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中国病理生理杂志 2021年第4期37卷 586-592页

作者：张晶陆俊宇闫学德苏凯曹冬梅章卫平海军军医大学基础医学院病理生理学教研室上海200433

目的:探讨小肠上皮细胞中转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)在果糖耐受中的作用。方法:利用Cre/loxP系统,构建了ChREBP基因的肠道特异性敲除(ChGO)小鼠模型,并利用RT-qPCR、Western blot和免疫组化等技术,在基因组、mRNA和蛋... 详细信息

目的:探讨小肠上皮细胞中转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)在果糖耐受中的作用。方法:利用Cre/loxP系统,构建了ChREBP基因的肠道特异性敲除(ChGO)小鼠模型,并利用RT-qPCR、Western blot和免疫组化等技术,在基因组、mRNA和蛋白水平对该模型的基因敲除效率和组织特异性进行了鉴定分析。结果:表型分析显示,高果糖饮食可导致ChREBP敲除小鼠出现体重降低、摄食量减少和严重肠胀气等果糖不耐受的表现。机制研究发现ChREBP-β和Max样蛋白X(Mlx)可以协同促进小肠上皮细胞果糖特异性转运子葡萄糖转运蛋白5(GLUT5)编码基因Slc2a5的转录,而ChREBP缺陷导致高果糖饮食对Slc2a5基因的转录激活作用丧失。结论:ChREBP是果糖激活小肠上皮细胞Slc2a5基因转录所必需的转录因子,对维持机体的果糖耐受性至关重要。

关键词：碳水化合物反应元件结合蛋白葡萄糖转运蛋白5 基因敲除表型分析果糖不耐受

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碳水化合物反应元件结合蛋白条件性基因敲除小鼠模型的建立及鉴定

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第二军医大学学报 2019年第2期40卷 142-148页

作者：李昊师建辉魏纯纯麻献华陈玉霞章卫平海军军医大学(第二军医大学)基础医学院病理生理学教研室上海200433

目的建立转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)的条件性基因敲除小鼠模型,为研究ChREBP的体内生物学功能提供技术手段。方法和结果利用Cre/loxP基因打靶策略,通过构建基因打靶载体和基于胚胎干细胞(ES细胞)的基因同源重组,在ChR... 详细信息

目的建立转录因子碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)的条件性基因敲除小鼠模型,为研究ChREBP的体内生物学功能提供技术手段。方法和结果利用Cre/loxP基因打靶策略,通过构建基因打靶载体和基于胚胎干细胞(ES细胞)的基因同源重组,在ChREBP基因第8外显子的两侧分别引入loxP位点;将打靶成功的ES细胞显微注射至小鼠囊胚,然后植入假孕雌鼠子宫获得嵌合鼠,进一步获得可种系传代的ChREBP?ox/+小鼠;将ChREBP?ox/+小鼠与Alb-Cre小鼠交配,获得ChREBP的肝脏特异性基因敲除小鼠。结论建立了ChREBP条件性基因敲除小鼠模型,为揭示不同组织中ChREBP的生理功能和病理学意义提供了重要手段。

关键词：碳水化合物反应元件结合蛋白果糖代谢脂代谢基因敲除小鼠基因打靶

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ZBTB20基因干扰腺病毒的制备及功能鉴定

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海军军医大学学报 2023年第3期44卷 292-297页

作者：林洁袁镜皓麻献华万晓庆章卫平海军军医大学(第二军医大学)基础医学院病理生理学教研室上海200433 温州医科大学口腔医学院温州325027

目的制备靶向锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)基因的干扰腺病毒。方法根据ZBTB20基因序列设计人鼠通用的干扰序列,定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-U6-GFP的Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点,获得重组穿梭载体pShuttle-shZBTB20。将PmeⅠ酶切... 详细信息

目的制备靶向锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)基因的干扰腺病毒。方法根据ZBTB20基因序列设计人鼠通用的干扰序列,定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-U6-GFP的Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点,获得重组穿梭载体pShuttle-shZBTB20。将PmeⅠ酶切线性化的重组穿梭载体pShuttle-shZBTB20导入含有腺病毒载体pAdEasy-1的BJ5183细菌,使其同源重组产生重组腺病毒载体pAd-shZBTB20。用PacⅠ酶切线性化该重组腺病毒载体,转染293A细胞包装腺病毒颗粒,用半数组织培养物感染量(TCID50)法鉴定病毒滴度,并在人肝癌Huh7细胞和小鼠肝脏组织中验证该病毒的干扰效率。结果成功构建了人鼠通用的ZBTB20基因干扰腺病毒载体,获得高活性的ZBTB20干扰腺病毒Ad-shZBTB20,滴度为3.2×10^(10)IU/mL。该干扰腺病毒感染人肝癌细胞株96 h可使ZBTB20m RNA降低至对照的20%;小鼠尾静脉注射重组病毒(1×10^(10)VG/只)7 d后可下调肝脏内源性ZBTB20蛋白的表达,并使其靶基因甲胎蛋白mRNA表达水平升高约203倍。结论所制备的ZBTB20干扰腺病毒能有效抑制人和小鼠ZBTB20的表达及其生物学效应。

