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中国临床研究 2019年第7期32卷 893-897页

作者：张毅陈松陈宏健卢惠周繇马燕琳海南医学院第一附属医院生殖医学中心海南省人类生殖与遗传重点实验室

目的探讨对人早孕绒毛滋养细胞采用不同浓度双酚A(BPA)干扰,对其胰岛素样生长因子I(IGF-I)及解整合素-金属蛋白酶12(ADAM12)表达的影响。方法取海南医学院妇产科门诊人流室一名自然妊娠早孕50 d孕妇的新鲜绒毛组织制备绒毛滋养细胞(孕... 详细信息

目的探讨对人早孕绒毛滋养细胞采用不同浓度双酚A(BPA)干扰,对其胰岛素样生长因子I(IGF-I)及解整合素-金属蛋白酶12(ADAM12)表达的影响。方法取海南医学院妇产科门诊人流室一名自然妊娠早孕50 d孕妇的新鲜绒毛组织制备绒毛滋养细胞(孕妇知情同意,并经医院伦理委员会批准),配制4组含不同浓度BPA的培养液(A组:1×10^-4g/L,B组:1×10^-5g/L,C组:1×10^-6g/L,D组:1×10^-7g/L),并设培养基(E组:BPA 0 g/L)为对照组,进行滋养细胞培养,72 h后收取滋养细胞行实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)实验,检测不同浓度BPA条件下IGF-I、ADAM12 mRNA表达量的变化。结果各实验组中ADAM12、IGF-I mRNA的表达受BPA的影响,均有不同程度升高。当BPA浓度为1×10^-5g/L(B组)时,IGF-I mRNA的表达明显升高,是C组的3.18倍(P<0.01),是对照组E组的5.48倍(P<0.01);ADAM12 mRNA的表达量明显上升,是C组的4.19倍(P<0.01),是对照组E组的6.27倍(P<0.01)。结论 BPA对绒毛滋养细胞的IGF-I和ADAM12的mRNA表达有刺激升高的作用。

关键词：双酚A 雌激素绒毛滋养细胞胰岛素样生长因子I 解整合素-金属蛋白酶12 实时荧光定量酶链式聚合反应

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人胚胎干细胞建株与维持培养条件的优化

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生命科学研究 2014年第4期18卷 349-352,366页

作者：蒋伟民黄元华马燕琳海南医学院附属医院生殖医学中心海南省人类生殖与遗传重点实验室中国海南海口570102

人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有无限增殖、自我更新和全能分化的特性。无论在体内还是体外环境,人胚胎干细胞都能分化为机体几乎所有类型的细胞。基于其全能分化性,胚... 详细信息

人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有无限增殖、自我更新和全能分化的特性。无论在体内还是体外环境,人胚胎干细胞都能分化为机体几乎所有类型的细胞。基于其全能分化性,胚胎干细胞成为治疗各种退行性疾病的理想细胞来源。然而,在目前培养条件下所建立的胚胎干细胞株,仍然存在动物源性物质潜在污染的问题。因此,更优化的建株及培养条件十分重要。

关键词：人胚胎干细胞(hESC) 内细胞团饲养层细胞培养条件 mTESR1

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卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1对卵巢颗粒细胞的调控

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实用医学杂志 2023年第21期39卷 2709-2717页

作者：柯慧颜礼征张宇毛记龙姚宇飞海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室海南医学院第一附属医院生殖医学科海南医学院第一附属医院海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心海南医学院生殖健康与相关疾病研究与转化教育部重点实验室海南医学院第一附属医院海口市人类遗传资源保藏重点实验室海口570102

目的探讨卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1(SIRT1)对卵巢颗粒细胞的调控。方法本研究纳入行IVF/ICSI-ET助孕的女性共60例,其中卵巢低反应(POR)组和卵巢正常反应(NOR)组各30例。采用密度梯度离心法分离纯化卵泡液中的颗粒细胞。分别使... 详细信息

