检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2025年第4期52卷 1579-1589页

作者：罗通旺金研盛燚凡王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300

异荭草素又称异荭草苷,是一种天然的黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性和药理作用,主要存在于荞麦、麻花艽、人字草、千屈草和荭草等植物。已有的研究表明,异荭草素具有改善骨质疏松、治疗糖尿病、抗抑郁、抗肿瘤以及减轻脏器损伤等多... 详细信息

异荭草素又称异荭草苷,是一种天然的黄酮类化合物,具有广泛的生物学活性和药理作用,主要存在于荞麦、麻花艽、人字草、千屈草和荭草等植物。已有的研究表明,异荭草素具有改善骨质疏松、治疗糖尿病、抗抑郁、抗肿瘤以及减轻脏器损伤等多种功效,而其作用机制主要是通过抗氧化应激、抗炎和调控细胞凋亡来实现,作用过程中所涉及的关键蛋白包括核因子E2相关因子2(Nrf2)、核因子激活的B细胞κ-轻链增强复合物(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血红素氧合酶-1(HO-1)等。此外,异荭草素的研究目前主要以实验鼠和相关细胞系为对象进行急性毒性和亚急性毒性试验,缺乏畜禽等其他动物或细胞的基础试验,这在一定程度上影响了异荭草素的产品开发和临床应用。作者综述了异荭草素生物学功能的研究进展,并对其在临床上的应用提出展望,以期为异荭草素生物学活性的进一步研究以及拓展其在临床上的应用提供新思路和理论支撑。

关键词：异荭草素抗氧化抗炎细胞凋亡调控

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单增李斯特菌毒力因子溶血素关键氨基酸位点在感染过程中的作用研究

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微生物学报 2024年第4期64卷 1219-1232页

作者：冯昱超徐加利朱斌杰吴泽斌王雯静丁桉蔡孜萌陈绵绵孙静江铃丽宋厚辉夏菁程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波卫生职业技术学院浙江宁波315100

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I25... 详细信息

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O(listeriolysin O,LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_(Q253A)和LLO_(I254A)突变蛋白的原核表达菌株,以及利用同源重组方法构建hly_(Q253A)和hly_(I254A)突变株;通过表达纯化突变蛋白,测定溶血活性;比较LLO第253位Q和第254位I均突变成丙氨酸(A)后,对细菌体外生长能力、黏附侵袭、胞内迁移和增殖能力的影响。【结果】相应位点突变后,LLO蛋白均能够正常表达。在pH 6.5条件下,所有突变蛋白和突变株的溶血活性丧失。然而,在pH 5.5条件下,LLO_(I254A)和hly_(I254A)恢复了溶血活性。与野生株相比,突变株的体外生长、黏附能力和胞内增殖能力均无明显差异;突变株的侵袭能力和胞间迁移能力显著低于野生株。【结论】本研究证实第253位Q和第254位I均突变成A后,单增李斯特菌在pH 6.5条件下丧失溶血活性,并降低了感染宿主细胞的能力,但具体机制还有待进一步探索。本研究为深入探究LLO结构对单增李斯特菌生物学功能的影响奠定基础,对单增李斯特菌点突变株的构建具有一定参考意义。

关键词：单增李斯特菌溶血素O 感染点突变缺失株

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丁酸钠和吲哚-3-丙酸共处理对Caco-2细胞紧密连接以及炎症因子的影响

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畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 5124-5134页

作者：王轲信吴娴龚海洲方巧玉李向臣张亚南浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室杭州311300 浙江大学动物科学学院动物分子营养学教育部重点实验室杭州310058 扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

本研究以人克隆结肠腺癌Caco-2细胞系为模型,旨在探究丁酸钠(sodium butyrate,NaB)和吲哚-3-丙酸(indole-3-propionic acid,IPA)共处理对Caco-2细胞紧密连接和炎症因子的影响。使用0.4 mmol·L^(-1)NaB和0.1 mmol·L^(-1)IPA分别和共处理Caco-2细胞24 h,检测细胞跨膜电阻(TEER)值、细胞紧密连接蛋白表达、炎症因子的基因表达和细胞上清液中炎症因子的分泌水平。结果发现,与对照组相比,NaB和IPA共处理组均显著提高TEER值(P<0.01),而NaB和IPA单独处理组TEER值无显著变化(P>0.05)。qPCR和蛋白免疫印迹结果表明,与对照组相比,共处理组显著下调了Claudin-2的mRNA相对表达量(P<0.01);与NaB单独处理组相比,共处理组显著上调了Claudin-1的mRNA相对表达量(P<0.05),并且极显著促进了Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白的表达(P<0.001);与IPA单独处理组相比,共处理组显著上调了ZO-1的mRNA相对表达量(P<0.05),并极显著提高了Claudin-1和ZO-1蛋白表达量(P<0.001)。在炎症因子方面,与对照组相比,NaB和IPA共处理组显著下调炎症因子IL-6、IL^(-1)β、IL-8及TNF-α的mRNA相对表达量(P<0.05)。ELISA结果显示,与对照组相比,共处理极显著降低了细胞上清液中IL-6、IL^(-1)β、IL-8及TNF-α的分泌量(P<0.001)。本研究表明,相比于NaB或IPA单独处理,NaB和IPA共处理可增加细胞跨膜电阻值,促进细胞间紧密连接蛋白表达并且降低促炎因子的分泌,降低了肠道通透性。综上,NaB和IPA共处理在增强上皮细胞屏障功能以及降低炎症反应方面具有更强的作用。

