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动物营养学报 2025年第3期37卷 1401-1409页

作者：张瑞强卢姝婉孙耀威杨彩梅浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室临安311300

家禽坏死性肠炎(NE)主要是由产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)引起的消化道疾病,因其高发病率和死亡率,对禽类健康和家禽养殖业产生严重威胁。兽用抗菌药能有效控制家禽NE的发生,但由于近年对抗生素的限制,全球范围内NE的发病率表... 详细信息

家禽坏死性肠炎(NE)主要是由产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)引起的消化道疾病,因其高发病率和死亡率,对禽类健康和家禽养殖业产生严重威胁。兽用抗菌药能有效控制家禽NE的发生,但由于近年对抗生素的限制,全球范围内NE的发病率表现出整体上升趋势,家禽NE的防治仍任重道远。为深化对该病的认识,本文从NE的特点出发,综述了NE的病原学、流行病学和临床特征,归纳了NE的营养调控措施与抗病机理,为未来对NE的发病机制及其营养调控的深入研究提供参考。

关键词：家禽坏死性肠炎发病机制营养调控

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组氨酸激酶EnvZ调节副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的作用机制

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微生物学报 2025年第5期65卷 2049-2060页

作者：袁艺萱吴文婷陆倩姚宁周秀娟钟孝俊杨梦华浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州

【目的】探究组氨酸激酶EnvZ调控副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的作用机制。【方法】利用含有诱导型启动子的pBAD24与pMal质粒,构建相应基因的过表达质粒,并将其导入野生株和envZ基因缺失株中,通过运动性培养基比较各菌株的群集... 详细信息

【目的】探究组氨酸激酶EnvZ调控副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的作用机制。【方法】利用含有诱导型启动子的pBAD24与pMal质粒,构建相应基因的过表达质粒,并将其导入野生株和envZ基因缺失株中,通过运动性培养基比较各菌株的群集性爬动能力,采用结晶紫染色法检测各菌株的生物被膜形成能力,并结合RT-qPCR与荧光报告系统检测下游基因的表达水平,以探究EnvZ调节副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的分子机制。【结果】ΔenvZ菌株的群集性爬动能力显著低于野生株,而导入pBAD24-envZ回补质粒的ΔenvZ菌株能够恢复其群集性爬动能力。这些菌株的群集性爬动能力与侧生鞭毛相关基因的表达水平呈正相关。在envZ基因缺失的菌株中,Scr系统启动子的转录活性显著低于野生株和ΔompR菌株。在envZ基因缺失的菌株中过表达Scr系统,可以显著恢复其群集性爬动;然而,在scrABC基因缺失的菌株中过表达EnvZ,并不能改变其群集性爬动能力。ΔenvZ菌株的生物被膜形成能力显著低于野生株,而pMal-envZ质粒能够使ΔenvZ菌株的生物被膜厚度恢复至野生株水平,但pMal-scrABC重组质粒则无此功能。在ΔenvZ菌株中,胞外多糖操纵子(epsA−J)的启动子活性与关键基因的转录水平均显著低于野生株。【结论】组氨酸激酶EnvZ可通过调控Scr系统的表达来增强副溶血弧菌的群集性爬动能力,同时也可通过调控胞外多糖的表达来促进该菌的生物被膜形成。

关键词：副溶血弧菌组氨酸激酶 EnvZ/OmpR 群集性爬动生物被膜

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单增李斯特菌耐药外排泵研究进展

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微生物学报 2024年第5期64卷 1331-1347页

作者：夏菁罗亚如宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

单增李斯特菌是一种重要的人兽共患食源性胞内致病菌,广泛存在于自然环境中且易污染动物性食品,人及动物感染后可引起严重的李斯特菌病,死亡率高达30%。单增李斯特菌通常对多种药物敏感,然而,因不合理使用抗菌药或消毒剂形成的选择压力... 详细信息