关键词： ZBTB20 RNA干扰重组腺病毒甲胎蛋白

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炎症介质在高原暴露下血脑屏障通透性改变中的作用及相互关系

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中国应用生理学杂志 2007年第3期23卷 281-285页

作者：周其全王静汪云利李爱冬程丽第三军医大学高原军事医学系病理生理与高原生理学教研室重庆400038 成都医学院基础医学部病理学与病理生理学教研室成都610083

目的:探讨炎症介质在高原暴露下血脑屏障通透性改变中的作用及与脑含水量的关系。方法:应用放射免疫法测定脑组织内TNFα、ET含量,化学法测定脑内NO含量,应用伊文思蓝(EB)透过率测定血脑屏障(BBB)通透性,脑湿干比重法测定脑含水量百分... 详细信息

目的:探讨炎症介质在高原暴露下血脑屏障通透性改变中的作用及与脑含水量的关系。方法:应用放射免疫法测定脑组织内TNFα、ET含量,化学法测定脑内NO含量,应用伊文思蓝(EB)透过率测定血脑屏障(BBB)通透性,脑湿干比重法测定脑含水量百分率。结果:高原暴露下,大鼠脑内TNFα、ET、NO含量随着海拔增高而逐渐增高,随着暴露时间延长而逐渐增高,以暴露于5000m的高海拔区第9d增高最明显。与此同时,脑内EB含量和脑内含水量逐渐增高。脑内TNFα、ET、NO含量与脑含水量之间有明显的正相关关系。结论:TNFα、ET、NO在BBB通透性增高中起了重要作用,是高原环境下BBB通透性增高的重要因素。

关键词：高海拔区血脑屏障通透性炎症介质脑含水量

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基于荧光标记迷走神经元转基因小鼠的袖状胃切除术动物模型建立

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中华实验外科杂志 2020年第9期37卷 1742-1745页

作者：张隆江张新张海麻献华张景辉刘兆瑞郑瑞申晓军印慨海军军医大学附属长海医院普外科上海200082 海军军医大学基础医学院病理生理学教研室上海200433

目的建立基于迷走神经元荧光标记的高脂饮食诱导肥胖(DIO)小鼠和袖状胃切除(SG)小鼠模型。方法选取购自美国Jackson实验室10周龄健康的无特定病原体级Phox2b-Cre-tdTomato转基因小鼠。获得标记基因的小鼠随机分为两组,分别给予高脂饮食... 详细信息

目的建立基于迷走神经元荧光标记的高脂饮食诱导肥胖(DIO)小鼠和袖状胃切除(SG)小鼠模型。方法选取购自美国Jackson实验室10周龄健康的无特定病原体级Phox2b-Cre-tdTomato转基因小鼠。获得标记基因的小鼠随机分为两组,分别给予高脂饮食和正常饲料喂养,获得DIO小鼠。25只DIO小鼠依据随机数字表法分为3组分别接受袖状胃切除术(SG,10只),袖状胃切除-迷走神经离断术(SG+TV,10只)和假手术配对喂养(SH,5只)。观察围手术期(术后2、8、12周)各组小鼠体质量和空腹糖水平变化,免疫组织化学检查肠脑轴各器官迷走神经分布情况。计数资料采用t检验。结果各组Phox2b-Cre-tdTomato杂合子小鼠的胃、小肠、结状神经节与后脑区均可见红色荧光染色阳性表达。与SG小鼠相比,SG+TV组小鼠术后的胃、肠、结状神经节和后脑区荧光表达均减弱。术后12周,与SH组小鼠相比,SG和SG+TV小鼠术后的体重和血糖水平均有明显的下降趋势,且随时间延长下降幅度逐步增加,SG和SG+TV小鼠与SH小鼠相比体重和空腹血糖差别有统计学意义。3组小鼠体重分别为(56.7±4.4)、(24.5±7.7)、(36.0±3.3)g,空腹血糖分别为(9.1±0.1)、(4.1±0.4)、(5.8±0.4)mmol/L(t=4.652、4.025、16.050、10.240,P<0.01)。与SG组小鼠相比,SG+TV组小鼠在术后早期(8W内)体重和血糖水平未见明显差异,但8W后SG-TV组小鼠的体重和血糖的下降幅度有所缩小,体重下降(1.0±0.7)g,血糖下降(0.3±0.4)mmol/L,但差别无统计学意义(t=0.180、4.789,P>0.05)。SH组小鼠在术后12周体重和血糖水平基本恢复术前水平。在总体重丢失方面,SH小鼠在术后12周总体重丢失现象开始消失,而SG与SG+TV组在术后12周的总体重丢失分别为(24.3±6.8)g和(25.2±4.2)g;与SH小鼠[(3.8±0.8)g]比较,差异有统计学意义(t=4.031、7.131,P<0.01);术后12周,SG与SG+TV组的总体重丢失比例分别为(49.1±1.0)%和(49.2±1.1)%,与SH组小鼠[(6.2±0.9)%]比较,差别均具有统计学意义(t=50.000、44.290,P<0.01)。结论本研究成功建立了荧光标记迷走神经元的DIO小鼠和SG小鼠模型,初步研究表明该模型可以显示迷走神经纤维在肠脑轴内的分布,为进一步VANs相关信号通路的表达和功能奠定实验基础。

