检索结果-内蒙古大学图书馆

水生生物学报 2025年第2期49卷 106-115页

作者：蔡雪黄雷郑阿钦褚宽林华利杨艳杰原居林宋大伟姚嘉赟湖州师范学院生命科学学院湖州313000 浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室湖州313001 上海莱慎生物科技股份有限公司上海201600

为探究大蒜E素(ALE)对副溶血弧菌的抑菌活性及作用机制,通过测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和抑菌动态生长曲线,评价ALE对副溶血弧菌的抑菌作用;基于电镜观察及胞外β-D-半乳糖苷酶、蛋白质含量测定,分析ALE对副溶血弧菌细... 详细信息

为探究大蒜E素(ALE)对副溶血弧菌的抑菌活性及作用机制,通过测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和抑菌动态生长曲线,评价ALE对副溶血弧菌的抑菌作用;基于电镜观察及胞外β-D-半乳糖苷酶、蛋白质含量测定,分析ALE对副溶血弧菌细胞结构的影响;采用结晶紫染色法检测ALE对副溶血弧菌生物被膜形成的影响;利用RNA-Seq技术分析ALE对副溶血弧菌转录水平表达的影响。结果显示,ALE对副溶血弧菌的MIC为7.8μg/mL,MBC为31.2μg/mL。与对照组相比,MIC浓度ALE组副溶血弧菌胞外β-D-半乳糖苷酶活性和蛋白质含量显著增加(P<0.05),细胞壁膜消融、内容物流失,生物被膜形成量显著减少(P<0.05)。转录组分析结果显示,与对照组相比,1/4MIC浓度的ALE组副溶血弧菌中显著下调基因145个,主要富集在MAPK信号转导、鞭毛组装、生物膜形成等通路;ALE组副溶血弧菌中显著上调基因133个,主要富集在氨基酸代谢、降解等通路;RNA-Seq结果与RT-qPCR验证试验结果一致。研究表明,ALE对副溶血弧菌抑菌作用强,可能通过破坏细菌菌体结构,抑制其生物被膜形成,以及调控鞭毛、生物膜等基因表达,从而发挥抑菌、减毒作用。研究结果为探明ALE抑制副溶血弧菌的作用及机理奠定良好基础。

关键词：弧菌大蒜素抗菌药物抑菌机制转录组

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罗氏沼虾源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及致病性分析

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中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 137-143页

作者：赵梦瑶陈静姚嘉赟袁雪梅黄雷彭先启张海琪湖州师范学院生命科学学院浙江湖州313000 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室浙江湖州313001

为探究患病罗氏沼虾的病原及其感染的防治措施,本研究从浙江省某养殖场采集10只患病罗氏沼虾的肝胰腺、鳃及肌肉样品分离获得一株优势菌。通过对该优势菌经革兰氏染色镜检及生化鉴定,结果表明分离菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freund... 详细信息

