检索结果-内蒙古大学图书馆

中华血液学杂志 2007年第4期28卷 250-254页

作者：黄冬爱王小英王政周代锋蔡望伟海南医学院生物化学教研室海口 571101 海南医学院分子生物学重点实验室

目的分析海南省29例汉族和42例黎族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者的G6PD基因突变类型。方法采用突变特异性扩增系统法筛查海南省人群中G6PD缺乏症的G1376T、G1388A和A95G三种常见突变位点；运用DNA测序技术鉴定未知突变标本G6P... 详细信息

目的分析海南省29例汉族和42例黎族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者的G6PD基因突变类型。方法采用突变特异性扩增系统法筛查海南省人群中G6PD缺乏症的G1376T、G1388A和A95G三种常见突变位点；运用DNA测序技术鉴定未知突变标本G6PD基因外显子2至外显子13的基因突变类型。结果在29例汉族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 11例（37．9％）、G1388A 2例（6．9％）、G1376T复合G1388A突变1例（3．4％）和G1376T复合A95G突变1例（3．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占汉族G6PD缺乏症患者的51．7％；在42例黎族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 25例（59．5％）、G1388A 6例（14．3％）、A95G 2例（4．8％）、G1376T复合G1388A突变4例（9．5％）和G1376T复合A95G突变1例（2．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占黎族G6PD缺乏症患者的90．5％；18例（汉族14例，黎族4例）未发现G1376T、G1388A、A95G。对这18例标本的测序发现：1例G6PD内含子5第636或637位核苷酸T缺失（IVS-5 636或637 T del）突变；2例C1311T复合IVS-11 T93C突变，其余标本未发现突变。结论G1376T和G1388A是海南省人群中最常见的基因突变型；在我国人群中存在IVS-5636或637 T del突变型；在海南省黎族人群中首次报道G1376T／A95G复合突变型。

关键词：葡糖磷酸脱氢酶葡糖磷酸脱氢酶缺乏基因转变

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甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡

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生物化学与生物物理进展 2011年第3期38卷 227-238页

作者：朱明月符史干李孟森谢协驹李刚海南医学院分子生物学重点实验室海口571159 海南医学院生理学教研室海口571159 海南医学院肿瘤研究所海口570102 海南医学院病理生理学教研室海口571159 北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京100191

研究甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)对肝癌细胞内PTEN/AKT信息通路信号传递的影响.用Western blotting法分析全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)处理人肝癌Bel 7402和HepG2细胞24 h后PTEN表达的变化.免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用.激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN在细胞共定位.RNA干扰(RNAi)技术抑制AFP表达,再用ATRA处理24 h后检测细胞内PTEN表达的变化,并分析蛋白激酶B(AKT)的磷酸化.用pcDNA3.1质粒和人afp基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌HLE细胞.结果显示,人肝癌Bel 7402和HepG2细胞均有PTEN的表达,ATRA(160μmol/L)处理24 h后能促进这些细胞的PTEN表达.Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合.共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆.干扰AFP表达后,PTEN表达明显提高.抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内PTEN的表达,并能抑制AKT的磷酸化.转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内有AFP表达,并与PTEN结合,且发现pcDNA3.1-afp载体能增加AKT的磷酸化[p-AKT(Ser473)],对抗ATRA抑制HLE细胞增殖.研究的结论是:肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活AKT信息通路.胞浆内的AFP是肝癌细胞耐受ATRA的重要因子.