关键词：袖状胃切除术模型荧光标记迷走神经元

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袖状胃切除术影响肥胖小鼠迷走神经传入神经元激素受体的表达

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中华实验外科杂志 2022年第2期39卷 235-237页

作者：张新刘兆瑞张隆江张海麻献华张景辉申晓军印慨海军军医大学附属长海医院普外科上海200082 海军军医大学基础医学院病理生理学教研室上海200433

目的探讨袖状胃切除术(SG)对迷走神经传入神经元(VANs)食欲相关激素受体表达水平的影响。方法采用10周龄健康的小鼠给予高脂饮食喂养, 获得12只饮食诱导肥胖(DIO)小鼠, 采用随机数字表法随机分配至SG组和假手术配对组, 每组6只。观察两... 详细信息

目的探讨袖状胃切除术(SG)对迷走神经传入神经元(VANs)食欲相关激素受体表达水平的影响。方法采用10周龄健康的小鼠给予高脂饮食喂养, 获得12只饮食诱导肥胖(DIO)小鼠, 采用随机数字表法随机分配至SG组和假手术配对组, 每组6只。观察两组小鼠体质量和空腹血糖水平变化。6周后, 无菌操作取出颈部迷走神经节, 体外原代培养迷走神经元细胞, 利用神经元特异标志物MAP2鉴定神经元的纯度, 并用免疫组织化学和Western blot方法检测迷走神经元中的抑制食欲激素受体CCK1-R、LepR和GhR的表达情况。计数资料采用t检验。结果术后6周, SG小鼠的体重和血糖水平明显低于对照组, 差异有统计学意义[(31.6±3.4) g比(49.8±2.7) g, t=-8.400, P<0.01;(5.4±0.24) mmol/L比(9.5±0.5) mmol/L, t=-14.406, P<0.01]。体外培养的迷走神经元形态饱满, 形成密集交错的神经元网络。神经元特异标志物鉴定后, 纯度达到(97.01+0.23)%。细胞传代后生长情况及增殖能力良好。SG后迷走神经VANs的CCK1-R与LepR表达均高于假手术组(CCK1-R, 1.92±0.16比0.81±0.12, t=10.626, P<0.001;LepR, 1.72±0.28比0.89±0.09, t=5.395, P<0.05), 而GhR表达低于假手术组(0.77±0.11比1.07±0.11, t=-5.180, P<0.001)。结论 SG术后DIO小鼠VANs抑制食欲激素受体表达增加, 而促食欲激素受体表达减少, 提示SG可以改变VANs表型。

关键词：迷走神经原代培养胆囊收缩素受体瘦素受体

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Salusins及其心血管效应

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生理科学进展 2013年第3期44卷 164-168页

作者：任安经林丽严晓红袁文俊第二军医大学病理生理学教研室上海200433 第二军医大学生理学教研室上海200433 武汉大学基础医学院生理学系武汉430071 宁夏医科大学基础医学院生理学系银川750004

Salusins是一类新发现的心血管活性肽,包括由28个氨基酸组成的salusin-α和20个氨基酸组成的salusin-β。Salusins广泛分布于人和大鼠的多种组织和器官,具有降低血压、减慢心率、抑制心肌收缩、减轻心脏缺血损伤、促进心肌细胞肥大和血... 详细信息

Salusins是一类新发现的心血管活性肽,包括由28个氨基酸组成的salusin-α和20个氨基酸组成的salusin-β。Salusins广泛分布于人和大鼠的多种组织和器官,具有降低血压、减慢心率、抑制心肌收缩、减轻心脏缺血损伤、促进心肌细胞肥大和血管平滑肌细胞增殖等一系列心血管效应。值得注意的是,作为由同一前体产生的两种多肽,salusin-α和salusin-β在动脉粥样硬化的发生发展中具有相反的作用。