为探究患病罗氏沼虾的病原及其感染的防治措施,本研究从浙江省某养殖场采集10只患病罗氏沼虾的肝胰腺、鳃及肌肉样品分离获得一株优势菌。通过对该优势菌经革兰氏染色镜检及生化鉴定,结果表明分离菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。采用PCR分别扩增分离菌的16S r RNA和gyr B基因序列,测序后经BLAST检索与这两种基因同源性均最高的菌株;通过MEGA 7.0软件中的Clustal W方法将分离菌与从Gen Bank中获得的同源性较高的菌株序列进行多序列比对,采用MEGA 7.0软件中的邻接法构建分离菌与上述菌株16S r RNA和gyr B基因的系统发育树。BLAST检索结果显示,分离菌与弗氏柠檬酸杆菌(KC210829.1)16S r RNA基因序列的同源性高达99.93%;与弗氏柠檬酸杆菌(KF156750.1)gyr B基因序列的同源性达98.76%。16S r RNA和gyr B基因的进化树结果显示,分离菌均与弗氏柠檬酸杆菌聚为一支,且支持率高达99%。进一步表明引起罗氏沼虾发病的病原为弗氏柠檬酸杆菌。将分离菌分别以1.02×10^(9)cfu/m L~1.02×10^(4)cfu/m L 6种浓度感染健康罗氏沼虾,每日观察并记录罗氏沼虾的发病症状及死亡率,根据Probit回归法计算分离菌对罗氏沼虾的半数致死量(LD50)。结果显示,1.02×10^(6)cfu/m L以上浓度的弗氏柠檬酸杆菌均能够导致罗氏沼虾出现体型消瘦、行动迟缓无活力的症状,1.02×10^(5)cfu/m L以下浓度的弗氏柠檬酸杆菌并不致罗氏沼虾出现症状。经统计该菌株对罗氏沼虾的LD50为1.01×10^(7)cfu/m L,表明该菌株对罗氏沼虾的致病性较强。采用PCR分别检测该分离菌株的定居因子基因(cfa)、尿素酶基因簇(ure G、ure F、ure E、ure D)、Vi抗原基因(via B)、外膜蛋白基因(omp X)等7种毒力相关基因,结果显示该菌株分别扩增到375 bp(cfa)、119 bp(ure G)、300 bp(ure F)、247 bp(ure E)、243 bp(ure D)、875 bp(via B)及250 bp(oomp X)的7种毒力基因。采用K-B纸片扩散法测定分离菌对10类共35种药物的敏感性,结果显示该分离菌对β-内酰胺类的头孢他啶和头孢曲松、多肽素类的多黏菌素B、氨基糖苷类的庆大霉素以及拉氧头孢这5种药物敏感,对β-内酰胺类的青霉素、氯霉素类的氟苯尼考、多肽类的万古霉素及苯唑醂、克林霉素和新生霉素等27种药物呈不同程度的耐药性,且为多重耐药菌。综上所述,本研究从患病罗氏沼虾中分离到了一株弗氏柠檬酸杆菌,该菌携带多种毒力基因,对罗氏沼虾的致病性较强,为进一步研究弗氏柠檬酸杆菌对水产动物的致病性及对罗氏沼虾弗氏柠檬酸杆菌病的防治提供参考依据。

关键词：罗氏沼虾弗氏柠檬酸杆菌致病性毒力基因药敏分析

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甘胆口服液对副溶血弧菌的抑菌作用及转录组分析

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微生物学报 2025年第2期65卷 683-697页

作者：褚宽黄雷郑阿钦蔡雪程安达原居林吕利群姚嘉赟上海海洋大学国家水生动物病原库上海浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室浙江湖州上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海北京市中兽药工程技术研究中心北京

【目的】探究甘胆口服液(Gan Dan oral liquid,GD)对副溶血弧菌的体外抑菌活性,并从转录组水平解析GD抗副溶血弧菌的分子机制。【方法】基于最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal co... 详细信息

【目的】探究甘胆口服液(Gan Dan oral liquid,GD)对副溶血弧菌的体外抑菌活性,并从转录组水平解析GD抗副溶血弧菌的分子机制。【方法】基于最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)和抑菌动态生长曲线,评价GD对副溶血弧菌的体外抑菌活性;通过扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)和透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)分析GD处理对副溶血弧菌细胞结构的影响;利用转录组测序及生物信息学技术分析1/4MIC浓度的GD处理对副溶血弧菌转录组的影响,并采用逆转录实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)进行验证。【结果】GD对副溶血弧菌具有较好体外抑菌活性,其MIC和MBC值分别为7.6 mg/m L和15.2 mg/mL。1/4MIC浓度的GD处理破坏了副溶血弧菌细胞壁结构完整性,影响了细胞膜的通透性,导致胞内大分子物质外漏。转录组分析结果表明,GD处理显著改变了副溶血弧菌的转录组,造成1074个基因显著上调,以及1179个基因显著下调。其中,下调基因主要富集在肌苷酸、核糖核苷合成代谢以及柠檬酸循环等通路,上调基因主要涉及转录因子活性、细胞壁合成代谢等通路。【结论】GD可能通过破坏菌体细胞壁和细胞膜结构的完整性,抑制细菌的能量代谢和生物合成等功能,进而对副溶血弧菌产生抑菌作用。

