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饲料博览 2021年第2期31卷 14-16页

作者：毛家真杨金勇王俊红王艳明俞佳妃崔艳军王翀浙江农林大学集贤学院动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 浙江省畜牧技术推广与种畜禽监测总站杭州310021 浙江大学动物科学学院杭州310058 建明(中国)科技有限公司广东珠海519040

赖氨酸是最主要的限制性氨基酸之一。奶牛小肠吸收的氨基酸对于维持生长发育、繁殖和泌乳等生命活动而言极为重要。通常反刍动物自身不能合成赖氨酸,需要通过外源补充以满足动物的需要。反刍动物小肠内的氨基酸来自瘤胃微生物蛋白和瘤... 详细信息

赖氨酸是最主要的限制性氨基酸之一。奶牛小肠吸收的氨基酸对于维持生长发育、繁殖和泌乳等生命活动而言极为重要。通常反刍动物自身不能合成赖氨酸,需要通过外源补充以满足动物的需要。反刍动物小肠内的氨基酸来自瘤胃微生物蛋白和瘤胃未降解蛋白。目前常采用添加过瘤胃保护赖氨酸的方式来提高小肠代谢赖氨酸的含量,从而提高生产性能和经济效益。文章就赖氨酸对奶牛生产性能的影响和过瘤胃保护蛋白的研究进行了综述。

关键词：赖氨酸泌乳奶牛生产性能过瘤胃保护蛋白

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鉴别猪流行性腹泻病毒基因型的一步法双重qRT-PCR

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农业生物技术学报 2019年第7期27卷 1311-1321页

作者：何海健吴瑗刘正奎王志鹏陈琳王磊宋厚辉王晓杜金华职业技术学院农业与生物工程学院浙江农林大学动物科技学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室

猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）是目前导致猪（Sus scrofa domestica）群严重腹泻的主要病原体之一,临床中危害最严重的是PEDV变异毒株（GⅡ型）。建立快速准确的诊断方法可鉴别临床上PEDV的基因型,有利于... 详细信息

猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）是目前导致猪（Sus scrofa domestica）群严重腹泻的主要病原体之一,临床中危害最严重的是PEDV变异毒株（GⅡ型）。建立快速准确的诊断方法可鉴别临床上PEDV的基因型,有利于开展不同基因型的PEDV防控。本研究针对PEDV的纤突蛋白（spike, S）基因N端的相对保守区设计1对引物,同时针对变异毒株（GⅡ型）和经典毒株（GⅠ型）的差异区域设计2个探针,探针采用5-羧基荧光素（5-carboxyfluorescein, FAM）(GⅡ型)和5-六氯荧光素氨基磷酸酯（5-hexachloro-fluorescein hosphoramidite, HEX）(GⅠ型)荧光信号分别标记,通过扩增条件摸索、特异性、敏感性、重复性等实验,建立一种基于探针的一步法双重q RT-PCR检测技术,用于鉴别猪流行性腹泻病毒的不同基因型。结果显示:本研究建立了该方法的标准曲线,该方法在10-1～10～8拷贝数/μL范围内,检测GⅡ毒株（R2=0.9892）和GⅠ型毒株（R2=0.9914）具有较好的扩增效率,Ct值与浓度之间具有较好线性关系;检测灵敏度分别为GⅡ毒株7.34拷贝数/μL和2.3×10～2半数组织培养感染剂量（tissue culture infective dose,TCID50）/0.1 mL、GⅠ型毒株4.32拷贝数/μL和4.3×103TCID50/0.1 mL;GⅠ型和GⅡ型之间没有交叉反应,且与猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus, TGEV）、猪瘟病毒（Classic swine fever virus, CSFV）、猪轮状病毒（Porcine rotavirus, RV）、日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）及猪细小病毒（Porcine parvovirus, PPV）等病毒核酸之间没有交叉反应,特异性较好;组间和组内变异系数低,重复性好;临床样品检测结果与病毒分离方法符合率为100%。本研究为临床疑似PEDV感染病料的检测提供快速准确的鉴别方法,并可确定其基因型,为防控该病提供技术支持。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) TaqMan探针 qRT-PCR 基因型

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基于红外触发相机技术的白鹇栖息地选择研究

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四川动物 2019年第5期38卷 564-570页

作者：游卫云高欣梅爱君徐卫南张先福鲁庆斌浙江农林大学动物科技学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 杭州市临安区林业局杭州311300