关键词：丁酸钠吲哚-3-丙酸紧密连接炎症因子 Caco-2细胞

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猪源携带tet(X4)基因大肠杆菌的消毒剂抗性分析

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畜牧兽医学报 2024年第12期55卷 5880-5885页

作者：潘柄霖王思楠姚国忠翟瑞东宋厚辉程昌勇雷蕾浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室、动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室杭州311300 杭州市余杭区农业农村局杭州310023

旨在分析猪源粪便样本中携带tet(X4)基因大肠杆菌的分布及其耐药性、消毒剂抗性和消毒剂抗性基因携带情况。采集浙江省杭州、诸暨、舟山生猪养殖场猪粪便样本共计440份,通过PCR检测tet(X4)基因、消毒剂基因和Enterobacterial repetitive... 详细信息

旨在分析猪源粪便样本中携带tet(X4)基因大肠杆菌的分布及其耐药性、消毒剂抗性和消毒剂抗性基因携带情况。采集浙江省杭州、诸暨、舟山生猪养殖场猪粪便样本共计440份,通过PCR检测tet(X4)基因、消毒剂基因和Enterobacterial repetitive intergenic consensus(ERIC)分型;通过16S rRNA序列鉴定细菌种属,采用微量肉汤稀释法测试菌株的耐药表型和消毒剂抗性表型。结果显示,3个地区共分离到携带tet(X4)基因的大肠杆菌117株,不同地区的tet(X4)大肠杆菌分离率为24.0%~29.5%。所有菌株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氟苯尼考、替加环素耐药率均为100%,但均对黏菌素和美罗培南敏感。菌株对次氯酸钠、过硫酸氢钾的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值较高,均为消毒剂工作浓度的1/2。与ATCC 25922相比,仅少量菌株对过氧化氢等5种消毒剂的MIC值高于标准菌株,但92.3%的菌株对苯扎溴铵的MIC值高于标准菌株。菌株所携带的消毒剂抗性基因以sugE(c)、qacF和qacEΔ1最常见,携带率分别为100%、25.6%和11.1%。ERIC分型显示117株菌株主要分为9个类群,呈现多样性。综上,携带tet(X4)基因的大肠杆菌主要优势类群在浙江省杭州、诸暨、舟山地区均有分布且均呈现多重耐药性,菌株有消毒剂抗性基因检出但对所试消毒剂的工作浓度均不耐受,养殖场可根据消毒效果选用消毒剂阻断场内多重耐药菌的传播。

关键词： tet(X4) 大肠杆菌耐药性消毒剂抗性

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细胞焦亡在动物传染性疾病中的研究进展

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中国兽医学报 2024年第9期44卷 2072-2080页

作者：张儒新梁慧美曾欢郭宸戚景怡潘嘉睿吴贝宁陈启益宋厚辉王巍赵菁华浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

细胞焦亡(pyroptosis)是由病原体入侵触发的炎性细胞程序性死亡,依赖于Caspase激活,通过经典焦亡和非经典焦亡途径实现。细胞焦亡与微生物感染引起的多种动物传染病的发生发展有关,微生物侵入机体后,细胞受到病理相关分子模式刺激,引起... 详细信息

细胞焦亡(pyroptosis)是由病原体入侵触发的炎性细胞程序性死亡,依赖于Caspase激活,通过经典焦亡和非经典焦亡途径实现。细胞焦亡与微生物感染引起的多种动物传染病的发生发展有关,微生物侵入机体后,细胞受到病理相关分子模式刺激,引起强烈的免疫反应,刺激炎症信号通路,继而激活炎性小体,引发焦亡。免疫系统已经进化出多种机制来抵抗微生物感染和调节炎症反应。先天免疫系统通过识别病原体中的微生物分子,并通过产生炎性小体和激活细胞焦亡来进行快速反应,有助于清除病原体防止感染,维持机体正常运行。充分深入研究细胞焦亡在动物传染性疾病中的致病机制及免疫逃逸机制,必将为动物传染性疾病提供新的治疗方向。

