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2018年（第十三届）浙江渔业科技论坛

作者：刘士力程顺蒋文枰迟美丽郑建波贾永义赵金良顾志敏浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产遗传育种重点实验室上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室

本研究采用保守引物进行PCR成功扩增了编码翘嘴鲌胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）的基因。该基因全长14 567 bp,由5个外显子和4个内含子组成。翘嘴鲌的5个外显子长度分别为298、160、182、36和1360 bp。推测的阅读框为486bp,编码由161个... 详细信息

本研究采用保守引物进行PCR成功扩增了编码翘嘴鲌胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）的基因。该基因全长14 567 bp,由5个外显子和4个内含子组成。翘嘴鲌的5个外显子长度分别为298、160、182、36和1360 bp。推测的阅读框为486bp,编码由161个氨基酸组成的IGF-Ⅰ前体蛋白。前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成,其中信号肽44个氨基酸,成熟肽70个氨基酸,E肽47个氨基酸。成熟肽由B、C、A、D四个区域组成,其中B结构域和A结构域的保守性最高,在这2个区域包含由6个半胱氨酸残基形成的3个二硫键。翘嘴鲌B区域还包含保守的IGF-Ⅰ受体识别序列(Phe-Tyr-Phe)。E肽的长度表明翘嘴鲌IGF-Ⅰ属Ea-2型。同源性分析表明翘嘴鲌与鲤科鱼类的IGF-Ⅰ编码氨基酸同源性较高,为94%—100%,但在聚类分析中翘嘴鲌并不是首先和鲌亚科的鱼类聚集在一起。Real-time qPCR组织特异性表达结果显示IGF-Ⅰ mRNA在肝脏组织中的表达量最高,显著高于其它组织,脾、心脏、精巢、脑次之,肾、鳃、胃和卵巢中表达量较低。翘嘴鲌IGF-Ⅰ基因4个内含子长度分别为1 170、9 364、251和1 746 bp。相对外显子来说,种间内含子变异较大,其中第三内含子变异最大。翘嘴鲌IGF-Ⅰ基因中包含6个微卫星,（GATG）AATAT（ATAG）位于第一内含子中,（CT）、（TTA）、（AC）、（TG）和（ATT）位于第二内含子中。其中4个微卫星位点具有多态性,将它们在120尾同塘养殖的翘嘴鲌中进行基因型与生长性状的关联性分析,均未达到显著水平（P>0.05）。结果为进一步研究该基因的表达、功能及其转录调控特征奠定了分子基础。

关键词：翘嘴鲌胰岛素样生长因子-Ⅰ基因内含子微卫星序列分析

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马口鱼的胚胎发育研究

马口鱼的胚胎发育研究

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2018年（第十三届）浙江渔业科技论坛

作者：练青平张任驰宓国强姚子亮刘士力黄富有陆君吴燕琴农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江省淡水水产研究所浙江省丽水市水产技术推广站

2016-2018年,对水泥池养殖的1足龄马口鱼亲鱼进行催产,通过干法人工授精获得受精卵。连续观察了马口鱼从受精卵到初孵仔鱼25个发育时期的发育时序及形态特征,观察结果显示:马口鱼胚胎发育可以分为卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、... 详细信息

2016-2018年,对水泥池养殖的1足龄马口鱼亲鱼进行催产,通过干法人工授精获得受精卵。连续观察了马口鱼从受精卵到初孵仔鱼25个发育时期的发育时序及形态特征,观察结果显示:马口鱼胚胎发育可以分为卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、器官形成期、出膜期等7个阶段;马口鱼的受精卵为金黄色或桔黄色,无粘性,沉性卵,卵径为(2.06±0.05)mm;在孵化水温(23±1)℃条件下,受精后35 min,胚盘形成;1h11 min,进入卵裂期;3 h55 min,进入囊胚期;9h09min,进入原肠期;16h05min,进入神经胚期;受精后17h,进入器官形成期;52h10min,进入孵化出膜期,仔鱼开始出膜。马口鱼受精卵完成胚胎发育所需的积温为1199.91℃·h;初孵仔鱼全长6.0～6.8mm,体透明。本研究可为马口鱼的人工繁殖提供理论指导。

关键词：马口鱼人工繁殖胚胎发育

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刀鲚POMC基因的cDNA克隆及其应激应答

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中国水产科学 2017年第2期24卷 231-238页

作者：杜富宽徐钢春黎燕练青平徐跑农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室江苏无锡214081

为了研究刀鲚(Coilia nasus)阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因的应激应答及调控,克隆了刀鲚POMC基因的c DNA全长。刀鲚POMC基因的c DNA全长2030 bp,编码区699 bp,编码232个氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚POMC包括信号肽(signal... 详细信息