红外触发相机技术是野生动物研究的一个新手段,已显示出多方面的独特优势。2015年8月—2016年9月,选择浙江省临安区北部的太湖源、天目山、清凉峰和大峡谷4个区域7块样地,安放127台相机,并测定13个生态因子,对白鹇Lophura nycthemera栖... 详细信息

红外触发相机技术是野生动物研究的一个新手段,已显示出多方面的独特优势。2015年8月—2016年9月,选择浙江省临安区北部的太湖源、天目山、清凉峰和大峡谷4个区域7块样地,安放127台相机,并测定13个生态因子,对白鹇Lophura nycthemera栖息地选择进行研究。结果显示,在可比较的8个生态因子中(与传统方法比较),有6个相同,占75%;2个有差异,占25%。白鹇栖息地选择主要与食物、水源和人为干扰等密切相关。从干扰因素看,白鹇偏好选择人为干扰少、离公路较远(500~1 000 m)的栖息地,并回避下坡位。从食物因素看,白鹇主要选择坡度较小、灌木较少(<20株/4 m 2)、草本适中(50~100株/m 2)和落叶较多(≥80%)的栖息地。由于白鹇强烈回避人为干扰强度大的栖息地,有关部门在进行旅游开发时,应专门针对其栖息地进行保护管理,制定政策措施,降低人为干扰的影响。

关键词：白鹇红外触发相机技术生态因子栖息地选择

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猪猝死症4种重要病原多重连接探针扩增鉴别检测技术的建立与应用

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中国预防兽医学报 2019年第2期41卷 161-167页

作者：周莹珊陈琳孙静姜胜邵春艳周彬宋泉江黄保续王晓杜宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

为了快速检测引起猪猝死的病原,本研究针对临床引起猪猝死症的4种疾病病原(猪尼帕病毒、非洲猪瘟病毒、猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌)分别设计特异性探针,建立了同时检测这4种病原的多重连接探针扩增技术(MLPA)。对扩增产物进行... 详细信息

为了快速检测引起猪猝死的病原,本研究针对临床引起猪猝死症的4种疾病病原(猪尼帕病毒、非洲猪瘟病毒、猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌)分别设计特异性探针,建立了同时检测这4种病原的多重连接探针扩增技术(MLPA)。对扩增产物进行毛细管电泳分析,结果显示该方法,探针之间没有交叉反应,特异性强。对不同病原核酸的最低检测限可以达到140拷贝μ/L～370拷贝μ/L,敏感性较高。应用该MLPA方法对129份临床样品进行检测,并与国家相关标准进行比较。结果显示,两种方法的符合率为100%,且该方法检测猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的特异性和敏感性均达到100%,Kappa值均为1。该方法的检测结果与国家或行业标准PCR的检测结果一致性较高,且克服了后者无法同时进行多重检测的缺点,最多可以同时检测45种病原,对于复杂症候群的快速和高通量检测具有重要临床意义。该方法可推广到其它多重病原体的检测中,显示出广阔的应用前景。

关键词：多重连接探针扩增技术(MLPA) 猪猝死症多重检测

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基于量子点标记的赭曲霉毒素A快速、高灵敏荧光免疫层析检测方法的建立及应用

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菌物学报 2019年第6期38卷 1003-1013页

作者：杨眈王作欢蒋小武方维焕宋厚辉章先浙江农林大学动物科技学院浙江临安311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江临安311300 动物健康检测互联网技术浙江省工程实验室浙江临安311300 浙江大学动物科学学院浙江杭州310058 宁波出入境检验检疫局浙江宁波315000

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素。本研究通... 详细信息

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素。本研究通过采用量子点荧光微球(quantum dots,QDs)标记OTA单克隆抗体,并基于免疫层析原理,优化、建立了OTA高灵敏荧光免疫层析检测方法(FICGA),15min即可实现对农产品中OTA污染的快速定量检测。该方法检测下限(IC10)达到0.04ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.05–0.59ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.18ng/mL。与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为7.3%和11.9%,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1和DON均无交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达83.2%–117.8%,与LC-MS/MS同时对天然样本中OTA含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的FICGA快速、灵敏,可满足基层单位和现场的快速检测需求,具有很好的应用前景。

关键词：赭曲霉毒素A 免疫层析量子点单克隆抗体定量检测

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基于纳米磁珠和双标记抗体的玉米赤霉烯酮快速、高灵敏检测方法的建立及应用