关键词：细胞焦亡炎性小体动物传染病分子机制

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镉通过Nrf2/HO-1通路诱导猪肾PK-15细胞铁死亡

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中国兽医学报 2024年第9期44卷 1992-1998页

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊吴亚王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾PK-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl_(2))对PK-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L ... 详细信息

镉(Cd)是非必需且难降解的重金属元素之一,镉蓄积可导致肾损伤。本研究旨在揭示镉暴露诱导猪肾PK-15细胞铁死亡的作用机制。首先,CCK-8法检测梯度浓度氯化镉(CdCl_(2))对PK-15细胞活力的影响,以筛选出合适的工作浓度。其次,用10μmol/L CdCl_(2)处理PK-15细胞3、6和12 h,通过比色法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白的表达水平,荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))含量。最后,用10μmol/L的HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)预处理PK-15细胞6 h,再用10μmol/L CdCl_(2)处理PK-15细胞12 h,通过相差显微镜观察细胞形态,Western blot检测铁死亡相关蛋白表达水平。结果显示,CdCl_(2)处理后细胞活力下降,LDH、MDA和Fe^(2+)水平极显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著升高(P<0.01),FTH1蛋白表达水平极显著下降(P<0.01)。与CdCl_(2)处理组相比,ZnPP可以显著改善CdCl_(2)处理诱导的猪肾PK-15细胞铁死亡。ZnPP预处理组细胞形态明显好转,Nrf2、HO-1和ALOX5蛋白表达水平极显著下降(P<0.01),FTH1蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。结果表明,镉通过Nrf2/HO-1通路引发细胞铁过载和脂质过氧化,诱导猪肾PK-15细胞铁死亡。

关键词：镉 PK-15 HO-1 铁死亡

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镉暴露诱导小鼠肝脏铁死亡的作用机制

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 543-549页

作者：郁孝强吴亚罗通旺宋圣哲王书杰宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

镉(Cd)是一种重要的环境污染物,可造成蓄积机体包括肝脏在内多种器官的损害。本研究旨在揭示Cd暴露对小鼠肝脏组织铁死亡的作用及其机制。24只8周龄ICR小鼠随机平均分为对照组和3个Cd暴露组(Cd组),Cd组每日给小鼠腹腔注射1、2、3 mg/kg... 详细信息

镉(Cd)是一种重要的环境污染物,可造成蓄积机体包括肝脏在内多种器官的损害。本研究旨在揭示Cd暴露对小鼠肝脏组织铁死亡的作用及其机制。24只8周龄ICR小鼠随机平均分为对照组和3个Cd暴露组(Cd组),Cd组每日给小鼠腹腔注射1、2、3 mg/kg的氯化镉(CdCl2),对照组注射等体积的生理盐水,连续7 d。8 d后处死小鼠,分别观察肝脏组织病理学及超微结构变化,检测血清中肝功能酶(ALT、AST)活性,肝脏组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和Cd的含量,检测铁死亡相关因子的蛋白表达水平。结果显示,Cd暴露后肝脏组织间质充血,肝脏细胞索消失、线粒体出现絮状致密物,嵴缺失空化。Cd暴露组小鼠血清ALT和AST,肝脏组织MDA和Cd含量显著升高,肝脏组织GSH-Px含量显著下降(P<0.01)。肝脏组织ACSL4、HO-1蛋白表达量极显著升高(P<0.01),GPX4、SLC7A11、FTH1、FTL蛋白的表达量则极显著下降(P<0.01)。结果表明,Cd暴露可致ICR小鼠肝脏组织铁代谢紊乱,抗氧化水平降低,脂质过氧化,从而介导肝脏发生铁死亡。本研究为进一步完善Cd暴露致肝损伤的毒性机制提供了重要的理论依据。

关键词：镉小鼠肝脏铁死亡

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CRISPR/Cas9介导的HO-1基因敲除细胞系的建立及其应用

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中国兽医学报 2024年第11期44卷 2463-2469页

