检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1380-1387页

作者：黄婷郑晓晗钟远吉魏艳召魏绪芳曹旭东冯晓丽赵振强海南医学院第一附属医院神经内科海南省海口市570100 海南医学院海南省海口市570100 海南省热带脑科学研究与转化重点实验室海南省海口市570100 渥太华大学加拿大渥太华K1N6N5

背景:巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一种具有多效性作用的细胞因子,可以在不同类型干细胞中自分泌并且能调控细胞的增殖、分化和迁移。课题组前期研究证实人胚胎干细胞自分泌MIF,且在培养液中浓... 详细信息

背景:巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一种具有多效性作用的细胞因子,可以在不同类型干细胞中自分泌并且能调控细胞的增殖、分化和迁移。课题组前期研究证实人胚胎干细胞自分泌MIF,且在培养液中浓度基本固定。然而,MIF是否参与了人胚胎干细胞的存活、增殖和分化尚不清楚。目的:探究MIF对人胚胎干细胞存活、增殖和分化的作用。方法:(1)培养人胚胎干细胞H9,CCK-8法检测并绘制细胞生长曲线,采用酶联免疫吸附法定量检测培养基中MIF水平。(2)为了明确外源性MIF对人胚胎干细胞存活、增殖的影响,分为:对照组,细胞在干细胞培养基中正常培养;外源性MIF组,在干细胞培养基中分别添加30,100,300 ng/m L的MIF;MIF抑制剂ISO-1组,在干细胞培养基中分别添加2,7,21μmol/L的ISO-1;MIF+ISO-1组,在不同浓度ISO-1组中分别添加100 ng/m L MIF,采用CCK-8法检测上述各组细胞活力。(3)为进一步阐明MIF基因对人胚胎干细胞存活、增殖的影响,采用CRISPRCas9技术构建MIF敲除的H9细胞系,观察建系情况。(4)为了明确高浓度MIF对人胚胎干细胞初步分化是否有影响,在培养基中分别添加100 ng/m L MIF和100 ng/m L CXCR4中和抗体,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)、免疫细胞荧光、蛋白质印迹法(Western blot)检测干细胞自我更新因子(KLF4、c-MYC、NANOG、OCT4、SOX2)及分化转录因子(FOXA2、OTX2)的表达水平。结果与结论:(1)人胚胎干细胞H9的对数生长期为3-6 d,正常生长的情况下自分泌MIF水平约为20 ng/m L,与细胞量无关;(2)与对照组相比,添加不同质量浓度MIF对人胚胎干细胞的增殖无影响(P>0.05);ISO-1明显抑制人胚胎干细胞的增殖,ISO-1浓度越大,抑制越明显(P<0.05);ISO-1中添加MIF可以减少ISO-1的抑制作用(P<0.05);(3)RT-q PCR检测MIF基因敲除约50%后,人胚胎干细胞生长活力显著降低并且无法建系成功;(4)在培养基中添加100 ng/m L外源性MIF,自我更新转录因子KLF4的m RNA、蛋白及荧光表达水平均下降;分化因子FOXA2的m RNA、蛋白及荧光表达水平均上升;(5)在培养基中添加100 ng/m L CXCR4中和抗体,KLF4的m RNA及蛋白表达水平均上升;FOXA2的m RNA及蛋白表达水平均下降,与MIF组表达趋势相反。综上所述,人胚胎干细胞自分泌的MIF是其存活所必需的;培养基中额外添加MIF并不能促进人胚胎干细胞增殖,但可以使自我更新因子KLF4表达下降,转录因子FOXA2表达上升,为下一步探明MIF对人胚胎干细胞分化的影响及机制提供了线索,MIF-CXCR4轴在其中起到一定的调控作用。

关键词：巨噬细胞迁移抑制因子人胚胎干细胞自分泌存活分化 CXCR4 KLF4 FOXA2

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白藜芦醇纳米乳的制备及其功能评价

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药学前沿 2025年第1期29卷 24-32页

作者：王顺丰王假尧于佳岐冯世权董德峤李定国胡雪曹俊艳何溶高亚男海南医学院药学院热带药物创新与转化教育部工程研究中心人机智能协同肿瘤精准诊疗国际联合研究中心海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199