关键词：甲胎蛋白 PTEN 肝癌细胞 PI3K/AKT信号通路

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中华肝脏病杂志 2010年第10期18卷 745-750页

作者：林尤仕朱明月周升谢协驹李孟森海南医学院附属医院检验科海口570102 海南医学院分子生物学重点实验室海南医学院病理生理学教研室海南医学院肿瘤研究所

目的研究甲胎蛋白（AFP）对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体-2（DR5）表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用.方法用Western blot法分析全反式维甲酸（ATRA）处理人肝癌细胞株Bel 7402细胞24 h后DR5表达的变化;免... 详细信息

目的研究甲胎蛋白（AFP）对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体-2（DR5）表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用.方法用Western blot法分析全反式维甲酸（ATRA）处理人肝癌细胞株Bel 7402细胞24 h后DR5表达的变化;免疫共沉淀（Co-IP）技术研究AFP与维甲酸受体（RAR）-β相互作用;激光共聚焦显微镜观察AFP与RAR-β的细胞共定位; RNA干扰技术抑制Bel 7402细胞AFP表达,再用ATRA处理24h后检测细胞内DR5表达的变化;用pcDNA3.1质粒和人AFP基因连接构建表达AFP的载体（称为pcDNA3.1-afp）,然后转染到不表达AFP的人肝癌细胞株HLE细胞;细胞生长状况用四甲基偶氮唑盐法检测.组间比较用f检验进行统计学分析.结果 Bel 7402和HLE细胞低表达DR5,ATRA（160μmol/L）处理24h后能促进肝癌细胞DR5表达; Co-IP技术研究显示AFP能与RAR-β结合;共聚焦显微镜观察发现AFP与RAR-β共定位于细胞质;干扰AFP表达后,Bel 7402细胞的DR5表达明显提高,抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内DR5的表达,并增加Bel 7402细胞对TRAIL的敏感性;转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内的AFP能与RAR-β结合,并发现pcDNA3.1-afp载体能对抗TRAIL诱导HLE细胞凋亡.结论 Bel 7402细胞内表达的AFP具有抑制DR5表达的生物学功能;AFP可能通过抑制RAR-β入核调节DR5的表达;细胞内高表达的AFP是导致Bel 7402细胞耐受TRAIL诱导细胞凋亡的重要原因.

关键词：癌肝细胞甲胎蛋白 TRAIL受体2 细胞凋亡

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乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐受的分子机制

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肿瘤防治研究 2010年第9期37卷 1077-1080,1087页

作者：朱明月李孟森海南医学院分子生物学重点实验室海口571101

0引言肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）是淋巴细胞分泌的一种能诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子,但是由于TNF对正常细胞也有同样的细胞毒性,因而限制了TNF的临床应用。1996年Pitti等[1]研究发现另外一种能特异性诱导肿瘤细胞凋亡... 详细信息

0引言肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）是淋巴细胞分泌的一种能诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子,但是由于TNF对正常细胞也有同样的细胞毒性,因而限制了TNF的临床应用。1996年Pitti等[1]研究发现另外一种能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的TNF家族成员,

关键词：乳腺癌肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞凋亡药物耐受

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甲胎蛋白对人肝癌Bel 7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2009年第2期30卷 159-168页

作者：李孟森詹志农周升刘新华李刚海南医学院分子生物学重点实验室海南海口571101 北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京100083 海南医学院检验医学系海南海口571101

目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8在Bel 7402细胞内的共定位;... 详细信息

目的研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用。方法激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8在Bel 7402细胞内的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与caspase-3、caspase-8的相互作用;RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达,并用Western blotting检测RNAi干扰肝癌Bel 7402细胞内AFP表达的效果;用蛋白酶活性比色法检测AFP对肝癌细胞caspase-3、caspase-8活性的影响;MTT法分析干扰AFP表达30 h后再给予TRAIL(2 nmol/L)处理24 h,Bel 7402细胞的生长情况,并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况。结果共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase-3、caspase-8主要表达于Bel 7402细胞的细胞质,发现AFP能与caspase-3共定位于细胞质,但与caspase-8在细胞质的共定位可能性很小;Co-IP技术研究发现AFP能与caspase-3结合,但不能与caspase-8结合;2 nmol/L剂量的TRAIL单独处理Bel 7402细胞并不能显著改变caspase-3活性,但能提升caspase-8活性,而用全反式维甲酸(ATRA)40μmol/L加TRAIL(2 nmol/L)处理时,则能提高Bel 7402细胞caspase-3活性;干扰AFP表达后,单独用TRAIL(2 nmol/L)也能激活caspase-3,而干扰AFP表达前后对caspase-8活性没有显著性改变;MTT分析发现,2 nmol/L剂量的TRAIL对Bel 7402细胞的生长并没有显著性抑制作用,但是干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能明显抑制Bel 7402细胞生长(抑制率为48.4%);荧光显微镜观察表明,干扰AFP表达后TRAIL(2 nmol/L)能诱导Bel 7402细胞凋亡。结论AFP选择性抑制caspase-3活性是阻断人肝癌Bel7402细胞内凋亡信息传递的重要机制,也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节。