作者：宋圣哲罗通旺沈灵俊王书杰郁孝强宋厚辉邵春艳浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

利用CRISPR/Cas9系统构建HO-1基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),为探究HO-1在镉诱导的PK-15细胞铁死亡中的作用及分子机制提供试验材料。设计并合成3条针对HO-1基因的sgRNA,分别连接到慢病毒载体Lenti CRISPRv2上;将构建好的慢病毒质粒转染... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统构建HO-1基因敲除的猪肾细胞系(PK-15),为探究HO-1在镉诱导的PK-15细胞铁死亡中的作用及分子机制提供试验材料。设计并合成3条针对HO-1基因的sgRNA,分别连接到慢病毒载体Lenti CRISPRv2上;将构建好的慢病毒质粒转染至人胚胎肾细胞(HEK293FT),获得重组慢病毒并感染PK-15细胞;经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得HO-1敲除的单克隆细胞系,测序及Western blot验证HO-1基因的敲除情况。用10μmol/L氯化镉(CdCl_(2))处理构建好的HO-1基因敲除的细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,利用相差显微镜观察细胞形态,采用荧光探针法检测细胞中亚铁离子(Fe^(2+))的含量。结果显示,sgRNA2编辑效率最高,获得的5株敲除细胞HO-1基因均发生了碱基插入或缺失且引起了目的基因的移码,Western blot结果显示未检测到HO-1蛋白表达,表明成功构建了敲除HO-1基因的PK-15细胞系(PK-15^(HO-1 KO))。CdCl_(2)处理后,与对照细胞相比,PK-15^(HO-1KO)细胞活力显著升高,Fe^(2+)含量显著下降,表明HO-1基因敲除后可以显著缓解镉处理引起的铁代谢异常。综上所述,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了敲除HO-1基因的PK-15细胞系,并证实HO-1在镉处理诱导PK-15细胞铁代谢异常中发挥着重要作用,为后续进一步研究HO-1在镉暴露致PK-15细胞铁死亡的调控机制奠定了基础。

关键词： HO-1 PK-15 基因敲除 CRISPR/Cas9 镉

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冠状病毒基因组非编码区调控病毒复制机制研究进展

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中国兽医学报 2025年第2期45卷 379-388,396页

作者：张静苗何海健杨帆吴雨芯周莹珊董婉玉王晓杜浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 金华职业技术大学农学院浙江金华321017

冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒,其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体,具有高度变异特性,防控难度较高,每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选... 详细信息

冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒,其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体,具有高度变异特性,防控难度较高,每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选抗病毒药物,目前研究较深入的主要是鼠冠状病毒(murine coronavirus, MHV)和2型人严重呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)。为探究猪冠状病毒的复制机制,本研究以MHV和SARS-CoV-2等冠状病毒为参考,总结了其与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)等猪冠状病毒非编码区调控病毒复制的机制。重点分析5′非编码区(5′untranslated region, 5′UTR)的保守基序及二级结构在病毒复制中的作用、3′UTR的保守结构如何调控病毒复制、病毒非编码区与宿主蛋白的相互作用调控病毒复制以及病毒非编码区变异特征等内容,为针对该类靶点的抗病毒药物和高病毒滴度疫苗候选株的开发提供理论基础。

关键词：冠状病毒非编码区病毒复制调控元件

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单增李斯特菌LPXTG蛋白Lmo0880在感染致病中的作用

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微生物学报 2024年第3期64卷 893-906页

作者：林柯辰李豪杰赵秀玲周思廖俊慧王子念金戈旋朱富鑫徐加利孙静宋厚辉邓思敏程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315000

【目的】通过构建单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)LPXTG蛋白Lmo0880的基因缺失菌株和回补菌株,探究Lmo0880在细菌生长、细胞感染和宿主感染等方面发挥的作用。【方法】利用同源重组原理构建lmo0880的基因缺失株及回补株,比较野生株... 详细信息

【目的】通过构建单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)LPXTG蛋白Lmo0880的基因缺失菌株和回补菌株,探究Lmo0880在细菌生长、细胞感染和宿主感染等方面发挥的作用。【方法】利用同源重组原理构建lmo0880的基因缺失株及回补株,比较野生株、缺失株和回补株在生长能力、细胞黏附与侵袭和胞内增殖能力等方面的差异,从而鉴定Lmo0880在单增李斯特菌感染宿主中的作用。【结果】缺失lmo0880基因后,单增李斯特菌在生长能力上无明显变化;对细胞的黏附能力无显著差异,但对细胞侵袭能力、胞内增殖能力、小鼠致病力和小鼠组织定殖能力显著降低。【结论】本研究阐明了单增李斯特菌LPXTG蛋白Lmo0880在细胞侵袭、胞内增殖和组织定殖等方面发挥的重要作用。

关键词：单增李斯特菌 LPXTG蛋白Lmo0880 宿主感染

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