目的探讨卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1(SIRT1)对卵巢颗粒细胞的调控。方法本研究纳入行IVF/ICSI-ET助孕的女性共60例,其中卵巢低反应(POR)组和卵巢正常反应(NOR)组各30例。采用密度梯度离心法分离纯化卵泡液中的颗粒细胞。分别使用SIRT1激动剂白藜芦醇(RESV)或抑制剂EX527处理POR组颗粒细胞,对照组为不使用药物处理的颗粒细胞。采用qPCR检测颗粒细胞SIRT1和类固醇激素合成关键酶(StAR、CYP19、CYP17)的mRNA水平。采用Western blot检测颗粒细胞SIRT1、类固醇激素合成关键酶蛋白和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3)的水平。TUNEL法检测颗粒细胞的凋亡率。化学发光法检测颗粒细胞培养液中雌二醇水平。结果POR组颗粒细胞SIRT1 mRNA和蛋白水平低于NOR组(P=0.003,P<0.001)。RESV上调SIRT1 mRNA和蛋白水平(P<0.001),上调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平(P<0.05),EX527下调SIRT1 mRNA和蛋白水平(P=0.023、0.001),下调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平(P<0.05)。RESV作用颗粒细胞后,细胞凋亡率降低(P=0.000),Bcl-2蛋白水平上升(P<0.001),Caspase-3蛋白水平下降(P<0.001);EX527作用颗粒细胞后,细胞凋亡率升高(P<0.001),Bcl-2蛋白水平下降(P=0.003),Caspase-3蛋白水平上升(P<0.001)。结论POR女性颗粒细胞SIRT1水平低于NOR女性。RESV增加SIRT1表达。SIRT1抑制颗粒细胞凋亡,提高类固醇激素合成关键酶水平,促进颗粒细胞合成雌二醇。因此,SIRT1激活剂如RESV可能成为改善POR女性卵巢反应性,增加获卵数的治疗药物。

关键词：卵巢低反应沉默信息调节因子1 卵巢颗粒细胞凋亡

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宫内干细胞治疗多种胎儿遗传性疾病的可能性

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中国组织工程研究 2021年第31期25卷 5034-5039页

作者：揭秋玲孙菲南方医科大学南方医院妇产科广东省广州市510515 海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室生殖医学科海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心海南省海口市570102 海南医学院热带转化医学教育部重点实验室海南省海口市570102 海南医学院第一附属医院海口市人类遗传资源保藏重点实验室海南省海口市570102

背景:产前诊断筛查技术的发展使得产前治疗成为可能。对于多种胎儿遗传性疾病,宫内干细胞治疗具有显著的优势。目的:通过目前已有的实验研究和临床资料分析宫内干细胞治疗产前胎儿疾病的可行性。方法:应用计算机检索中国知网、万方医学... 详细信息

背景:产前诊断筛查技术的发展使得产前治疗成为可能。对于多种胎儿遗传性疾病,宫内干细胞治疗具有显著的优势。目的:通过目前已有的实验研究和临床资料分析宫内干细胞治疗产前胎儿疾病的可行性。方法:应用计算机检索中国知网、万方医学网、PubMed数据库中的相关文献,检索时间从建库至2020-06-16,检索中文关键词为“宫内干细胞治疗,胎儿”,英文关键词为“in utero stem cell therapy,fetal”。结果与结论:随着产前诊断筛查技术和干细胞治疗技术的发展,宫内干细胞在多种胎儿遗传性疾病治疗中具有显著的优势。胎儿自身发育的生理特点也为宫内干细胞移植提供了条件。临床前动物实验研究从嵌合体植入水平和免疫耐受等方面为宫内干细胞移植治疗的临床应用奠定了基础。近年来,产前诊断筛查技术的发展,伴随高通量分子检测、微创手术等方法,可在妊娠早期检测出多种胎儿疾病,也使得产前宫内治疗成为可能。