目的本研究通过纳米技术提高难溶性药物白藜芦醇的成药性,进行了白藜芦醇纳米乳(RES-NE)的处方设计,对其进行初步质量评价,并研究了其预防紫外线引起的皮肤损伤作用。方法考察白藜芦醇在不同辅料中的溶解度,通过绘制三元相图,确定与之... 详细信息

目的本研究通过纳米技术提高难溶性药物白藜芦醇的成药性,进行了白藜芦醇纳米乳(RES-NE)的处方设计,对其进行初步质量评价,并研究了其预防紫外线引起的皮肤损伤作用。方法考察白藜芦醇在不同辅料中的溶解度,通过绘制三元相图,确定与之配伍辅料的比例,制备白藜芦醇纳米乳;对所制备的白藜芦醇纳米乳进行粒径、Zeta电位、形态等理化性质的表征;采用紫外线照射方法考察白藜芦醇纳米乳对大鼠背部皮肤的保护作用。结果根据溶解度及三∶元相∶图,∶确定三乙酸甘油酯为油相,聚氧乙烯蓖麻油EL-60为乳化剂,聚乙二醇400为助乳化剂,白藜芦醇纳米乳的最优处方为药物、油相、乳化剂、助乳化剂的质量比为0.175(21.68±3.89)nm,多分散系数为0.110±0.010,Zeta电位为(0.509±0.145)mV,紫外照射对照组出现大面积红斑,用药组未出现或出现极小面积红斑。结论制备的白藜芦醇纳米乳制剂外观澄明、性质安全且稳定、制备工艺简单、载药量高、具有一定的缓释作用,初步认为白藜芦醇具有预防紫外线致皮肤损伤的潜能,有望应用于皮肤护理、紫外线防护等领域。

关键词：白藜芦醇纳米乳质量评价抗紫外抗氧化酪氨酸酶抑制皮肤刺激性体外释放

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弓形虫MIC8基因与基因佐剂IL-12共免疫小鼠的保护性研究（英文）

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第4期31卷 284-289页

作者：赵焕阁黄风迎郭峻莉谭光宏海南医学院海南省热带病重点实验室海口571101

目的观察弓形虫MIC8基因和基因免疫佐剂白细胞介素(IL-12)共免疫小鼠所诱导的免疫保护性。方法将编码弓形虫MIC8的基因插入到真核表达质粒载体pc DNA3.1中,构建真核表达质粒pcMIC8,并转染至HeLa细胞,蛋白免疫印迹分析(Western blotting... 详细信息

目的观察弓形虫MIC8基因和基因免疫佐剂白细胞介素(IL-12)共免疫小鼠所诱导的免疫保护性。方法将编码弓形虫MIC8的基因插入到真核表达质粒载体pc DNA3.1中,构建真核表达质粒pcMIC8,并转染至HeLa细胞,蛋白免疫印迹分析(Western blotting)检测重组蛋白的表达情况。80只昆明小鼠随机均分为5组,分别为对照组(PBS组、pcDNA3.1空质粒组、pcIL-12质粒组)、pcMIC8质粒组以及pcMIC8+pcIL-12质粒共免疫组。共免疫组以pcMIC8质粒和pcIL-12质粒各100μg(溶于100μl PBS)肌注昆明小鼠后腿股,共免疫3次,每次间隔2周,PBS组、pcDNA3.1空质粒组、pcIL-12质粒组和pcMIC8质粒组分别注射等量的PBS、pcDNA3.1空质粒、pcIL-12质粒和pcMIC8质粒,同法免疫。免疫前及初次免疫后13 d、27 d、41 d和55 d,用ELISA测小鼠血清中抗体IgG和IgG2a的表达水平。末次免疫后4周,ELISA法测各实验组小鼠脾细胞培养液上清中γ干扰素(IFN-γ)和IL-4的表达水平。末次免疫后3周,各组小鼠腹腔注射接种103弓形虫RH株速殖子,观察小鼠受攻击感染后的存活时间。结果 Western blotting显示,重组质粒pcMIC8能在HeLa细胞中表达,蛋白相对分子质量(M r)约为74 000。初次免疫后55d,共免疫组小鼠血清IgG(0.51±0.028)、IgG2a(0.261±0.04)抗体水平高于pcMIC8质粒组(0.409±0.031、0.159±0.031)和对照组(P<0.05),lgG1抗体在各实验组之间未见有显著差异。末次免疫后4周,共免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ含量(1083.27±925.34)显著高于pcMIC8质粒组(497.65±98.15)和对照组(PBS 47.18±2.73,pcDNA3.1 50.08±4.62,pcIL-12 118.15±12.73)(P<0.05);各组IL-4的水平差异无统计学意义(P>0.05)。攻击感染后,共免疫组小鼠存活时间(15 d)较pcMIC8组(10 d)和对照组(PBS 5d,pcDNA3.1 6d,pcIL-12 8d)显著延长(P<0.05)。结论弓形虫MIC8基因与基因佐剂IL-12共免疫小鼠能增强其免疫反应。