关键词：甲胎蛋白肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体肿瘤耐药肝癌细胞 caspase信息通路

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人CLDN10a启动子的克隆及活性分析

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基因组学与应用生物学 2022年第7期41卷 1567-1578页

作者：周雯杨智时凤敏符碧薇吴岩唐敏郑琳王青松海南医学院组织胚胎学教研室海口571199 海南医学院形态学实验室海口571199 海南医学院生物技术专业实验室海口571199 海南医学院生物化学与分子生物学教研室海口571199

CLDN基因家族编码构成细胞间紧密连接的主要跨膜蛋白Claudins,在维持细胞极性、信号转导和恶性肿瘤复发转移中发挥重要作用。CLDN10基因属于CLDN家族,有包括CLDN10a在内的多个转录本。本研究利用多种生物信息学方法分析CLDN10a的5′侧... 详细信息

CLDN基因家族编码构成细胞间紧密连接的主要跨膜蛋白Claudins,在维持细胞极性、信号转导和恶性肿瘤复发转移中发挥重要作用。CLDN10基因属于CLDN家族,有包括CLDN10a在内的多个转录本。本研究利用多种生物信息学方法分析CLDN10a的5′侧翼序列的特征和转录因子结合位点,采用基因合成、PCR扩增和分子克隆构建5′缺失的不同长度的CLDN10a启动子荧光素酶报告基因载体,瞬时转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测不同长度片段的启动子活性。生物信息学分析结果显示,CLDN10a的上游转录调控区序列(-2000~+460 bp)含有TATA box、GC box和CAAT box,存在1个CpG岛,有4个启动子位置,有1个RNA聚合酶Ⅱ核心启动子;MatInspector和Jaspar分析发现,有75种可能的转录因子结合位点(评分≥0.99)。PCR和测序结果显示,成功构建了6个不同长度的CLDN10a启动子的双荧光素酶报告基因质粒。荧光素酶活性检测表明,-1890~-1100 bp、-1000~-890 bp、-890~-150 bp和-150~+460 bp是人CLDN10a启动子的主要活性区域,-150~+460 bp包含CLDN10a的核心启动子区域。本实验为进一步研究CLDN10基因的表达及调控机制提供了依据。

关键词： CLDN10 启动子双荧光素酶报告基因系统生物信息学

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慢病毒-HBx表达载体的构建及其在人正常肝细胞系Chang liver的稳定表达

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世界华人消化杂志 2015年第28期23卷 4482-4489页

作者：鲁琰朱明月张雪儿李伟董栩陈栘林波郭峻莉李孟森海南医学院分子生物学重点实验室海南省肿瘤发生与干预重点实验室海南省海口市571199 海南医学院海南医学院肿瘤研究所海南省海口市570102

目的:构建乙型肝炎病毒X基因(hepatitis B virus x,HBx)慢病毒表达载体,建立稳定表达HBx蛋白的人正常肝细胞系Chang liverHBx.方法:应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法从质粒中扩增HBx基因,并克隆到慢病毒p EB-3xfl... 详细信息