关键词：副溶血弧菌抗菌药物细胞结构抑菌活性转录组

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大口黑鲈蛙虹彩病毒传代致弱株免疫效果评价

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水生生物学报 2025年第6期49卷 21-31页

作者：高铭悦楚馨刘思玉姚嘉赟蔺凌云沈锦玉潘晓艺湖州师范学院生命科学学院湖州313000 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室湖州313001 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 浙江海洋大学水产学院舟山316022

为研究大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth Bass Ranavirus,LMBV)传代致弱毒株LMBV-ZJDSS-F110的特性,研究开展了该病毒的复制效率、毒力、体内病毒载量变化、比较基因组、免疫保护率、免疫后免疫相关基因表达和毒力返强等试验。结果显示:采... 详细信息

为研究大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth Bass Ranavirus,LMBV)传代致弱毒株LMBV-ZJDSS-F110的特性,研究开展了该病毒的复制效率、毒力、体内病毒载量变化、比较基因组、免疫保护率、免疫后免疫相关基因表达和毒力返强等试验。结果显示:采用FHM培养,F110代次毒滴度可达109.1 TCID50/mL,以剂量108.0 TCID50/mL×0.1 mL注射大口黑鲈,未见死亡。不同代次毒株体内组织病毒载量测试,结果显示:传代毒F5、F45和F110在7d时脾脏和鳃的病毒载量要高于3d,而F90在两时间点的病毒载量变化不显著,表明传代毒F90相较于F45,F110相较于F90都出现了特性改变。不同代次毒株F5与F110比较基因组学分析显示:LMBV-ZJDSSF110出现了10处变异,其中有7处可能引起编码区的变化。将传代弱毒F110通过注射和浸泡免疫大口黑鲈,结果显示108.0 TCID50/mL浓度组都获得了对强毒F5株70%免疫保护率,而头肾中免疫因子(TNF-α、CD8b、IgM、IgT、IFN-γ)基因表达量在免疫后14d达到峰值,且注射组显著高于浸泡免疫组,其中IFN-γ表达量接近对照组的50倍。活体传代毒力返强测试结果显示,F110活体盲传5代未引起死亡。以上研究表明,LMBVZJDSS-F110是一株安全有效的弱毒疫苗株,为大口黑鲈蛙虹彩病毒病的免疫预防提供了路径。

关键词：弱毒疫苗免疫因子传代致弱大口黑鲈蛙虹彩病毒免疫途径

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大口黑鲈鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株特性及免疫效果评价

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水生生物学报 2024年第7期48卷 1120-1129页

作者：杨娜黄雷蔺凌云姚嘉赟陈静刘忆瀚陈雪兰王亿文沈锦玉潘晓艺浙江海洋大学水产学院舟山316022 浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室湖州313001

为探究鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)强毒株LY20810 F1与其传代弱毒株LY20810 F110的特性差异,比较了两个菌株的生物学特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鲈免疫反应的差异,并评价了弱毒株LY20810 F110对大口黑鲈的免疫保护效... 详细信息

为探究鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)强毒株LY20810 F1与其传代弱毒株LY20810 F110的特性差异,比较了两个菌株的生物学特征、毒力基因序列、致病力及引起大口黑鲈免疫反应的差异,并评价了弱毒株LY20810 F110对大口黑鲈的免疫保护效果。结果表明,通过BHI培养基连续传代培养110代次后,菌株LY20810 F110的菌落、菌体形态发生显著变化,其生长速度较原始毒株LY20810 F1快1倍以上。通过比较两株菌的10个毒力基因序列,发现菌株LY20810 F110的SodC和ESAT6基因发生了单位点突变。致病力测试结果显示,强毒株LY20810 F1以0.1 mL 1×10^(7) cfu/mL攻毒剂量感染大口黑鲈,30d内鱼累积死亡率为100%,而传代弱毒株LY20810 F110在相同剂量下未造成鱼死亡。强毒株LY20810 F1攻毒3d后引起脾脏、头肾中IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ等炎症细胞因子显著上调,表明细菌感染引起炎症风暴。传代弱毒株LY20810 F110在感染中后期(14d和28d)诱导包括IgM、CD4-α、CD8-α、MHCI-α等8种免疫因子的上调。免疫效果评价结果显示,弱毒株LY20810 F110的注射、浸泡免疫(1×10^(8) cfu/mL)对大口黑鲈的相对保护率分别为75.0%和66.7%,有效降低了鰤鱼诺卡氏菌入侵造成大口黑鲈脾脏和头肾的病理损伤。以上结果表明,鰤鱼诺卡氏菌传代弱毒株LY20810 F110是安全有效的弱毒疫苗候选株,将为诺卡氏菌减毒疫苗的研制提供科学依据。