关键词： DNA疫苗弓形虫抗原MIC8 基因佐剂IL-12

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小型化Endoglin抗体与阿霉素偶联物的抗肿瘤作用研究

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四川大学学报（医学版） 2012年第3期43卷 340-343页

作者：李灵黄风迎黄用豪周松林郭峻莉赵焕阁谭光宏王华海南医学院海南省热带病重点实验室海口571101

目的考察抗Endoglin单克隆抗体Fab片段与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用异型双功能偶联剂N-羟基琥珀酰亚胺基-间-(N-马来酰亚胺基)苯甲酸酯(m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxy-succinimide ester,MBS)为交联剂,制备Fab-ADM偶联物... 详细信息

目的考察抗Endoglin单克隆抗体Fab片段与阿霉素(ADM)偶联物的抗肿瘤作用。方法采用异型双功能偶联剂N-羟基琥珀酰亚胺基-间-(N-马来酰亚胺基)苯甲酸酯(m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxy-succinimide ester,MBS)为交联剂,制备Fab-ADM偶联物,以小鼠肝癌H22皮下移植瘤模型观察其在体内抑制肿瘤生长的效果。结果所得偶联物中Fab与ADM的分子比约为1∶2。动物实验中ADM(0.4mg/kg)的抑瘤率为25.00%,偶联物(0.4mg/kg,等细胞毒性剂量)的抑瘤率达到91.94%;并且较之于ADM可延长小鼠的中位生存时间。结论 Fab-ADM偶联物较ADM对小鼠肝癌H22皮下移植瘤具有更为显著的抑制作用,有望成为新型的抗肿瘤靶向药物。

关键词：阿霉素小型化Endoglin单抗免疫偶联物抗肿瘤

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弓形虫复合基因疫苗pcSAG1-ROP5诱导小鼠免疫应答的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第1期31卷 1-5页

作者：赵焕阁范志刚黄风迎黄用豪周松林林映莹谭光宏海南医学院海南省热带病重点实验室海口571101

目的观察弓形虫复合基因疫苗pcSAGl-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5，分别通过PCR、酶切和测序鉴定后，转染人宫颈癌细胞（HeLa细胞），蛋白印迹（Westernblotting）分析重... 详细信息