为了研究刀鲚(Coilia nasus)阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因的应激应答及调控,克隆了刀鲚POMC基因的c DNA全长。刀鲚POMC基因的c DNA全长2030 bp,编码区699 bp,编码232个氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚POMC包括信号肽(signal peptide)、N末端区(N-terminal region,NPP)、促肾上腺皮质激素结构域(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、β-脂解素(β-LPH)、α-促黑素(α-MSH)、促肾上腺皮质激素样垂体中叶多肽(CLIP)、γ-脂解素(γ-LPH)、β-促黑素(β-MSH)和β-内咖肽(β-EP)结构域。运用荧光定量的方法检测了该基因在刀鲚不同组织中的表达分布。结果显示,POMC在健康刀鲚的脑高表达,鳃、肾、精巢相对高表达,肝、脾、肠、头肾、肌肉和卵巢中微量表达。运输胁迫后,POMC基因的表达量显著下降(P<0.05);10‰ NaCl组4 h和6 h POMC基因的表达量显著上调(P<0.05),6 h的表达量恢复至应激前。POMC基因在脂肪代谢及应激调控中发挥重要的功能,本研究结果可为该基因在刀鲚后续育种及应激调控工作提供重要基础。

关键词：刀鲚 POMC基因应激应答运输胁迫

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氨氧化菌的分离鉴定及其在罗氏沼虾育苗废水中的应用

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浙江农业学报 2017年第6期29卷 894-902页

作者：潘晓艺蔺凌云尹文林徐洋姚嘉赟袁雪梅郑群艳沈锦玉浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江湖州313001

氨氮转化细菌在养殖水生态系统的物质循环和水体净化的过程中起着重要作用。该研究从养殖池塘底泥中筛选具有氨氮去除能力的细菌,通过生化和分子生物学技术进行细菌鉴定,并用于罗氏沼虾育苗用水的氨氮净化。结果表明:分离获得的氨氮去除... 详细信息

氨氮转化细菌在养殖水生态系统的物质循环和水体净化的过程中起着重要作用。该研究从养殖池塘底泥中筛选具有氨氮去除能力的细菌,通过生化和分子生物学技术进行细菌鉴定,并用于罗氏沼虾育苗用水的氨氮净化。结果表明:分离获得的氨氮去除菌YX0703能在无机氮培养基和有机氮培养基中生长,既具有氨氮氧化活性,也能将NO_3^-转化为NO_2^-,再将NO_2^-转化为N_2,经鉴定,该菌为人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi);该菌株携带亚硝酸还原酶基因(Nitrite reductase K gene,nirK),药物最低抑菌浓度检测发现,其对头孢类抗菌素耐药,对喹诺酮类、美罗培南和四环素等抗菌药物敏感;摇床转速150 r·min^(-1)时,在25、30℃条件下,菌株YX0703对罗氏沼虾育苗废水的氨氮去除率分别为96.98%和97.44%。综上,分离获得的氨氮去除菌YX0703是人苍白杆菌,其既能利用无机氮又能利用有机氮,既具有氨氧化活性又有反硝化活性,可用于罗氏沼虾育苗废水的氨氮净化。

关键词：氨氧化菌人苍白杆菌反硝化生物脱氮亚硝酸还原酶基因

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水生植物对养殖池塘重金属污染底泥的修复作用

水生植物对养殖池塘重金属污染底泥的修复作用

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2018年（第十三届）浙江渔业科技论坛

作者：施沁璇孙博怿胡晓波盛鹏程罗毅志农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省鱼类健康与营养重点实验室浙江省淡水水产研究所桐乡市农业经济局

采用生态缸模拟养殖环境,选取菹草(Potamogetoncrispus)、黑藻(Hydrillaverticillata)、荷花(Nelumbonucifera)3种浙江省常见的水生植物,探求其对养殖池塘底泥中Hg、As、Pb、Cd的富集效应和去除作用。结果表明,3种水生植物对底泥中Hg、A... 详细信息

采用生态缸模拟养殖环境,选取菹草(Potamogetoncrispus)、黑藻(Hydrillaverticillata)、荷花(Nelumbonucifera)3种浙江省常见的水生植物,探求其对养殖池塘底泥中Hg、As、Pb、Cd的富集效应和去除作用。结果表明,3种水生植物对底泥中Hg、As、Pb、Cd均有较好的富集效应和去除作用,且植物体内与底泥中重金属质量比呈现显著负相关(p<0.05)。因此3种水生植物均可作为养殖池塘Hg、As、Pb、Cd污染底泥的修复植物。从富集系数(BSAF)看,3种水生植物对底泥中As、Cd的富集系数均大于1,菹草、黑藻对底泥中Hg的富集系数均大于1,因此黑藻可作为养殖期间池塘Hg、As、Cd复合污染底泥生态修复的先锋植物,而菹草适宜于秋冬空闲期间Hg、As、Cd污染底泥的修复。

