检索结果-内蒙古大学图书馆

蚕业科学 2009年第4期35卷 746-753页

作者：周秋梅金勇丰张耀洲浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 浙江大学生命科学学院生物化学研究所杭州310058

已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基... 详细信息

已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基酸残基,蛋白含有BTB保守结构域和FLYWCH保守结构域,与黑腹果蝇、冈比亚按蚊、赤拟谷盗和埃及伊蚊的MOD多序列比对,其同源性不超过40%。表达、纯化带有His标签的家蚕MOD蛋白(BmMOD),并用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。实时荧光定量PCR显示BmMod基因mRNA转录水平在家蚕蛾期及5龄幼虫的卵巢最高,推测BmMod基因在家蚕生殖腺发育过程中产生一定作用。利用纯化的BmMOD蛋白多克隆抗体进行Western blotting分析也表明该蛋白在家蚕蛾期及5龄幼虫卵巢中的表达量最高,验证了BmMod在家蚕生殖腺发育中的功能。亚细胞定位结果显示BmMOD蛋白几乎完全定位于家蚕卵巢上皮细胞(BmN)的细胞核中。

关键词：家蚕 Mod(mdg4)基因序列分析原核表达表达特征亚细胞定位

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家蚕DnaJ5基因的克隆与表达谱分析

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蚕业科学 2009年第2期35卷 282-286页

作者：步翠玉宗志鹏李轶女张志芳张耀洲浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

DnaJ蛋白是一种调节蛋白。从构建的家蚕蛹cDNA文库中检索到一条编码DnaJ蛋白的EST,并克隆获得家蚕DnaJ5基因(Bm-DnaJ5,GenBank登录号为FJ592078)。该基因的开放阅读框长1 056 bp,编码351个氨基酸,分子质量为38.93 kD,等电点为9.25。利... 详细信息

DnaJ蛋白是一种调节蛋白。从构建的家蚕蛹cDNA文库中检索到一条编码DnaJ蛋白的EST,并克隆获得家蚕DnaJ5基因(Bm-DnaJ5,GenBank登录号为FJ592078)。该基因的开放阅读框长1 056 bp,编码351个氨基酸,分子质量为38.93 kD,等电点为9.25。利用实时定量PCR技术对Bm-DnaJ5基因在家蚕不同组织和发育时期的时空表达谱进行定量分析,结果显示:该基因在5龄幼虫时期的各组织中都有表达,在睾丸中的表达量最高,拷贝数达到1.16×108个/μg,其次在头部、中肠、前部丝腺和翅原基中的表达量也较高,在气管丛中的表达量最低,拷贝数仅为1.84×104个/μg;在蛹中期的几个组织中均有表达,其中在眼和睾丸中的表达量较高,拷贝数分别为8.79×107个/μg和1.78×107个/μg,而在卵巢中的表达量最低,拷贝数仅为1.94×105个/μg。

关键词：家蚕 DnaJ基因克隆表达谱实时荧光定量PCR

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家蚕一种富含半胱氨酸蛋白基因BmCRP的原核表达与定位研究

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蚕业科学 2009年第2期35卷 273-281页

作者：陈世慧张文平盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘丽丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,经生物信息学分析显示该cDNA序列全长1 011 bp,包括5′-UTR 200 bp和3-′UTR 136 bp,编码224个氨基酸,其编码蛋白质的N-端富含半胱氨酸,将该基因命名为BmCRP(基因登录号:DN985186.1)。该基因编码蛋... 详细信息

从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,经生物信息学分析显示该cDNA序列全长1 011 bp,包括5′-UTR 200 bp和3-′UTR 136 bp,编码224个氨基酸,其编码蛋白质的N-端富含半胱氨酸,将该基因命名为BmCRP(基因登录号:DN985186.1)。该基因编码蛋白主要有α螺旋、β-折叠、无规则卷曲3种二级结构,具有cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点等5种功能位点。构建重组表达载体pET-28 a(+)-BmCRP并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得融合蛋白,用纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体与BmCRP有较好的特异性。W estern b lotting检测结果:BmCRP蛋白在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,蛹期表达量最高;在5龄幼虫的表皮、头部、卵巢、睾丸、马氏管中均有表达。荧光定量RT-PCR检测结果:BmCRPmRNA在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾的整个生命周期中,其转录水平呈增加趋势;在5龄幼虫不同组织中的转录水平从高到低依次为表皮、头部、生殖腺、中肠、马氏管、气管、丝腺和脂肪体。细胞定位实验结果显示BmCRP蛋白在Bm5细胞的细胞核和细胞质中均存在,细胞核中的荧光信号比细胞质中的信号强。研究结果有助于进一步探明家蚕BmCRP蛋白的结构和功能。

