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生物化学与生物物理学报 2002年第6期34卷 769-774页

作者：李孟森李平风李刚杜国光海南医学院生物化学教研室北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京大学医学部生物化学与分子生物学系海口571101 北京100083

为探讨甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用。用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,通过MTT计数、[3 H] TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖 ,并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描... 详细信息

为探讨甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用。用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,通过MTT计数、[3 H] TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖 ,并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描细胞内Ca2 + 浓度等观察细胞内第二信使物质的改变及测定3 2 P转移反映细胞内蛋白激酶A(PKA)活性 ;用Western印迹分析法分析突变型 p5 3、p2 1ras蛋白表达。结果显示AFP(浓度大于 10mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用。在AFP(2 0mg/L)作用下 ,HeLa细胞cAMP浓度升高 30 0 % ;Ca2 + 浓度最大升高 15 4 .9%、PKA活性最大升高 10 0 %。突变型 p5 3和 p2 1ras分别增高 81.1% (2 4h)和 96 .2 % (2 4h)。抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP促HeLa细胞增殖作用。以上表明 ,(1)AFP具促HeLa细胞增殖的生理功能 ;(2 )AFP促进HeLa细胞增殖的作用是通过影响细胞内cAMP和Ca2 + 浓度以及PKA活性进而促进一些原癌基因的表达来实现的。

关键词：甲胎蛋白细胞增殖信号转导基因表达

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海南省71例黎、汉族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者的基因突变型分析

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中华血液学杂志 2007年第4期28卷 250-254页

作者：黄冬爱王小英王政周代锋蔡望伟海南医学院生物化学教研室海口 571101 海南医学院分子生物学重点实验室

目的分析海南省29例汉族和42例黎族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者的G6PD基因突变类型。方法采用突变特异性扩增系统法筛查海南省人群中G6PD缺乏症的G1376T、G1388A和A95G三种常见突变位点；运用DNA测序技术鉴定未知突变标本G6P... 详细信息

目的分析海南省29例汉族和42例黎族葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者的G6PD基因突变类型。方法采用突变特异性扩增系统法筛查海南省人群中G6PD缺乏症的G1376T、G1388A和A95G三种常见突变位点；运用DNA测序技术鉴定未知突变标本G6PD基因外显子2至外显子13的基因突变类型。结果在29例汉族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 11例（37．9％）、G1388A 2例（6．9％）、G1376T复合G1388A突变1例（3．4％）和G1376T复合A95G突变1例（3．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占汉族G6PD缺乏症患者的51．7％；在42例黎族G6PD缺乏症患者中，发现G1376T 25例（59．5％）、G1388A 6例（14．3％）、A95G 2例（4．8％）、G1376T复合G1388A突变4例（9．5％）和G1376T复合A95G突变1例（2．4％），G1376T、G1388A、A95G三种常见突变及其复合突变共占黎族G6PD缺乏症患者的90．5％；18例（汉族14例，黎族4例）未发现G1376T、G1388A、A95G。对这18例标本的测序发现：1例G6PD内含子5第636或637位核苷酸T缺失（IVS-5 636或637 T del）突变；2例C1311T复合IVS-11 T93C突变，其余标本未发现突变。结论G1376T和G1388A是海南省人群中最常见的基因突变型；在我国人群中存在IVS-5636或637 T del突变型；在海南省黎族人群中首次报道G1376T／A95G复合突变型。

关键词：葡糖磷酸脱氢酶葡糖磷酸脱氢酶缺乏基因转变

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甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡

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生物化学与生物物理进展 2011年第3期38卷 227-238页

作者：朱明月符史干李孟森谢协驹李刚海南医学院分子生物学重点实验室海口571159 海南医学院生理学教研室海口571159 海南医学院肿瘤研究所海口570102 海南医学院病理生理学教研室海口571159 北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京100191