关键词：宫内干细胞免疫遗传性疾病严重联合免疫缺陷症造血干细胞间充质干细胞羊水干细胞治疗综述

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探讨GnRH拮抗剂方案的标准剂量及早发LH峰后的剂量调整

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海南医学院学报 2024年第3期30卷 236-240页

作者：韩众益吴婷婷马燕琳海南医学院第一附属医院生殖医学科海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室海南医学院第一附属医院海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心海南医学院生殖健康与相关疾病研究与转化教育部重点实验室海南医学院第一附属医院海口市人类遗传资源保藏重点实验室海南海口570100

促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)拮抗剂方案已被广泛应用于控制性促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)的体外受精(in vitro fertilization,IVF)周期中,作为GnRH激动剂方案的有效替代治疗方法,适用于各种卵巢反应的不孕女性患者。尽管拮抗剂促排卵方案的临床应用已得到广泛认可,但其中仍有较大的优化空间。因此,本文将重点探讨GnRH拮抗剂方案的优缺点、最佳标准用量的选择以及出现早发黄体生成素(luteinizing hormone,LH)峰后拮抗剂用量的调整策略等问题,旨在为该方案的应用提供更为合理和科学的建议。

关键词： GnRH拮抗剂方案标准剂量早发LH峰

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144例辅助生殖技术助孕妊娠后胚胎停育患者绒毛细胞染色体核型分析

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中国妇幼保健 2016年第1期31卷 111-113页

作者：谢宝国黄元华徐雯张毅黎明红云天英麦清扬马燕琳卢伟英海南医学院附属医院生殖医学中心海南省人类生殖与遗传重点实验室海南海口570102

目的探讨辅助生殖技术(ART)助孕妊娠后胚胎停育与绒毛细胞染色异常的关系。方法收集2012年11月-2014年12月在该院生殖医学中心行ART后妊娠胚胎停育的162例患者的胎儿绒毛组织,对胎儿绒毛细胞进行染色体制备和G显带并行核型分析。结果 16... 详细信息

目的探讨辅助生殖技术(ART)助孕妊娠后胚胎停育与绒毛细胞染色异常的关系。方法收集2012年11月-2014年12月在该院生殖医学中心行ART后妊娠胚胎停育的162例患者的胎儿绒毛组织,对胎儿绒毛细胞进行染色体制备和G显带并行核型分析。结果 162例胚胎停育胎儿绒毛培养成功144例,失败18例。染色体核型异常78例(53.8%),其中常染色体三体55例,单体4例,三倍体5例,四倍体5例,嵌合体4例,结构异常5例。结论胚胎染色体异常是引起ART助孕妊娠后胚胎停育的重要病因,绒毛染色体核型分析有助于查明胚胎停育的原因并为合理指导下次妊娠提供依据。

关键词：辅助生殖技术胚胎停育绒毛染色体

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比较人不同细胞来源诱导多能干细胞与胚胎干细胞拟胚体的分化培养过程

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中国组织工程研究 2021年第25期25卷 4019-4024页

作者：韦云剑张风波龙平江欣星马燕琳孙菲李崎海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室生殖医学科海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心海南省海口市570102 海南医学院热带转化医学教育部重点实验室海南省海口市570102 海南医学院第一附属医院海口市人类遗传资源保藏重点实验室海南省海口市570102 安徽省妇幼保健院产科安徽省合肥市230000 南方医科大学南方医院妇产科广东省广州市510515

背景:通过小分子化合物、质粒转染等方法可成功诱导出无病毒载体整合的诱导多能干细胞。与胚胎干细胞相似,诱导多能干细胞可向造血祖细胞进行自由分化,但外源性因子的转入及不同来源人体细胞是否对诱导多能干细胞的分化及诱导造血祖细... 详细信息