目的:构建乙型肝炎病毒X基因(hepatitis B virus x,HBx)慢病毒表达载体,建立稳定表达HBx蛋白的人正常肝细胞系Chang liverHBx.方法:应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法从质粒中扩增HBx基因,并克隆到慢病毒p EB-3xflag-GP-Puro载体上,经PCR、酶切和测序鉴定正确后经慢病毒包装感染人肝细胞Chang liver,再用嘌呤霉素筛选出稳定表达HBx蛋白的细胞株,最后用免疫荧光和Western blot技术检测HBx蛋白的表达.结果:酶切鉴定和基因测序证实HBx基因成功克隆到慢病毒表达载体上,重组慢病毒经包装纯化后获得滴度为1×108 TU/m L,用包装好的重组慢病毒感染人肝细胞Chang liver,经嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株Chang liver-HBx,利用免疫荧光和Western blot技术检测发现细胞株Chang liver-HBx可稳定表达HBx蛋白.结论:成功构建了HBx的重组慢病毒表达载体,获得了稳定表达HBx的Chang liver细胞系Chang liver-HBx,为进一步研究HBx诱导正常肝细胞恶性转化提供细胞模型.

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白 Chang liver细胞慢病毒载体

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狂犬病毒pVax-G/N融合基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

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中国人兽共患病学报 2012年第8期28卷 776-780页

作者：王政王小英马文丽李孟森海南医学院生物技术专业实验室海口571199 南方医科大学基因工程研究所广州510515 海南医学院分子生物学重点实验室海口571199

目的构建狂犬病病毒G基因和N基因的融合表达载体,导入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,为口服基因疫苗的制备打下基础。方法以质粒pVax-G为模板扩增狂犬病毒G和N基因,经连接后与酿酒酵母表达载体pYes2连接,测序鉴定后转入酿酒酵母表达菌株... 详细信息

目的构建狂犬病病毒G基因和N基因的融合表达载体,导入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,为口服基因疫苗的制备打下基础。方法以质粒pVax-G为模板扩增狂犬病毒G和N基因,经连接后与酿酒酵母表达载体pYes2连接,测序鉴定后转入酿酒酵母表达菌株INVScI诱导表达pVax-G/N融合蛋白。结果融合基因pVax-G/N测序结果与预期完全符合,经过半乳糖诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,结果表明诱导表达成功。结论成功构建和表达了融合表达载体pYes2-pVax-G/N,为制备以酿酒酵母为运送载体的口服狂犬病病毒疫苗奠定基础。

关键词：狂犬病病毒酿酒酵母口服基因疫苗

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海南汉族人群中α和β纤维蛋白原基因核苷酸多态性及其单倍型与缺血性脑卒中的关联分析

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中华医学遗传学杂志 2006年第3期23卷 316-319页

作者：梁亮孙川廖小平肖锋陈晓丹黄仕雄汤小兰文国强龙志刚王小英刘国勋程爽蔡望伟海南医学院生化教研室海口571101 海南省人民医院神经内科海南医学院附属医院检验科海口571101 海南医学院流行病学教研室海口571101 海南医学院分子生物学实验室海口571101 广东医学院附属医院血液研究室

目的研究α纤维蛋白原基因的TaqⅠ多态性和β纤维蛋白原基因-455G/A、-249C/T、-148C/T、+1689T/G、βBsmAⅠG/C、448G/A、BclⅠG/A、HinfⅠA/C单核苷酸多态性及其单倍型与缺血性脑卒中的关系。方法用比浊法测定160例海南籍缺血性脑卒中... 详细信息