单增李斯特菌是一种重要的人兽共患食源性胞内致病菌,广泛存在于自然环境中且易污染动物性食品,人及动物感染后可引起严重的李斯特菌病,死亡率高达30%。单增李斯特菌通常对多种药物敏感,然而,因不合理使用抗菌药或消毒剂形成的选择压力导致李斯特菌多重耐药情况的报道日渐增多。外排泵蛋白是细菌中一类重要的蛋白,可参与机体多种生物学过程,包括影响细菌对抗生素敏感性、促进有毒化合物泵出、影响细菌毒力等。本文综述了近年来关于单增李斯特菌耐药外排泵的功能及调控机制的研究进展,为深入理解李斯特菌耐药等环境适应机制及有效控制该病原污染传播和筛选抗感染药物新靶点提供理论基础。

关键词：单增李斯特菌外排泵多重耐药毒力

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细菌金属离子外排系统及金属稳态调控

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微生物学报 2024年第3期64卷 672-686页

作者：董欣楠邓思敏宋厚辉徐加利程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

铁、铜、锌、锰等金属离子是各类生物体生存和增殖所必需的微量元素,可影响生物体内蛋白酶活性、免疫反应、生理过程和抗感染机制。细菌感染过程中,宿主可通过限制或提高体内环境中金属离子的浓度来抑制细菌增殖,与此同时,细菌进化出各... 详细信息

铁、铜、锌、锰等金属离子是各类生物体生存和增殖所必需的微量元素,可影响生物体内蛋白酶活性、免疫反应、生理过程和抗感染机制。细菌感染过程中,宿主可通过限制或提高体内环境中金属离子的浓度来抑制细菌增殖,与此同时,细菌进化出各种转运系统以适应宿主体内金属离子水平的变化。由于不同细菌的金属离子外排系统在结构和生化特性上存在变异,它们呈现出独特的金属离子外排模式。本文根据现有文献报道及本团队研究结果,对铁、铜、锌和锰离子的细菌外排系统进行讨论和总结,旨在综述目前对细菌金属离子稳态调控机制研究进展的认识,为深入理解细菌金属稳态调控相关机制提供参考。

关键词：金属离子外排系统细菌感染金属离子稳态调控机制

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结核分枝杆菌诱导IFN-β产生在免疫调控中的作用

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微生物学报 2024年第2期64卷 331-343页

作者：黄蓓孟祥苗田江瑶宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院·动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

结核分枝杆菌是导致结核病的病原体,也是影响全球数百万人健康的病原体之一。机体中多种模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)可识别入侵的结核分枝杆菌,如DNA和RNA传感器,从而激活天然免疫系统并诱导干扰素-β(interferon-... 详细信息

结核分枝杆菌是导致结核病的病原体,也是影响全球数百万人健康的病原体之一。机体中多种模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)可识别入侵的结核分枝杆菌,如DNA和RNA传感器,从而激活天然免疫系统并诱导干扰素-β(interferon-β,IFN-β)产生。虽然IFN-β是先天抗病毒应答的主要效应因子,但其在结核分枝杆菌感染中的作用仍具有争议。结核分枝杆菌感染诱导的IFN-β产生可以促进细菌生长,并增强细菌在宿主中的存活率,但用IFN-β处理细胞后再感染结核分枝杆菌,则可增强抗菌作用,保护宿主。因此,本综述将重点关注可识别结核分枝杆菌并诱导的IFN-β产生的PRR及其下游信号通路,并着重探讨IFN-β在介导结核分枝杆菌调控免疫功能中的作用,尤其是IFN-β与IL-1β之间的相互抑制性调节,旨在为进一步揭示结核分枝杆菌致病机制及结核病治疗药物研发提供新思路。

关键词：结核分枝杆菌干扰素β 信号通路

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稳定表达HPV16和18亚型抗原蛋白E7的肿瘤细胞模型构建及评价

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农业生物技术学报 2025年第2期33卷 463-472页

作者：蒋昕胡莱茵宋亚雯孙静宋厚辉夏菁程昌勇浙江农林大学动物科技学院＆动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析实验室

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)是一种常见的生殖道感染病毒，HPV16和HPV18与宫颈癌之间存在密切关联。目前全球共有6种预防性HPV疫苗获批上市，但是这些疫苗只有预防作用，不能用于已感染病例的治疗。因此，本研究以小鼠(Mus... 详细信息