背景:通过小分子化合物、质粒转染等方法可成功诱导出无病毒载体整合的诱导多能干细胞。与胚胎干细胞相似,诱导多能干细胞可向造血祖细胞进行自由分化,但外源性因子的转入及不同来源人体细胞是否对诱导多能干细胞的分化及诱导造血祖细胞产生影响,目前尚未清楚。目的:比较人不同细胞来源诱导多能干细胞和胚胎干细胞拟胚体的基因表达差异,为诱导多能干细胞的临床转化进行探索。方法:分别选用羊水细胞及尿细胞来源诱导多能干细胞和人胚胎干细胞进行诱导分化。收集分化不同时间点的拟胚体,检测多能性基因Oct4、Sox2、Nanog以及内胚层标记基因GATA4、中胚层标记基因MSX1、外胚层标记基因PAX6、造血干细胞标记基因CD34和CD43的表达。结果与结论:①羊水细胞来源诱导多能干细胞拟胚体在培养第8天检测不到Oct4、Sox2、Nanog表达,尿细胞来源诱导多能干细胞和胚胎干细胞拟胚体可维持表达至第16天;②羊水细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中GATA4、MSX1、PAX6表达量峰值出现在第4天,持续表达到第8-12天,而其他2种细胞拟胚体中GATA4、MSX1、PAX6表达量峰值出现在第4-8天,并且可持续表达至第12-16天;三胚层标记基因在尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中的表达量明显高于其他2种细胞拟胚体;③在羊水细胞、尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中造血干细胞比率在第12天达峰值,而胚胎干细胞拟胚体中造血干细胞比率在第4天达峰值,尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中造血干细胞比率高于其他2种细胞拟胚体;④人不同细胞来源诱导多能干细胞及胚胎干细胞拟胚体分化培养过程中均具有全能性及三胚层分化能力但各具特点。尿细胞来源诱导多能干细胞或许更适合替代胚胎干细胞成为体外研究造血细胞分化的模型。

关键词：干细胞诱导多能干细胞胚胎干细胞拟胚体多能性造血分化造血干细胞羊水细胞尿细胞

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基于网络药理学和分子对接探讨黄芪治疗早发性卵巢功能不全的机制研究

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海南医学院学报 2024年第15期30卷 1156-1168页

作者：李锦婧钟婉黄元华马燕琳海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室海南医学院生殖健康及相关疾病研究与转化教育部重点实验室海南医学院第一附属医院生殖医学科海南医学院第一附属医院海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心国家国际科技合作基地“中‑缅区域性重大疾病防治联合研究中心”海南医学院第一附属医院海口市人类遗传资源保藏重点实验室海南海口571199 海南医学院口腔医学院海南海口571199

目的:基于网络药理学和分子对接方法探讨黄芪对早发性卵巢功能不全治疗作用的分子机制。方法:在中药系统药理学数据库TCMSP中筛选黄芪有效成分及药物作用靶点;在Genecards数据库中筛选早发性卵巢功能不全疾病靶点;运用Venny在线工具筛... 详细信息

目的:基于网络药理学和分子对接方法探讨黄芪对早发性卵巢功能不全治疗作用的分子机制。方法:在中药系统药理学数据库TCMSP中筛选黄芪有效成分及药物作用靶点;在Genecards数据库中筛选早发性卵巢功能不全疾病靶点;运用Venny在线工具筛选两者的交互基因;通过Cytoscape3.7.2软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络关系图;采用String数据库获得蛋白互作(PPI)信息,进一步通过CytoNCA插件构建蛋白质相互作用网络,筛核心靶点蛋白;利用DAVID数据库对交互基因进行GO富集和KEGG通路富集;使用分子对接技术进一步明确其发挥治疗作用的分子;最后,采用血清饥饿法建立POI细胞模型,给予黄芪中的有效化合物槲皮素进行干预,通过Tunel染色、蛋白质印迹实验(western blotting,WB)对网络药理学预测结果进行实验验证。结果:通过TCMSP数据库筛选出黄芪的32个有效化合物及552个基因靶点,从疾病数据库中筛选出730个早发性卵巢功能不全的疾病靶点,两者共62个交集基因,其中黄芪中的主要活性成分包括槲皮素(quercetin)、异鼠李素(isorhamnetin)、山奈酚(kaempferol)、丁子香萜(Mairin)、芒柄花黄素(formononetin)和芒柄花黄素(astragaloside IV),10个POI的潜在核心靶基因为ALB、INS、AKT1、ACTB、TP53、TNF、ESR1、CASP3、STAT3和PTEN;潜在靶点基因主要参与调控JAK2/STAT3、PI3K/Akt信号通路;分子对接验证了黄芪主要活性化合物与核心蛋白STAT3和Akt1存在较强的结合作用;细胞实验结果发现,黄芪中的重要活性化合物槲皮素能促进JAK2/STAT3信号通路关键分子JAK2及STAT3的磷酸化水平,改变卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白表达水平。结论:网络药理学和分子对接分析表明中药黄芪能通过调节对雌二醇的反应、抑制凋亡过程以及调控JAK-STAT和PI3K-Akt信号通路治疗早发性卵巢功能不全,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡相关。