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菌物学报 2019年第3期38卷 440-450页

作者：肖佳丽叶青方云方维焕宋厚辉章先浙江农林大学动物科技学院浙江临安311300 浙江大学学报英文版浙江杭州3100276 浙江省检验检疫科学技术研究院浙江杭州310012 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江临安311300 动物健康检测互联网技术浙江省工程实验室浙江临安311300 浙江大学动物科学学院浙江杭州310058

玉米赤霉烯酮(zeralenone,ZEN)具有雌激素活性,主要污染谷物和饲料,大量聚积可导致流产和死胎,给动物和人类健康带来严重威胁。本研究通过将ZEN偶联抗原ZEN-BSA包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs),制备纳米磁珠-偶联抗原复合... 详细信息

玉米赤霉烯酮(zeralenone,ZEN)具有雌激素活性,主要污染谷物和饲料,大量聚积可导致流产和死胎,给动物和人类健康带来严重威胁。本研究通过将ZEN偶联抗原ZEN-BSA包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs),制备纳米磁珠-偶联抗原复合物(MNPs-BSA-ZEN),同时使用金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记的ZEN单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(MNPs-HRP-AuNPsIC-ELISA)。检测下限(IC10)达到0.03ng/mL,检测区间(IC20–IC80)为0.05–0.89ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.22ng/mL,与ZEN类似物(α-zearalanol、zearalanone、α-zearalenol、β-zearalenol和β-zearalanol)的交叉反应性依次为19.2%、11.7%、8.3%、1.2%和4.3%,与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素B1、桔青霉素和展青霉毒素几乎不存在交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达81.6%–113.5%,与LC-MS/MS同时对天然样本中ZEN含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的MNPs-HRP-AuNPs IC-ELISA具备快速和高灵敏的双重优势,也可为其他霉菌毒素精准检测技术的开发提供参考。

关键词：玉米赤霉烯酮纳米磁珠金颗粒辣根过氧化物酶单克隆抗体

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赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮-二联胶体金免疫层析试纸条的制备及应用

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微生物学通报 2019年第5期46卷 1235-1245页

作者：章先付子贤周一钊方维焕宋厚辉浙江农林大学动物科技学院浙江杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江临安311300 动物健康检测互联网技术浙江省工程实验室浙江杭州311300 中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 浙江大学动物科学学院浙江杭州310058

【背景】真菌毒素为真菌的有毒次级代谢产物,混合污染时毒性显著增强,可对人类和动物健康造成严重伤害。制备二联胶体金免疫层析试纸条,实现对常见真菌毒素混合污染的快速监测,具有重要意义。【目的】制备赭曲霉毒素A (Ochratoxin A,OTA... 详细信息

【背景】真菌毒素为真菌的有毒次级代谢产物,混合污染时毒性显著增强,可对人类和动物健康造成严重伤害。制备二联胶体金免疫层析试纸条,实现对常见真菌毒素混合污染的快速监测,具有重要意义。【目的】制备赭曲霉毒素A (Ochratoxin A,OTA)和玉米赤霉烯酮(Zeralenone,ZEN)金标单克隆抗体,基于免疫层析原理,采用竞争反应模式,建立二联胶体金免疫层析检测法用于污染样品中OTA和ZEN的同时快速检测。【方法】采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,并标记获得两种真菌毒素金标单克隆抗体,通过优化相关条件,建立稳定的二联胶体金免疫层析检测方法,用于同时检测谷物和饲料样品中的OTA和ZEN。【结果】制备的OTA和ZEN二联胶体金试纸条对OTA和ZEN的检测限分别为0.625 ng/mL和1.25 ng/mL,且与谷物和饲料中其它真菌毒素(黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、桔青霉毒素、展青霉毒素和呕吐毒素)均无交叉反应,人工添加试验结果准确。对天然样本检测结果表明该方法与LC-MS/MS一致性良好。【结论】本研究制备的二联胶体金试纸条可用于实际样品中OTA和ZEN的同时快速筛查。

关键词：赭曲霉毒素A 玉米赤霉烯酮胶体金免疫检测

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甜菜碱在乳牛母子一体化饲养的应用进展

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饲料博览 2020年第9期30卷 51-54页

作者：俞佳妃杨金勇周华林毛家真马文佳王翀高晨阳浙江农林大学集贤学院动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 浙江省畜牧技术推广与种畜禽监测总站杭州310021 襄阳职业技术学院农学院湖北襄阳410050