关键词：鰤鱼诺卡氏菌传代培养减毒疫苗免疫保护大口黑鲈

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快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 505-510页

作者：袁雪梅陈静黄雷蔺凌云潘晓艺彭先启焦锦彪姚嘉赟浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室浙江湖州313001

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察... 详细信息

为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。

关键词：重组酶聚合酶扩增侧向流试纸条技术十足目虹彩病毒I

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循环水养殖系统中高毒力嗜水气单胞菌的鉴定与药敏试验

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水生态学杂志 2023年第3期44卷 136-143页

作者：焦锦彪黄雷林锋姚嘉赟袁雪梅苏胜齐张海琪西南大学水产学院农业农村部长江上游水生生物多样性保护研究中心渔业资源环境研究中心重庆北碚400715 浙江省淡水水产研究所农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室浙江湖州313001

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)循环水养殖过程中出现体表穿孔和溃疡的病因,对患病中华鳖的肝、脾、肺和肾等部位取样并进行病原菌分离及革兰氏染色,利用16S rRNA测序和生化鉴定相结合进行细菌鉴定,通过毒力基因PCR检测和人工回感... 详细信息

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)循环水养殖过程中出现体表穿孔和溃疡的病因,对患病中华鳖的肝、脾、肺和肾等部位取样并进行病原菌分离及革兰氏染色,利用16S rRNA测序和生化鉴定相结合进行细菌鉴定,通过毒力基因PCR检测和人工回感试验评估细菌的致病性,以纸片扩散法评估几种抗生素的抑菌效果,利用琼脂打孔法评估中药提取物的抑菌效果。结果显示,从病鳖的脏器中分离到一株优势菌AH0421,该菌为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状;菌株AH0421与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)模式菌株ATCC 7966的16S r RNA序列相似性高达99.66%。菌株AH0421能利用葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,具有O/129耐受性,其携带act、aerA、aha、ahh、ahp、ahpA、alt、ast、hlyA、lip、ompA毒力基因。回感试验出现与自然发病相似病症,菌株AH0421半致死浓度(LC_(50))为1.7×10^(6)CFU/mL。中药五味子提取物、诺氟沙星、多西环素、恩诺沙星、新霉素以及头孢克肟、头孢曲松等头孢类抗生素对该菌有较强的抑制作用。研究表明,五味子和多数头孢类抗生素可作为治疗菌株AH0421感染的参考药物。

关键词：嗜水气单胞菌中华鳖中草药抗生素循环水养殖

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杂交鲟“红嘴病”病原的分离及其灭活疫苗免疫效果的评价

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中国预防兽医学报 2024年第10期46卷 1072-1079页

作者：胡谋黄雷姚嘉赟徐洋蔺凌云沈锦玉许式见潘晓艺浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省鱼类健康与营养重点实验室/湖州市渔业环境与水产品质量安全重点实验室浙江湖州313001 农业农村部鲟鱼遗传育种重点实验室杭州千岛湖鲟龙科技股份有限公司浙江杭州311700 衢州鲟龙水产食品科技开发有限公司浙江衢州324000