目的研究α纤维蛋白原基因的TaqⅠ多态性和β纤维蛋白原基因-455G/A、-249C/T、-148C/T、+1689T/G、βBsmAⅠG/C、448G/A、BclⅠG/A、HinfⅠA/C单核苷酸多态性及其单倍型与缺血性脑卒中的关系。方法用比浊法测定160例海南籍缺血性脑卒中和130名海南籍对照个体的血浆纤维蛋白原浓度,用PCR限制性片段长度多态法确定基因型,用EH+程序分析核苷酸多态性的连锁不平衡关系及单倍型,用卡方检验分析病例组和对照组的等位基因频率、基因型频率及单倍型频率的差异。结果-455G/A、-148C/T、448G/A多态性的基因型频率、等位基因频率在病例组和对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01),其余6个核苷酸多态性的基因型频率、等位基因频率在病例和对照组间的差异无统计学意义(P>0.05),A-455、T-148、A448携带者患缺血性脑卒中的相对危险度比非携带者分别大2.46倍、2.30倍和2.08倍。连锁不平衡分析未发现所分析的区域内存在单倍型板块。9个位点构建的单倍型在病例组和对照组之间的差异无统计学意义,以4个位点构建的单倍型中,某些单倍型在病例组和对照组之间的差异有统计学意义,对照组中某些携带G-455、C-148、G448位点的单倍型的频率高于病例组,而病例组中某些携带A-455、T-148、A448位点的单倍型的频率高于对照组。结论多个位点和单倍型分析的结果提示β纤维白原455G/A、-148C/T、448G/A可能是海南汉族人群中与缺血性脑卒中关联的危险因素。

关键词：纤维蛋白原核苷酸多态性缺血性脑卒中连锁不平衡分析单倍型

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CT灌注成像结合全肝增强扫描对41例中晚期肝癌患者行TACE疗效的评价

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临床放射学杂志 2013年第12期32卷 1734-1738页

作者：何二霞聂忠仕朱明月林海锋王琳张英辉林志东李孟森海南省农垦总医院肿瘤内科海口570311 海南省农垦总医院放射科海口570311 海南医学院海南省肿瘤发生和干预重点实验室海南医学院分子生物学重点实验室海口571199

目的评价CT灌注成像结合全肝增强扫描在中晚期肝癌患者行导管动脉化疗栓塞术(TACE)疗效的价值。方法 41例中晚期肝癌患者行TACE术后4周再行CT灌注扫描,计算肝血流量、肝血容量、平均通过时间、肝动脉分数及表面通透性等参数及基线图像,... 详细信息

目的评价CT灌注成像结合全肝增强扫描在中晚期肝癌患者行导管动脉化疗栓塞术(TACE)疗效的价值。方法 41例中晚期肝癌患者行TACE术后4周再行CT灌注扫描,计算肝血流量、肝血容量、平均通过时间、肝动脉分数及表面通透性等参数及基线图像,并于灌注扫描后即行全肝增强扫描。结果根据肝癌行TACE术后基线图像显示碘油在肿瘤区域的沉积形态,观察到在41患者中,碘油完全填充型1例、缺损型或环形10例、簇集型25例及稀少型5例;与肝癌再次行TACE治疗时肝动脉数字减影血管造影结果比较,两者诊断吻合率100%。各灌注参数显示碘油沉积区域肝癌组织血流灌注消失;非碘油沉积区域与正常肝组织比较,肝血流量、肝血容量及平均通过时间等参数差异均有统计学意义(P<0.01),而肝动脉分数及表面通透性等参数差异无统计学意义(P>0.05)。观察结果显示,全肝增强扫描可弥补CT灌注成像覆盖范围较小,无法全面了解全肝碘油填充情况的缺点;全肝增强扫描可提供肝癌及子灶大小、形态、密度、强化程度以及扫描范围其他脏器有无异常,是否有腹腔淋巴结转移等详细的临床资料。结论 CT灌注成像结合全肝增强扫描可判断中晚期肝癌患者行TACE疗效,对进一步治疗中晚期肝癌具有重要的临床指导价值。

关键词：中晚期肝癌经导管动脉化疗栓塞术 CT灌注成像全肝增强扫描

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