关键词：家蚕富含半胱氨酸蛋白基因组结构细胞定位组织分布实时荧光定量PCR

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抗菌肽——癌症治疗的新兴方法（英文）

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中国细胞生物学学报 2019年第10期41卷 2026-2038页

作者：吕宇蝶邵罡蒙月明金园庭付彩云中国计量大学生命科学学院杭州310018 浙江理工大学生命科学与医药学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

抗菌肽是由生物体诱导产生的小分子多肽。大多数抗菌肽在体内发挥着抗微生物和免疫调节的作用。抗菌肽的抗菌机制主要是通过细胞膜穿孔和靶向细胞内细胞器的生理过程。抗菌肽具有促炎和抗炎、皮肤屏障和维持生物体内稳态等免疫调节功能... 详细信息

抗菌肽是由生物体诱导产生的小分子多肽。大多数抗菌肽在体内发挥着抗微生物和免疫调节的作用。抗菌肽的抗菌机制主要是通过细胞膜穿孔和靶向细胞内细胞器的生理过程。抗菌肽具有促炎和抗炎、皮肤屏障和维持生物体内稳态等免疫调节功能。近年来,抗菌肽在各种癌症发生发展中的作用研究也取得了很大进展。抗菌肽在生物体内微环境中通过多种信号转导途径,促进或抑制癌细胞增殖。该综述概述了抗菌肽的分类和生物学作用,特别是在癌症治疗方面的进展,以便为癌症治疗提供新的治疗靶点和思路。

关键词：抗菌肽分类抗菌免疫调节癌症

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家蚕30kDa载脂蛋白19G1前体的生物信息学分析及克隆表达

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浙江理工大学学报（自然科学版） 2009年第5期26卷 747-753,763页

作者：陈晓平于威张耀洲浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中发现了一条编码低分子量30 kDa载脂蛋白19G1前体(lowmolecular mass 30 kDa lipoprotein 19G1 precursor)的EST序列(GeneBank登录号:AY568957),在NCBI数据库中比对后得知该基因的ORF长为771 bp,与基因组比对后发现该基因的ORF不含内含子,由单一外显子编码256个氨基酸残基的蛋白质,该蛋白属于家蚕30K蛋白家族,预测分子量约为29.5 kDa,等点电为7.29;信号肽分析显示该蛋白很可能存在信号肽。根据该基因ORF进行引物设计,以家蚕基因组为模板,PCR扩增获得该基因,将其克隆到pET-28a(+)载体中并导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,裂解菌作SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白前体成功表达,为研究其功能打下了基础。

关键词：家蚕低分子量30 kDa载脂蛋白19G1前体 30K蛋白克隆生物信息学分析

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家蚕生物反应器表达A组轮状病毒结构蛋白VP7

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浙江农业科学 2019年第8期60卷 1477-1481页

作者：王蓓蕾孙爱群李司浙江理工大学生命科学与医药学院浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室

A组轮状病毒(rotavirus,RV)是引起某些幼龄动物患急性胃肠炎的主要病原之一,给家畜养殖业造成严重的经济损失。VP7蛋白是RV最外层的糖蛋白,具有强抗原性和免疫原性。本研究构建了重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP7,并分别感染家蚕细胞、家蚕5... 详细信息

A组轮状病毒(rotavirus,RV)是引起某些幼龄动物患急性胃肠炎的主要病原之一,给家畜养殖业造成严重的经济损失。VP7蛋白是RV最外层的糖蛋白,具有强抗原性和免疫原性。本研究构建了重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP7,并分别感染家蚕细胞、家蚕5龄幼虫以及蚕蛹。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,在重组病毒感染的家蚕细胞、5龄幼虫以及蚕蛹中均检测到35 ku的特异性条带,说明成功表达了VP7蛋白。ELISA检测结果显示,VP7蛋白在家蚕细胞和蚕蛹中的表达分别在感染后第5天和第7天达到最高水平;而在家蚕5龄幼虫中,VP7蛋白表达量不高。家蚕具有食用和药用价值,我们构建的重组家蚕杆状病毒BmNPV-VP7在家蚕生物反应器中成功表达了VP7蛋白,为A组轮状病毒疫苗的研制提供了一条新途径。

关键词： VP7蛋白 A组轮状病毒家蚕表达系统

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家蚕JAB1/CSN5蛋白的基因克隆表达及亚细胞定位

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蚕业科学 2009年第3期35卷 508-515页

作者：许红姚斐盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪舒特俊陈剑清吴祥甫张耀洲浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