关键词： salusins 心脏血管动脉粥样硬化

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高通量测序分析类风湿关节炎患者外周血单个核细胞circRNAs表达谱差异

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免疫学杂志 2019年第3期35卷 262-268页

作者：杨旋张梦洁张蓓青岛大学基础医学院免疫学系陆军军医大学病理生理学教研室

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中环状RNA (circRNA)表达谱的差异,并结合临床验证筛选出可辅助RA诊断的分子标志物。方法采用高通量测序技术,检测4例RA患者和3例健康对照者PBMCs中circRNA和mRNA表达;基因聚类分... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中环状RNA (circRNA)表达谱的差异,并结合临床验证筛选出可辅助RA诊断的分子标志物。方法采用高通量测序技术,检测4例RA患者和3例健康对照者PBMCs中circRNA和mRNA表达;基因聚类分析差异表达的circRNAs,KEGG pathway分析差异表达的mRNAs;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法在32例RA患者和20例健康对照者中验证部分差异表达circRNAs,结合ROC曲线分析其作为RA诊断分子标志物的潜力。结果高通量测序结果显示,RA组和健康对照组中共有71种显著差异表达的circRNAs,其中41种上调,30种下调,生物信息学分析显示,涉及的通路多与炎症和转录活性相关。多样本qRT-PCR验证结果显示hsa_circ_0000396和hsa_circ_0130438在RA患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照组(P<0.05),ROC曲线分析进一步表明显示hsa_circ_0000396有望成为RA诊断分子标志物。结论在RA患者PBMCs中存在差异表达的circRNAs,它们在RA的发生发展过程中可能起调控作用,其中hsa_circ_0000396有成为RA诊断分子标志物的潜能。

关键词：高通量测序类风湿关节炎环状RNA 外周血单个核细胞 hsa_circ_0000396

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富含亮氨酸重复序列蛋白家族成员8A的分子特点与生物学作用

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生理科学进展 2018年第6期49卷 447-450页

作者：张溧昀杨佳琪周京军第四军医大学空军军医大学基础医学院生理与病理生理学教研室西安710032

富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员8A(leucine-rich repeat-containing 8A,LRRC8A)是容积敏感性阴离子通道的关键组分,通道的通透性与阴离子/渗透物选择性受该家族其它成员的调控。研究表明,LRRC8A异常不但引起淋巴细胞发育障碍,而且是... 详细信息

富含亮氨酸重复序列的蛋白家族成员8A(leucine-rich repeat-containing 8A,LRRC8A)是容积敏感性阴离子通道的关键组分,通道的通透性与阴离子/渗透物选择性受该家族其它成员的调控。研究表明,LRRC8A异常不但引起淋巴细胞发育障碍,而且是肿瘤细胞顺铂耐药及脑缺血再灌注损伤的原因。本文回顾了LRRC8A复合体通道的电生理学、药理学特性及其在相关疾病中的作用。

关键词：调节性容积回缩容积敏感性阴离子通道细胞体积淋巴细胞脂肪细胞

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肿瘤相关基因的改变未必都促癌

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中华病理学杂志 2013年第11期42卷 791-792页

作者：王瑞安李增山第四军医大学西京医院病理科基础医学院病理学与病理生理学教研室西安710032

现在是分子生物学的时代,肿瘤的研究总离不了各种基因在肿瘤中的表达、相互作用及对肿瘤发生发展的影响.英国著名学者John Cairns有段话说得很有意思,＂肿瘤研究是与生物学共同发展的,人们对肿瘤的认识不可避免地要打上那个时代的烙印.... 详细信息

现在是分子生物学的时代,肿瘤的研究总离不了各种基因在肿瘤中的表达、相互作用及对肿瘤发生发展的影响.英国著名学者John Cairns有段话说得很有意思,＂肿瘤研究是与生物学共同发展的,人们对肿瘤的认识不可避免地要打上那个时代的烙印.在不同的时期,人们总会用当时那些最时髦的词语来描述肿瘤、归纳肿瘤的属性[1].＂回想起来,确实如此.在20世纪70和80年代中,当微量元素不足致病说盛行的时候,人们曾经把北方一些省份食管癌的高发归因于钼的缺乏;癌基因发现后,人们把肿瘤归因于癌基因的突变;在细胞凋亡研究时髦的时候,都认为是细胞凋亡的减少;细胞周期研究获得诺贝尔奖之后,人们认为肿瘤是细胞增殖失控所导致;当microRNA（miRNA）火热的时候,人们又把肿瘤当做miRNA病;如今好像又认为是与自噬有关的病.总体上看,还是哲学上的定律在起作用：我们对肿瘤的认识,在不断的否定中.

关键词：肿瘤相关基因促癌分子生物学肿瘤发生发展细胞增殖失控细胞凋亡 miRNA 相互作用

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