研究甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)对肝癌细胞内PTEN/AKT信息通路信号传递的影响.用Western blotting法分析全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)处理人肝癌Bel 7402和HepG2细胞24 h后PTEN表达的变化.免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用.激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN在细胞共定位.RNA干扰(RNAi)技术抑制AFP表达,再用ATRA处理24 h后检测细胞内PTEN表达的变化,并分析蛋白激酶B(AKT)的磷酸化.用pcDNA3.1质粒和人afp基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌HLE细胞.结果显示,人肝癌Bel 7402和HepG2细胞均有PTEN的表达,ATRA(160μmol/L)处理24 h后能促进这些细胞的PTEN表达.Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合.共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞浆.干扰AFP表达后,PTEN表达明显提高.抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内PTEN的表达,并能抑制AKT的磷酸化.转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内有AFP表达,并与PTEN结合,且发现pcDNA3.1-afp载体能增加AKT的磷酸化[p-AKT(Ser473)],对抗ATRA抑制HLE细胞增殖.研究的结论是:肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活AKT信息通路.胞浆内的AFP是肝癌细胞耐受ATRA的重要因子.

关键词：甲胎蛋白 PTEN 肝癌细胞 PI3K/AKT信号通路

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人claudin-10基因启动子转录调控的初步分析

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生物技术 2015年第3期25卷 205-211,216页

作者：周雯王青松海南医学院组织胚胎学教研室海南海口571199 海南医学院生物化学与分子生物学教研室海南海口571199

[目的]构建不同长度的人claudin-10基因上游启动子荧光素酶报告基因载体,并在LO2细胞中比较其活性。[方法]以人LO2肝细胞基因组DNA为模板,PCR扩增获得claudin-10基因5'侧翼序列,并将其插入p MD18-T载体;PCR扩增获得不同长度的claudi... 详细信息

[目的]构建不同长度的人claudin-10基因上游启动子荧光素酶报告基因载体,并在LO2细胞中比较其活性。[方法]以人LO2肝细胞基因组DNA为模板,PCR扩增获得claudin-10基因5'侧翼序列,并将其插入p MD18-T载体;PCR扩增获得不同长度的claudin-10基因上游启动子区序列,构建p GL3-Basic系列荧光素酶基因报告载体。瞬时转染LO2细胞,双荧光素酶报告基因分析系统检测转录活性。[结果]成功构建6个不同长度的人claudin-10基因上游启动子区(-1 451/+100bp、-1 022/+100bp、-1 005/+100bp、-677/+100bp、-377/+100bp和-108/+100bp)的报告载体;启动子活性实验结果表明:当claudin-10启动子片段从-1 005 bp截短至-677 bp,从-108 bp截短至+100 bp时活性显著下降(P<0.05);其余截短时活性无改变(P>0.05)。[结论]claudin-10启动子-1 005bp^-677bp和-108bp^+100bp区是claudin-10基因的主要转录调控区。

关键词： claudin-10基因启动子 LO2细胞转录调控荧光素酶报告基因

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地塞米松治疗蚕豆病的可能机制

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广东医学 2013年第18期34卷 2764-2765页

作者：杜冠魁肖曼钟国柄彭磊兰永发孙嘉怡蔡望伟海南医学院生物化学与分子生物学教研室海口571101 海南医学院理学院海口571101

目的探明蚕豆引起的蚕豆病发病及治疗机制。方法取昆明种小白鼠16只,随机均分为2组,分别为对照组(正常饲料喂养),蚕豆组(饲料中以15%蚕豆替换黄豆)。进食蚕豆24小时后,采用南京建成生物公司测试盒测定H2O2含量,MDA含量,CAT酶活及GSH含... 详细信息

目的探明蚕豆引起的蚕豆病发病及治疗机制。方法取昆明种小白鼠16只,随机均分为2组,分别为对照组(正常饲料喂养),蚕豆组(饲料中以15%蚕豆替换黄豆)。进食蚕豆24小时后,采用南京建成生物公司测试盒测定H2O2含量,MDA含量,CAT酶活及GSH含量。另取昆明种小白鼠24只,随机均分为三组,分别为对照组,蚕豆组及蚕豆+Dex组(进食蚕豆24小时后腹腔注射地塞米松组),注射地塞米松后1 h,2 h,4 h测定H2O2含量,MDA含量,CAT酶活及GSH含量。结果喂食蚕豆可导致小鼠血浆中H2O2含量升高20.2%,丙二醛(MDA)含量升高15.6%,过氧化氢酶(CAT)酶活性降低20.0%。注射地塞米松4 h后,H2O2,MDA及CAT含量与正常组一致。结论喂食蚕豆会导致小鼠体内氧化应激状态发生变化,地塞米松可以抑制H2O2的增加,这可能是治疗蚕豆病的主要机制。