围产期期间母牛的生理会发生极大的变化,而这会导致母牛生理活动发生巨大变化,从而对乳牛的健康与生产性能造成负面影响。运用甜菜碱作为饲料添加剂,可以有效改善围产期乳牛新陈代谢,改善乳牛健康,延长乳牛生产寿命。甜菜碱通过甜菜碱/... 详细信息

围产期期间母牛的生理会发生极大的变化,而这会导致母牛生理活动发生巨大变化,从而对乳牛的健康与生产性能造成负面影响。运用甜菜碱作为饲料添加剂,可以有效改善围产期乳牛新陈代谢,改善乳牛健康,延长乳牛生产寿命。甜菜碱通过甜菜碱/蛋氨酸的代谢循环和叶酸/四氢叶酸的代谢循环提供甲基。同时甜菜碱具备改善瘤胃功能,对提高子代体质与生产性能也有益处。甜菜碱的应用还存在着多个问题,需要更多研究来加以解决。

关键词：乳牛母子一体化孕期功能恢复甜菜碱

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不同蛋白水平日粮对金华黄牛生产性能的影响

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饲料工业 2019年第8期40卷 37-40页

作者：代正阳茅慧玲杨金勇崔艳军杨彩梅王翀浙江农林大学动物科技学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300 浙江省畜牧技术推广总站浙江杭州310021 浙江惠嘉生物科技有限公司浙江湖州313307

研究旨在探究不同蛋白水平日粮对金华肉牛生产性能的影响。选取体重145 kg左右的金华肉牛24头,随机分为3组,分别饲喂蛋白水平为13.45%(L组)、14.95%(M组)、16.6%(H组)的日粮。结果表明:采用中蛋白水平日粮饲喂的试验组平均日增重高于采... 详细信息

研究旨在探究不同蛋白水平日粮对金华肉牛生产性能的影响。选取体重145 kg左右的金华肉牛24头,随机分为3组,分别饲喂蛋白水平为13.45%(L组)、14.95%(M组)、16.6%(H组)的日粮。结果表明:采用中蛋白水平日粮饲喂的试验组平均日增重高于采用高蛋白和低蛋白水平的两个试验组,且料重比均低于其它两组。高蛋白水平组平均日增重最低,饲料成本却最高。各组间瘤胃液中乙酸含量差异性显著(P<0.05)。三个试验组的瘤胃液中乙酸/丙酸的值差异不显著(P>0.05)。H组与M、L组中瘤胃液总挥发性脂肪酸含量差异显著(P<0.05)。三个蛋白梯度对金华黄牛的血液生化指标均无显著影响(P>0.05)。试验结果显示,中蛋白水平(14.95%,DM)的日粮对金华黄牛生产性能影响最佳,瘤胃发酵参数和血清生化指标数据说明了日粮中添加蛋白水平过高并不能被动物机体消化吸收,从而使饲料资源转化利用率降低,造成了饲料资源的浪费和养殖成本的提高。

关键词：蛋白水平金华黄牛生产性能瘤胃参数血清生化指标

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笋壳及嫩竹作反刍动物饲料可行性探究

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饲料博览 2020年第7期30卷 27-29,37页

作者：毛家真杨金勇毛纪传茅慧玲吴文旋王翀浙江农林大学集贤学院/动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 浙江省畜牧技术推广与种畜禽监测总站杭州310021 宁波市畜牧兽医局浙江宁波315016 贵州大学动物科学学院贵阳550025

嫩竹及笋壳富含动物必需的微量元素和多种功能性物质,对动物机体具有重要的生理活性作用,但目前笋壳的利用率较低,大规模丢弃易腐烂,造成污染。因此,研究以嫩竹笋为切入口,探讨通过青贮、氨化青贮、全发酵等处理方法探究竹副产物成为反... 详细信息

嫩竹及笋壳富含动物必需的微量元素和多种功能性物质,对动物机体具有重要的生理活性作用,但目前笋壳的利用率较低,大规模丢弃易腐烂,造成污染。因此,研究以嫩竹笋为切入口,探讨通过青贮、氨化青贮、全发酵等处理方法探究竹副产物成为反刍动物饲料的可能性,以期为新型饲料的研发提供新思路,利于加快发展"节粮型"畜牧业。

关键词：笋壳反刍动物饲料

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