目的观察弓形虫复合基因疫苗pcSAGl-ROP5免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法构建弓形虫重组真核表达质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5，分别通过PCR、酶切和测序鉴定后，转染人宫颈癌细胞（HeLa细胞），蛋白印迹（Westernblotting）分析重组蛋白的体外表达情况。70只昆明小鼠随机均分为5组（每组14只），分别为pc-SAGl组、pcROP5组、pcSAGl-ROP5组、空质粒组和空白对照组。重组质粒组每次每只肌注100μg重组质粒，每2周免疫1次，共3次。空质粒组和空白对照组分别注射等量的空质粒和PBS。于每次免疫前和末次免疫后2周眼眶采血。制备血清。采用ELISA法检测pcSAGl-ROP5组小鼠末次免疫后2周的血清与重组蛋白SAGl、ROP5和SAGl-ROP5结合的效价，以及5组小鼠的各次血清中抗弓形虫抗体IgG水平。末次免疫后3周，每组小鼠取10只腹腔接种10s弓形虫速殖子，观察生存时间。末次免疫后4周，采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中r干扰素（IFN-r）和白细胞介素4（IL-4）的水平。结果重组真核表达质粒构建成功。Westernblotting分析结果显示，重组质粒pcSAGl、pcROP5和pcSAGl-ROP5均能在HeLa细胞中表达，重组蛋白的相对分子质量（尬）分别为31000、57000和88000。pcSAGl-ROP5组小鼠血清与重组蛋白SAGl、ROP5和SAGl-ROP5结合的效价分别为1：320、1：160和1：2560。3个重组质粒组小鼠血清抗弓形虫IgG抗体水平随着免疫次数的增加和时间的延长逐渐升高，末次免疫后2周，pcSAGl-ROP5组小鼠血清IgG抗体水平（0．612±0．031）显著高于其他各组（P〈0．05）。攻击感染后，pcSAGl-ROP5组小鼠的平均存活时间为（288±7）h，较pc—SAGl组和pcROP5组分别延长了48h和96h（P〈0．05）。末次免疫后4周，pcSAGl-ROP5组小鼠脾细胞培养上清中IFN-1水平[（908．52±6．31）pg／m1]显著高于其他各组（P〈0．05），各组的IL-4水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论与弓形虫单基因疫苗pcSAGl和pcROP5相比，复合基因疫苗pcSAGl-ROP5所诱导的抗弓形虫IgG抗体和IFN-1水平较高，攻击感染后存活时间延长。

关键词：刚地弓形虫复合基因疫苗 SAG1-ROP5

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弓形虫ROP5基因真核表达载体的构建及其免疫保护性的研究

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中国人兽共患病学报 2012年第9期28卷 947-950页

作者：赵焕阁王华黄用豪周松林郭峻莉黄凤迎林映莹谭光宏海南医学院海南省热带病重点实验室海口571101

目的构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应。方法克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotti... 详细信息

目的构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应。方法克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定。将45只小鼠随机均分为3组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-ROP5组,每2w肌注免疫(100μg/只)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1d和末次免疫后2w收集小鼠血清,用间接ELISA法检测血清抗弓形虫的IgG。各组小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子1 000个/每鼠,观察小鼠受攻击感染后的存活时间。结果真核表达载体构建成功,Western blotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量为61kDa。pcDNA3.1-ROP5末次免疫后血清中IgG水平显著高于其他组,pcDNA-ROP5免疫的小鼠与对照组相比,实验组小鼠产生了明显的体液免疫应答。攻击感染试验中,实验组的小鼠比对照组的存活时间有明显延长。结论构建的真核表达重组质粒pcDNA-ROP5对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。

关键词：弓形虫 ROP5 真核表达质粒免疫保护

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伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5基因高效植物表达载体的构建

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现代预防医学 2009年第7期36卷 1335-1337页

作者：王华谭光宏黄风迎黄用豪周松林林映莹海南医学院海南省热带病重点实验室

[目的]构建果实特异性启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei mero-zoite surface protein4/5)基因的植物表达载体,进一步提高目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础。[方法]分别以提... 详细信息

[目的]构建果实特异性启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei mero-zoite surface protein4/5)基因的植物表达载体,进一步提高目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础。[方法]分别以提取的番茄和伯氏疟原虫的基因组DNA为模板,通过SOEPCR,即重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension)拼接番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),拼接后的序列为EM。用EcoRI和HindIII分别双酶切EM序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重组质粒pCAMBIA1302-EM用电击法转化根癌农杆菌GV3103。[结果]重组质粒经PCR及酶切鉴定证明已成功转化。[结论]本实验成功构建了番茄果实特异性启动子驱动PbMSP4/5基因的植物表达载体。

关键词：疟疾植物口服疫苗 E8 PbMSP4/5

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抗小鼠endolgin单克隆抗体杂交瘤的建立和初步应用(英文)