关键词：蚕豆病活性氧地塞米松小鼠

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人CLDN10a启动子的克隆及活性分析

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基因组学与应用生物学 2022年第7期41卷 1567-1578页

作者：周雯杨智时凤敏符碧薇吴岩唐敏郑琳王青松海南医学院组织胚胎学教研室海口571199 海南医学院形态学实验室海口571199 海南医学院生物技术专业实验室海口571199 海南医学院生物化学与分子生物学教研室海口571199

CLDN基因家族编码构成细胞间紧密连接的主要跨膜蛋白Claudins,在维持细胞极性、信号转导和恶性肿瘤复发转移中发挥重要作用。CLDN10基因属于CLDN家族,有包括CLDN10a在内的多个转录本。本研究利用多种生物信息学方法分析CLDN10a的5′侧... 详细信息

CLDN基因家族编码构成细胞间紧密连接的主要跨膜蛋白Claudins,在维持细胞极性、信号转导和恶性肿瘤复发转移中发挥重要作用。CLDN10基因属于CLDN家族,有包括CLDN10a在内的多个转录本。本研究利用多种生物信息学方法分析CLDN10a的5′侧翼序列的特征和转录因子结合位点,采用基因合成、PCR扩增和分子克隆构建5′缺失的不同长度的CLDN10a启动子荧光素酶报告基因载体,瞬时转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测不同长度片段的启动子活性。生物信息学分析结果显示,CLDN10a的上游转录调控区序列(-2000~+460 bp)含有TATA box、GC box和CAAT box,存在1个CpG岛,有4个启动子位置,有1个RNA聚合酶Ⅱ核心启动子;MatInspector和Jaspar分析发现,有75种可能的转录因子结合位点(评分≥0.99)。PCR和测序结果显示,成功构建了6个不同长度的CLDN10a启动子的双荧光素酶报告基因质粒。荧光素酶活性检测表明,-1890~-1100 bp、-1000~-890 bp、-890~-150 bp和-150~+460 bp是人CLDN10a启动子的主要活性区域,-150~+460 bp包含CLDN10a的核心启动子区域。本实验为进一步研究CLDN10基因的表达及调控机制提供了依据。

关键词： CLDN10 启动子双荧光素酶报告基因系统生物信息学

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一种新的遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症ⅩⅢA亚基mRNA大片段缺失的鉴定

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中华血液学杂志 2012年第4期33卷 299-302页

作者：马秋玲周克元周鹏蔡望伟海南医学院生物化学与分子生物学教研室海口571101 广东医学院生物化学教研室中国热带农业科学院热带生物技术研究所

目的分析1个遗传性凝血因子）ⅩⅢ缺乏症家系白细胞表达的凝血因子）ⅩⅢA亚基mRNA。方法采用RT—PCR、半定量RT—PCR、克隆和测序方法分析遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症家系先证者及其亲属外周血单个核细胞的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA；用***... 详细信息

目的分析1个遗传性凝血因子）ⅩⅢ缺乏症家系白细胞表达的凝血因子）ⅩⅢA亚基mRNA。方法采用RT—PCR、半定量RT—PCR、克隆和测序方法分析遗传性凝血因子ⅩⅢ缺乏症家系先证者及其亲属外周血单个核细胞的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA；用***分析凝血因子ⅩⅢA亚基基因突变对蛋白质结构和功能的影响。结果①先证者凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA存在第11到第279个密码子大片段缺失（DelCD11-279），该缺失为阅读框内缺失，编码1条454个氨基酸截短的凝血因子]ⅩⅢA亚基；先证者的凝血因子）ⅩⅢA亚基mRNA表达量明显减少；②三维结构分析显示DelCD11—279的凝血因子ⅩⅢA亚基mRNA所编码1条464个氨基酸截短的凝血因子ⅩⅢA亚基蛋白缺乏部分活性肽、B一夹层区和部分催化中心区，不能形成正常的催化中心，缺乏转谷氨酰胺酶活性。结论凝血因子）ⅩⅢA亚基mRNADelCD11—279与遗传性凝血因子）ⅩⅢ缺乏相关，该家系患者凝血因子）ⅩⅢA亚基基因表达水平降低是导致凝血因子）ⅩⅢ缺乏的原因之一。

