,BmSIRT2蛋白主要定位在BmN细胞的胞质中,少量定位在细胞核中,暗示BmSIRT2可能主要参与胞质蛋白的去乙酰化。通过构建BmSIRT2的真核瞬时表达载体并转染BmN细胞,发现细胞内丙酮酸含量会随着BmSIRT2浓度的上升而下降;而向细胞内添加SIRT2的特异性抑制剂AGK2后,丙酮酸含量会随着AGK2浓度的升高而升高,表明BmSIRT2胞内浓度和活性与丙酮酸含量甚至是糖代谢都有着密切的关系。研究结果为进一步探究BmSIRT2蛋白相关的去乙酰化对家蚕生长发育和代谢的影响打下基础。

关键词：家蚕去乙酰化酶SIRT2 多克隆抗体亚细胞定位丙酮酸

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：