关键词：环境工程学菹草黑藻荷花重金属养殖池塘底泥富集效应

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水库串联池塘内循环流水养殖模式研究

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科学养鱼 2018年第5期40卷 81-83页

作者：原居林李明刘梅倪蒙浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江湖州313000 金华市水产技术推广站浙江金华321000

近年来,随着浙江省生态文明建设和＂五水共治＂的深入推进,越来越多的水库主要功能转变为饮用水源或后备引用水源。在此背景下,水库传统的网箱养殖、施肥投饵养殖大多已被清除,水库渔业面临着巨大的挑战,退养已成必然,渔民增收途径受限... 详细信息

近年来,随着浙江省生态文明建设和＂五水共治＂的深入推进,越来越多的水库主要功能转变为饮用水源或后备引用水源。在此背景下,水库传统的网箱养殖、施肥投饵养殖大多已被清除,水库渔业面临着巨大的挑战,退养已成必然,渔民增收途径受限,同时水库水质的保护又离不开水生生物的调控,因此急需探索一条既能保障水库水质安全又能实现渔民增收的有效途径.

关键词：水库渔业养殖模式循环流水池塘串联生态文明建设饮用水源网箱养殖

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草鱼呼肠孤病毒HZ08株抗体IPMA检测方法的建立及应用

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水产学报 2017年第1期41卷 142-149页

作者：曾伟伟王庆王英英李莹莹郝贵杰石存斌沈锦玉中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对... 详细信息

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对该方法特异性、敏感性、重复性、与ELISA检测结果的符合率及对临床血清样品的检测效果等进行了验证。结果显示,HZ08株种毒按照1×103拷贝/μL浓度接种后72h固定,HRP-Ig G二抗1∶1000稀释,待检血清1∶100稀释时效果最佳;该IPMA方法与草鱼阴性血清、免疫细菌三联疫苗的草鱼血清、感染GCRV JX0901(GCRVⅠ型)的草鱼血清无交叉反应;GCRV HZ08株阳性血清稀释至1∶800时仍能检出;批内和批间重复性实验显示,该方法具有良好的重复性;符合性实验结果显示,该IPMA方法与ELSIA方法的阳性和阴性符合率分别为95.7%和87.5%;用建立的IPMA方法检测草鱼出血病弱毒疫苗免疫草鱼,免疫2周后抗体水平达到峰值;对现地送检的126份草鱼血清样本进行检测,平均检出阳性率为72.2%。研究表明,建立的HZ08株IPMA方法特异性强、重复性好、敏感性高,为GCRVⅡ型的流行病学调查、疫苗免疫效果评价及抗原抗体检测提供了一种有效的检测手段。

关键词：草鱼呼肠孤病毒免疫过氧化物酶单层细胞实验抗体检测

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运用水声学的水库鱼类资源增殖放流效果评估

运用水声学的水库鱼类资源增殖放流效果评估

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2018年（第十三届）浙江渔业科技论坛

作者：郭爱环刘金殿原居林郝雅宾辛建美顾志敏浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室浙江省淡水水产遗传育种重点实验室中国水产科学研究院东海水产研究所浙江研究中心

合理开展水库鱼类增殖放流,可提高水库鱼产力、修复水库生态环境和防治水库富营养化等,对水库健康运行具有重要意义。而科学评估水库鱼类资源动态及增殖放流净化效果将为合理开展增殖放流提供基础和指导。本研究于2015年运用BioSonics D... 详细信息

合理开展水库鱼类增殖放流,可提高水库鱼产力、修复水库生态环境和防治水库富营养化等,对水库健康运行具有重要意义。而科学评估水库鱼类资源动态及增殖放流净化效果将为合理开展增殖放流提供基础和指导。本研究于2015年运用BioSonics DT-X科学回声探测仪(208kHz)在老虎潭水库增殖放流完成后(夏季)和渔获期(冬季)对其鱼类资源进行走航式水声学调查。结合渔获物调查,对老虎潭水库的鱼类大小组成、空间分布、密度和资源量等进行测定,评估增殖放流活动对水体的净化效果。结果显示,夏季鱼类的平均目标强度为(-51.76±3.37)dB,冬季为(-45.058±4.26)dB,夏季和冬季鱼类目标回声强度大小存在显著性差异(P<0.001)。夏冬两季鱼类密度的垂直分布存在显著性差异(P<0.001)。老虎潭水库库区夏季鱼类的总尾数为1.297×106尾,资源量约为10 246 kg。冬季鱼类的总尾数为4.8X105尾,资源量约为43 085kg。增殖放流后鱼类资源量增长明显,达32 839 kg,共转移出碳、氮、磷的净含量分别为3.379×103kg、1.031×103 kg和1.81×102 kg,实现了对水体营养物质的转移。后续研究可关注每年渔获量的科学设置,合理利用鱼类资源并有效降低库区水体营养水平。