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)是一种常见的生殖道感染病毒，HPV16和HPV18与宫颈癌之间存在密切关联。目前全球共有6种预防性HPV疫苗获批上市，但是这些疫苗只有预防作用，不能用于已感染病例的治疗。因此，本研究以小鼠(Mus musculus)宫颈癌细胞系TC-1为基础模型构建HPV16 E7和HPV18 E7共同表达的TC-1-HPV18 E7细胞模型，并使用减毒单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)为载体的重组菌株疫苗LM-HPV18 E7递送肿瘤抗原，评价重组菌株疫苗在TC-1-HPV18 E7荷瘤小鼠模型中的治疗效果。结果表明，本研究成功构建了TC-1-HPV18 E7细胞模型和小鼠模型，TC-1-HPV18 E7荷瘤小鼠与TC-1荷瘤小鼠在成瘤过程中无差异；与TC-1荷瘤小鼠的肿瘤相比，疫苗LM-HPV18 E7对TC-1-HPV18 E7荷瘤小鼠的肿瘤具有显著的治疗效果，表明LM是一个具有开发潜力的活疫苗载体平台。本研究使以TC-1为基础的细胞模型的用途得到扩展，也为减毒单增李斯特菌作为治疗性疫苗载体的研究提供了参考。

关键词：细胞模型小鼠模型人乳头瘤病毒(HPV)16和18亚型治疗性疫苗

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镉致肝损伤机制及硒拮抗镉肝毒性的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1456-1466页

作者：罗通旺吴亚王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300

镉是一种有毒重金属,能通过食物链蓄积于机体内,造成急性或慢性中毒,严重威胁人类和畜禽的健康。肝是镉毒性损伤的主要靶器官,揭示镉的肝毒性机制以及如何抑制其毒性作用具有重要意义。硒是人体必需的微量元素之一,在维持机体正常生命... 详细信息

镉是一种有毒重金属,能通过食物链蓄积于机体内,造成急性或慢性中毒,严重威胁人类和畜禽的健康。肝是镉毒性损伤的主要靶器官,揭示镉的肝毒性机制以及如何抑制其毒性作用具有重要意义。硒是人体必需的微量元素之一,在维持机体正常生命活动中具有重要作用,近年来,很多研究表明硒能够拮抗镉的肝毒性。本文主要对镉致肝毒性损伤机制以及硒拮抗镉肝毒性的相关研究报道进行归纳总结,以期为镉污染的防治以及硒的临床应用提供参考。

关键词：镉肝毒性硒作用机制

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表达E7蛋白的重组减毒李斯特菌在小鼠宫颈癌模型中的治疗效果

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农业生物技术学报 2024年第5期32卷 1206-1215页

作者：潘晓欣崔明珠罗亚如孙静程昌勇王晶宋厚辉浙江农林大学动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)... 详细信息

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种能在细胞间迁徙繁殖并能促进抗原特异性CD4+和CD8+T细胞增殖产生适应性细胞免疫的优质候选疫苗活载体。本课题组发现新型减毒李斯特菌(attenuated Listeria monocytogenes, LAM)较野生型李斯特菌的溶血能力和增殖能力均显著降低的同时仍可正常分泌李斯特菌溶血素O (Listeriolysin O, LLO)蛋白。为了研究LAM的安全性及其对宫颈癌特异性抗原E7蛋白的递送与免疫效果，本研究在小鼠(Mus musculus)模型上检测了LAM的毒力，并对LAM-E7重组菌株在小鼠宫颈癌免疫治疗和预防中的作用进行了评价。结果显示，LAM对小鼠的毒力是野生型李斯特菌毒力的1/8709，且小鼠脏器中的LAM可在一周内被清除。本研究通过同源重组的方法将E7基因整合到LAM基因组上，PCR鉴定结果显示，LAM-E7菌株构建成功。Western blot结果显示，E7蛋白能够与LLO在重组菌株中融合表达并释放。通过对LAM-E7的体外生长能力和溶血活性分析发现，融合后对LAM的生长能力和溶血能力无显著影响，表明E7蛋白的融合不会影响LAM的安全性。通过腹部皮下注射方式构建小鼠宫颈癌模型发现，LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(161.1202 mm3)显著小于LAM组(349.4625 mm3)和PBS组(512.4149 mm3)(P<0.01)，说明接种LAM-E7对肿瘤生长具有显著的抑制作用。经免疫预防试验发现，LAM-E7组小鼠肿瘤平均体积(3.86 mm3)显著小于LAM组(172.67 mm3)和PBS组(57.38 mm3)(P<0.001)，表明LAM-E7对宫颈癌有一定的预防效果。本研究证实LAM-E7对小鼠宫颈癌具有良好的治疗和预防效果，为减毒李斯特菌作为疫苗载体用于宫颈癌治疗提供了新的思路，也为今后宫颈癌治疗疫苗的研发提供数据支持。