JAB1/CSN5是COP9信号复合体(constitutive photomorphogenic signalosome CSN)的第5个亚基,内嵌的JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA文库中筛选到的一条基因序列,其ORF长度... 详细信息

JAB1/CSN5是COP9信号复合体(constitutive photomorphogenic signalosome CSN)的第5个亚基,内嵌的JAMM基序是CSN参与蛋白的泛素化降解途径并调控生物体生长发育过程的异构酶活性位点。在家蚕蛹cDNA文库中筛选到的一条基因序列,其ORF长度为1047 bp,预测编码蛋白含有JAB1/CSN5保守结构域JAB-MPN,因此命名为BmJM。将BmJM基因的ORF插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmJM,于***菌中进行原核表达,重组蛋白以包涵体形式存在。以纯化后的重组蛋白为抗原免疫大白兔获得BmJM的多克隆抗体,采用RT-PCR、Western blotting方法对BmJM基因在家蚕不同发育时期和组织中的转录及蛋白表达水平进行分析,发现BmJM蛋白在家蚕5龄幼虫的生殖腺表达量最高,而在其他组织中表达量较少,由此初步揭示了JAB1/CSN5在家蚕生长发育过程中的作用。亚细胞定位测定表明BmJM蛋白在细胞质近核区域含量最高,在细胞核中也有分布。

关键词：家蚕 COP9信号复合体 JAB1/CSN5蛋白基因克隆序列分析荧光定量PCR 亚细胞定位

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生物类专业生理学课程融入思政教育的实施路径探讨

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首都师范大学学报（自然科学版） 2021年第4期42卷 75-80页

作者：王丹代琦陈贵钱聂作明浙江理工大学生命科学与医药学院浙江省家蚕生物反应器与生物医药重点实验室浙江杭州310018

为了将生物类专业生理学课程的专业知识与思政教育有机融合,本文以课堂为主舞台,密切结合学习通网络教学平台及课程微信公众号,介绍了实施生理学课程思政教育的一些具体措施,旨在探讨实施课程育人的有效路径,进一步提升课程的育人功能.

关键词：生物学生理学课程思政课堂网络教学平台微信公众号

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家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究

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蚕业科学 2009年第4期35卷 737-745页

作者：姚斐许红舒特俊盛清吕正兵陈健聂作明王丹刘立丽沈红丹舒建洪陈剑清吴祥甫张耀洲浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200031

脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域... 详细信息

脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因。将该基因插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上。通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是:BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。

关键词：家蚕脂围蛋白蛋白纯化基因表达亚细胞定位

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间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中的表达

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蚕业科学 2014年第4期40卷 672-680页

作者：盛稳稳郭庆拓陈剑清崔立旺张耀洲于威舒特俊盛清浙江理工大学生物化学研究所杭州310018 宾夕法尼亚州立大学美国宾夕法尼亚州16802 天津市国际生物医药联合研究院天津310450 天津大学天津310450 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室杭州310018

间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白,可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖,有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径,进行了Pvs25在家蚕杆... 详细信息

间日疟疾传播阻断疫苗候选抗原Pvs25是间日疟原虫有性生殖期表达的表面蛋白,可以抑制疟原虫在媒介按蚊体内的有性生殖及孢子增殖,有效地阻断疟疾病原从按蚊向人体的传播。为了探索该疫苗高效、低成本生产的新途径,进行了Pvs25在家蚕杆状病毒表达系统中表面展示表达的初步试验。首先将经过非功能区去除和密码子优化的间日疟原虫Pvs25基因克隆至转移载体pFastBacHTb,构建重组质粒pET32a-Pvs25并转化*** Rosetta菌株,诱导后成功表达了Pvs25蛋白,利用Ni-NTA亲和层析的方法纯化重组Pvs25蛋白,免疫BALB/c雌鼠制备多克隆抗体,利用Protein A抗体纯化柱纯化后的抗体经间接ELISA法测定其效价为1∶12 800;利用Bac-to-Bac系统构建含Pvs25基因的重组杆状病毒vBmPvs25,接种BmN细胞和家蚕5龄幼虫,经SDS-PAGE与Western blotting分析表明Pvs25在BmN细胞和幼虫中均成功表达;构建vBmgp64-CMV-Pvs25表面展示重组病毒,检测到Pvs25在BmN细胞中表达并展示于细胞和杆状病毒囊膜上。研究结果为利用家蚕杆状病毒表达系统生产间日疟疾传播阻断候选疫苗奠定了一定的试验基础。

关键词：间日疟原虫 Pvs25蛋白传播阻断疫苗家蚕杆状病毒表达系统表面展示多克隆抗体

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