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中国现代医学杂志 2007年第1期17卷 1-4页

作者：黎岳南谭光宏焦解歌黄风迎蒋洁海南医学院海南省热带病重点实验室

目的建立能够分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系,为深入研究endoglin的新功能、诊断和治疗肿瘤血管生成提供物质基础。方法利用小鼠endoglin胞外段重组蛋白作为抗原免疫大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌... 详细信息

目的建立能够分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系,为深入研究endoglin的新功能、诊断和治疗肿瘤血管生成提供物质基础。方法利用小鼠endoglin胞外段重组蛋白作为抗原免疫大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠endoglin单克隆抗体的杂交瘤系。利用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹方法明确筛选的单克隆抗体的特异性,免疫组化和免疫荧光初步判定获得的单克隆抗体是否可以应用于临床诊断。结果通过对90多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠endoglin的单克隆抗体杂交瘤细胞系,分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,轻链亚型为kappa。免疫印迹显示该研究获得的单克隆抗体可以特异识别小鼠endoglin重组蛋白,该单克隆抗体可以结合实体肿瘤组织微血管上的特异抗原并将微血管有效染色。结论本研究所获得的抗小鼠endoglin单克隆抗体将有助于深入研究endoglin的新功能,为肿瘤血管生成的诊断和治疗提供了物质保障。

关键词：单克隆抗体杂交瘤细胞系 endoglin 肿瘤血管生成

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钌(Ⅱ)-催化偶氮苯与乙醛酸乙酯的环化反应构建3-羧酸酯吲唑

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有机化学 2020年第3期40卷 688-693页

作者：陈训王颖王烁今孔杜林文丽君翟锐锐赵珂白丽丽李友宾海南医学院热带转化医学教育部重点实验室海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199 海南医学院药学院海口571199

报道了一种简便有效的Ru(Ⅱ)催化偶氮苯与乙醛酸乙酯的高选择性[4+l]环化反应,该反应历程涉及C—H键的活化.这种策略能够以中等至良好的产率去高效构建多样性的吲唑骨架结构.同时研究了该反应的动力学同位素效应,实验结果表明C—H键活... 详细信息

报道了一种简便有效的Ru(Ⅱ)催化偶氮苯与乙醛酸乙酯的高选择性[4+l]环化反应,该反应历程涉及C—H键的活化.这种策略能够以中等至良好的产率去高效构建多样性的吲唑骨架结构.同时研究了该反应的动力学同位素效应,实验结果表明C—H键活化可能不属于整个反应历程的决速步骤.

关键词：钌(Ⅱ) C—H键活化环化反应吲唑

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大肠埃希菌JM109表面抗原Ag43基因敲除与鉴定

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重庆医学 2015年第31期44卷 4330-4332页

作者：黄用豪赵焕阁周松森林映莹谭光宏黄风迎海南医学院海南省热带病重点实验室海口571199

目的敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43(Ag43)基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体(RNP)基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K-C... 详细信息

目的敲除大肠埃希菌JM109表面抗原43(Ag43)基因并对其进行鉴定。方法采用Sigma公司的TargeTron基因敲除系统和Ag43基因特异设计的PCR引物扩增获得突变Ⅱ组内含子RNA蛋白复合体(RNP)基因序列,然后将这段基因序插入表达RNP的质粒pACD4K-C中,获得Ag43特异的重组RNP质粒pACD4K-Ag43。最后将pACD4K-Ag43转化JM109,经过IPTG诱导表达将Ⅱ组内含子插入Ag43特异的部位。结果通过软件分析发现插入Ⅱ组内含子的最佳位点位于碱基1 812和1 913之间,琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的突变Ⅱ组内含子RNP基因序列分子量大小和预期值(350bp)相一致,用NheⅠ和HindⅢ二种酶切分析重组质粒pACD4K-Ag43结果和预期值相符,PCR扩增相应产物和基因测序显示Ⅱ组内含子特异地插入Ag43基因碱基序列的1 812/1 913位点。结论成功地将大肠埃希菌JM109中的基因敲除,为更进一步深入研究Ag43基因的功能和将其作为制备重组Ag43嵌合蛋白的宿主菌奠定了基础。

关键词：抗原Ag43 基因敲除细菌表面表达 Ⅱ组内含子表达系统

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