关键词：减毒李斯特菌宫颈癌免疫治疗载体疫苗

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双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫的作用机制

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微生物学报 2022年第12期62卷 5043-5055页

作者：姚宁鲁重王菲钟孝俊杨梦华浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

【目的】探究双组分系统(two-component system,TCS)EnvZ/OmpR对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)抵抗碱胁迫的作用机制。【方法】用SMART在线工具(https://***/)鉴定出副溶血弧菌基因组中的双组分系统EnvZ/OmpR,再利用同源重组技术将envZ和ompR基因分别进行缺失,构建相应回补株,比较各菌株的生长曲线来检测相应基因对细菌适应高渗透胁迫和碱胁迫的作用,并结合qRT-PCR及荧光检测系统,筛选参与EnvZ/OmpR抵抗碱胁迫的下游靶基因,鉴定该双组分系统对下游基因的调控机制。【结果】在副溶血弧菌基因组中鉴定出vp0155/vp0154编码EnvZ/OmpR双组分系统同源蛋白。ΔompR菌株在高渗透胁迫和碱胁迫中的生长能力明显弱于野生株,而回补株CΔompR、ΔenvZ和CΔenvZ菌株生长能力与野生株类似。在ΔompR菌株中,孔道蛋白基因vp1218、vp0493、vpa1745、vpa0085与vpa1308的转录水平均明显低于野生株,并且发现这些孔道蛋白基因缺失株(Δvpa1308除外)在碱性环境中生长能力均明显弱于野生株。OmpR蛋白可直接抑制调控因子AphB基因转录,而ΔaphB菌株在碱胁迫中的生长能力明显强于野生株。此外,AphB蛋白可直接抑制孔道蛋白基因vp0493和vpa0085转录。【结论】双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫,其中OmpR蛋白可通过抑制调控因子AphB的表达,以促进部分孔道蛋白的表达,从而增强副溶血弧菌抵抗碱胁迫的能力。

关键词：副溶血弧菌双组分系统 EnvZ/OmpR 碱胁迫

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利用CRISPRi技术敲低海分枝杆菌PPE13基因

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中国兽医学报 2023年第8期43卷 1670-1676页

作者：王垚垚毕斯琪陈标宋厚辉杨杨浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

为研究分枝杆菌PPE13基因在宿主细胞的生物功能,本试验利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeat interference,CRISPRi)构建海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株。CRISPRi主要包括表达失活的Cas9蛋白(dead cas9,dCas9)和特异性单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),通过形成复合体特异性识别相应DNA序列并抑制目的基因的转录。用无水四环素(anhydrotetracycline,ATC)诱导海分枝杆菌PPE13诱导型敲低菌株,提取细菌RNA,利用定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)技术检测dCas9、PPE13基因的表达情况,观察细菌在不同时间D600 nm的变化,分析诱导剂质量浓度和目的基因转录水平之间的关系。使用PPE13敲低菌株感染巨噬细胞并检测胞内菌的存活情况。结果表明,在ATC诱导后,dCas9表达水平显著增高。针对PPE13基因设计的4个sgRNA中,sgRNA1对PPE13基因转录的抑制作用最为明显,为70%~90%。生长曲线结果显示,敲低PPE13菌株在48 h内D600 nm无明显变化。诱导剂的质量浓度越高,对PPE13基因的转录水平的抑制作用越强。敲低PPE13可降低细菌在细胞内的增殖能力。本研究构建了海分枝杆菌PPE13敲低菌株,为深入研究分枝杆菌PPE13感染宿主细胞的致病机制奠定了基础。

关键词： CRISPRi 海分枝杆菌 PPE13 敲低

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