为研究杂交鲟“红嘴病”的病原,本研究对自然患“红嘴病”杂交鲟的肾脏、肝脏进行病原菌的分离,对分离株经形态学观察、生化特性鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析,并将分离菌以1.0×10^(7)cfu/mL~1.0×10^(3)cfu/mL的剂... 详细信息

为研究杂交鲟“红嘴病”的病原,本研究对自然患“红嘴病”杂交鲟的肾脏、肝脏进行病原菌的分离,对分离株经形态学观察、生化特性鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析,并将分离菌以1.0×10^(7)cfu/mL~1.0×10^(3)cfu/mL的剂量感染健康杂交鲟,每日观察并记录鲟鱼的活力和死亡数,感染后10 d对各组发病鱼剖检并再次分离病原菌。采用SPSS 19.0的概率单位图解法计算该分离菌对杂交鲟的半数致死量(LD50)。结果显示,从患病杂交鲟肾脏中分离到一株优势革兰氏阳性菌株KS2,呈卵圆形或圆形,成双或成链状排列。生化鉴定结果显示,分离株KS2与停乳链球菌停乳亚种的生化特征一致;PCR结果显示,从分离菌中扩增到约1 500 bp的16S r RNA基因片段,其与停乳链球菌停乳亚种16S rRNA基因的同源性达100%,二者在进化树中聚为一支。以上结果表明从杂交鲟中分离到一株停乳链球菌停乳亚种KS2株。感染试验结果显示,感染组发病鲟鱼均出现嘴部充血肿胀、肛门红肿等“红嘴病”典型症状,并从濒死鲟鱼肾脏中分离的细菌与原感染菌的形态、生化特征均一致;经计算分离菌株KS2对杂交鲟的LD50为3.83×10^(4)cfu/mL。结合上述结果判定菌株KS2为杂交鲟发病的病原菌。利用0.5%甲醛制备KS2菌株灭活疫苗,经安全性检验合格后将其以两种剂量(灭活前分别为1.0×10^(8)cfu/mL及1.0×10^(7)cfu/mL的菌液)免疫杂交鲟,分别于免疫后不同时间采血,采用试剂盒测定各组鲟鱼血清中C3补体和免疫球蛋白IgM的含量,免疫后90 d每组鱼分别经腹腔注射0.5 mL(1.0×10^(7)cfu/mL)停乳链球菌攻毒,通过观察记录10 d内鲟鱼的发病和死亡情况,计算疫苗的相对保护率(RPS),评估该疫苗在实验室阶段对鲟鱼的免疫保护效果。在田间试验中利用该灭活疫苗(1.0×10^(8)cfu/mL)免疫58 637尾杂交鲟,另将66 544尾鲟鱼作为空白对照组,统计患“红嘴病”死亡鲟鱼的数量,评估该疫苗在田间试验阶段对鲟鱼的免疫保护效果。实验室免疫保护试验结果显示,免疫后60 d和90 d,免疫组鲟鱼血清中C3补体和IgM的含量均显著高于PBS对照组(P<0.05),且免疫后30 d~90 d,高剂量免疫组鲟鱼血清中上述两个指标的含量均随时间的延长而升高。攻毒结果显示:高、低剂量灭活疫苗免疫组和对照组杂交鲟的RPS分别为75%、50%。灭活疫苗田间试验结果显示,免疫组杂交鲟因“红嘴病”死亡鲟鱼1 295尾,明显低于对照组死亡的3 799尾,死亡率降低了3.5%。综上所述,本研究证实停乳链球菌停乳亚种是杂交鲟“红嘴病”的病原,对杂交鲟的致病性较强。首次制备鲟鱼源停乳链球菌灭活疫苗,通过实验室免疫保护试验和田间免疫试验证明该疫苗的免疫原性较强,能够刺激鲟鱼产生较强的体液免疫反应,对鲟鱼的免疫保护效果较好,具有很好的应用前景。本研究为鲟鱼“红嘴病”疫苗的研制提供了重要参考依据,对该病的防治具有重要意义。

关键词：杂交鲟停乳链球菌细菌鉴定灭活疫苗免疫作用

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