关键词：网络药理学分子对接黄芪早发性卵巢功能不全信号通路细胞凋亡

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β-地中海贫血治疗的研究进展

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实用医学杂志 2021年第6期37卷 816-820页

作者：杨花梅孙菲马燕琳李崎海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室海口570100 海南医学院第一附属医院生殖医学科海口570100 海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心海口570100 海南医学院热带转化医学教育部重点实验室海口570100 海口市人类遗传资源保藏重点实验室海口570100

β-地中海贫血是由于β-珠蛋白基因异常而导致的单基因遗传病,是地中海贫血中最常见的类型。尽管目前治疗地中海贫血的方法有很多,比如输血、铁螯合、脾切除、异体造血干细胞移植(HSCT)等,但在治愈地中海贫血的道路上仍面临巨大的挑战... 详细信息

β-地中海贫血是由于β-珠蛋白基因异常而导致的单基因遗传病,是地中海贫血中最常见的类型。尽管目前治疗地中海贫血的方法有很多,比如输血、铁螯合、脾切除、异体造血干细胞移植(HSCT)等,但在治愈地中海贫血的道路上仍面临巨大的挑战。本文主要根据β-地中海贫血的发病机制系统阐述其目前的临床治疗策略,并着重叙述基因治疗技术如何治愈β-地中海贫血的研究进展。

关键词： β-地中海贫血 β-珠蛋白 γ-珠蛋白慢病毒载体基因治疗

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多囊卵巢综合征患者外周血单核细胞TLR4表达及其与胰岛素抵抗指数的相关性

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山东医药 2023年第21期63卷 68-70页

作者：王亚妹谢宝国海南医学院海口570102 海南医学院第一附属医院生殖医学科海南省临床医学中心海南省人类生殖与遗传重点实验室

目的观察多囊卵巢综合征(PCOS)患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及其与胰岛素抵抗的关系。方法选取PCOS患者30例(观察组),同期健康人群20例(对照组),荧光定量PCR法和免疫蛋白印迹法分别检测两组外周血单核细胞中TLR4 mRNA、蛋... 详细信息

目的观察多囊卵巢综合征(PCOS)患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及其与胰岛素抵抗的关系。方法选取PCOS患者30例(观察组),同期健康人群20例(对照组),荧光定量PCR法和免疫蛋白印迹法分别检测两组外周血单核细胞中TLR4 mRNA、蛋白,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),Pearson相关分析法分析观察组TLR4 mRNA表达与HOMA-IR的相关性。结果与对照组比较,观察组外周血单核细胞中TLR4 mRNA、蛋白表达升高(P均<0.05);与对照组比较,观察组HOMA-IR升高(P<0.05);观察组TLR4 mRNA相对表达量与HOMA-IR呈正相关(r=0.845 4,P<0.05)。结论 PCOS患者外周血单核细胞TLR4 mRNA、蛋白表达升高,TLR4 mRNA表达与HOMA-IR呈正相关关系。

关键词： Toll样受体4 多囊卵巢综合征胰岛素抵抗

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