关键词：因子ⅩⅢ 因子ⅩⅢ缺乏 DNA突变分析

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钙结合蛋白S100A8在内毒素休克小鼠肝脏中的表达

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现代预防医学 2011年第15期38卷 3085-3086+3088页

作者：李红梅郑晶黄劲贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室海南医学院病理学教研室

[目的]探讨S100A8在内毒素休克小鼠肝脏组织中的表达。[方法]SPF级BALB/c小鼠随机分为正常对照组和LPS处理组(LPS刺激1h、3h和6h,LPS剂量为35mg/kg);采用免疫组织化学染色法检测两组肝脏组织S100A8蛋白水平的变化。[结果]S100A8在内毒... 详细信息

[目的]探讨S100A8在内毒素休克小鼠肝脏组织中的表达。[方法]SPF级BALB/c小鼠随机分为正常对照组和LPS处理组(LPS刺激1h、3h和6h,LPS剂量为35mg/kg);采用免疫组织化学染色法检测两组肝脏组织S100A8蛋白水平的变化。[结果]S100A8在内毒素休克小鼠肝组织的胞浆及胞膜上表达增强。[结论]S100A8在内毒素休克的肝组织中表达增强,提示S100A8可能参与LPS诱导的信号转导。

关键词：内毒素休克 S100A8 炎症反应

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甲胎蛋白对HeLa细胞N-ras、p53和p21^(ras)表达的促进作用

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第6期18卷 750-754页

作者：李孟森李平风杜国光李刚海南医学院生物化学教研室海口571101 北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京100083

大量研究已证明甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞的增殖具有调节作用 .为探讨AFP对细胞生长促进作用的分子机理 ,采用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,用Northern印迹分析法分析不同作用时间时细胞N rasmRN... 详细信息

大量研究已证明甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞的增殖具有调节作用 .为探讨AFP对细胞生长促进作用的分子机理 ,采用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,用Northern印迹分析法分析不同作用时间时细胞N rasmRNA的表达以及用Western印迹分析法分析p5 3、p2 1ras的表达 .结果发现 ,在AFP(2 0mg L)作用后 ,HeLa细胞的N rasmRNA、p5 3蛋白质和p2 1ras蛋白质的表达量与对照组比较在 12h和 2 4h时都有明显增加 .AFP的作用均可被抗AFP单克隆抗体所拮抗 .实验结果提示 ,AFP对细胞生长的调节作用可能通过促进这些原癌基因的表达来实现 .

关键词：原癌基因甲胎蛋白 HeLa细胞 N-ras p53 p21^ras 表达促进作用

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海南汉族健康人群GSTT1、GSTM1基因多态性分析

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中国公共卫生 2013年第6期29卷 903-905页

作者：蔡群芳邬强海南医学院热带医学与检验医学院临床生物化学与分子生物学教研室海南海口571199

目的探讨海南汉族人群谷胱甘肽S转移酶GSTM1基因和GSTT1基因多态性分布情况。方法应用多重PCR扩增方法检测147名汉族健康人群GSTM1基因型和GSTT1基因型。结果 147名海南汉族人群中,G STM1-基因型频率为56.5%(83/147),G STT1-基因型频率... 详细信息

目的探讨海南汉族人群谷胱甘肽S转移酶GSTM1基因和GSTT1基因多态性分布情况。方法应用多重PCR扩增方法检测147名汉族健康人群GSTM1基因型和GSTT1基因型。结果 147名海南汉族人群中,G STM1-基因型频率为56.5%(83/147),G STT1-基因型频率为40.8%(60/147),G STM1-/G STT1-基因型频率为25.2%(37/147),2基因在正常人群中分布与年龄、性别无关,且相互独立无关联。结论海南汉族健康人群G STM1基因和G STT1基因多态性与不同地区正常人群之间存在一定差异性(P<0.01)。

关键词：谷胱甘肽转移酶基因多态性汉族海南

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