关键词：增殖放流鱼类空间分布水声学水库治理鱼类资源量

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基于高通量测序技术的鱼类环境DNA研究中通用引物的筛选验证

基于高通量测序技术的鱼类环境DNA研究中通用引物的筛选验证

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第二届现代化海洋牧场国际学术研讨会暨中国水产学会渔业资源与环境分会2018年学术年会

作者：张爱菊郝雅宾郭爱环刘金殿练青平周志明浙江省淡水水产研究所中国水产科学研究院东海水产研究所浙江研究中心浙江省淡水水产遗传育种重点实验室农业部淡水渔业健康养殖重点实验室湖州 313001

为了筛选出一个或多个适宜研究环境DNA(environmental DNA,eDNA)的鱼类通用引物,本文选取了 5 对引物,分别对鱼类线粒体细胞色素b(Cytochrome b,Cyt b)基因、16S rDNA和细胞色素c氧化酶I(COI)基因部分片段进行扩增。在对两个水样eDNA进... 详细信息

为了筛选出一个或多个适宜研究环境DNA(environmental DNA,eDNA)的鱼类通用引物,本文选取了 5 对引物,分别对鱼类线粒体细胞色素b(Cytochrome b,Cyt b)基因、16S rDNA和细胞色素c氧化酶I(COI)基因部分片段进行扩增。在对两个水样eDNA进行扩增后发现,引物CY45M和1634M均扩增出目的条带,且扩增产物质量适用于后续的高通量测序,而引物CYFM、16ACM和COIM均没有扩增出目的条带。继续对另外 7个水样eDNA扩增后发现,引物CY45M和1634M分别在所有水样eDNA中均取得良好的扩增效果。对目的产物进行Illumina Miseq测序后发现,引物CY45M和1634M扩增产物注释上的鱼类物种均为 11 种,二者获得的鱼类种类即存在差异也存在重复。综上所述,引物CY45M和1634M都可作为鱼类群落结构eDNA研究的通用引物。

关键词：引物验证环境DNA 高通量测序钱塘江

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加州鲈池塘内循环养殖模式(IPRA)与常规养殖模式(UPA)下生长性能、形体指标及肌肉营养成分比较分析

加州鲈池塘内循环养殖模式(IPRA)与常规养殖模式(UPA)下生长性能...

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2018年（第十三届）浙江渔业科技论坛

作者：张雷鸣原居林上海海洋大学水产与生命学院浙江省淡水水产研究所农业部淡水渔业健康养殖重点实验室

为了解IPRA和UPA对加州鲈生长性能、形体指标和肌肉营养成分的影响,比较分析了2种模式下加州鲈的生长指标、形体指标和肌肉的品质差异,科学评价IPRA养殖效果,以期为进一步优化该模式和研发专用配合饲料配方提供参考。试验共设2个组,每组... 详细信息

为了解IPRA和UPA对加州鲈生长性能、形体指标和肌肉营养成分的影响,比较分析了2种模式下加州鲈的生长指标、形体指标和肌肉的品质差异,科学评价IPRA养殖效果,以期为进一步优化该模式和研发专用配合饲料配方提供参考。试验共设2个组,每组3个重复,试验周期92天。结果表明:IPRA养殖组相比UPA养殖组,成活率显著提高(P<0.05),增重率和特定生长率无显著性差异(P>0.05);IPRA养殖组肥满度、肝体指数和脏体指数显著低于UPA养殖组(P<0.05);IPRA养殖组鱼体粗脂肪含量显著低于UPA养殖组(P<0.05),但粗蛋白显著高于UPA养殖组(P<0.05);IPRA养殖组必需氨基酸与氨基酸总量比值(EAA/TAA)和必需氨基酸与非必需氨基酸总量比值(EAA/NEAA)显著高于UPA养殖组(P<0.05),必需氨基酸总量、鲜味氨基酸总量虽略高于UPA养殖组,但无显著性差异(P>0.05);氨基酸评价表明IPRA养殖组肌肉营养价值显著优于UPA养殖组(P<0.05);脂肪酸分析结果表明,IPRA养殖组饱和脂肪酸显著低于UPA组(P<0.05),但单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸显著高于UPA养殖组(P<0.05)。研究表明,IPRA模式对于提高池塘养殖加州鲈成活率和营养品质具有积极作用。

关键词：池塘内循环流水养殖模式加州鲈生长性能形体指标营养成分

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