检索结果-内蒙古大学图书馆

深圳特区科技 2005年第11期 194-199页

作者：宗卉曾少灵林庆燕温艳辉深圳出入境检验检疫局动植中心动检室

本研究根据马、驴线粒体 DNA 中的保守区段设计了一对引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增,可以专一地扩增出马、驴源性成分的 DNA 片段,再经限制性内切... 详细信息

本研究根据马、驴线粒体 DNA 中的保守区段设计了一对引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增,可以专一地扩增出马、驴源性成分的 DNA 片段,再经限制性内切酶 Sau 3A 和 Alu Ⅰ的酶切鉴定可以区分马源性成分和驴源性成分,PCR扩增产物的测序结果验证了酶切鉴定结果的正确性。引物灵敏度测试结果表明该方法的检测低限均达0.3%,该对引物可以成为检测马、驴源性成分高效准确的检测工具。

关键词：马、驴线粒体DNA 聚合酶链式反应马、驴源性成分分子生物学

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华南地区三株新城疫地方强毒株的序列测定及其系统发育分析

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畜牧兽医学报 2003年第1期34卷 67-71页

作者：秦智锋贺东生吴红专娄华杨德威刘福安深圳出入境检验检疫局动植食中心动检室深圳518000 华南农业大学动物医学系农业部养禽与禽病重点开放实验室广州510642

用设计的特异性引物,通过一步法RT-PCR扩增出5个毒株的897bp片段,对其中的3株病毒cDNA分析表明:各毒株的半胱胺酸位点和个数及糖基化位点基本没有改变。各毒株在抗原决定簇氨基酸位点HN基因346～353处的碱基突变甚多,且氨基酸也出现了... 详细信息

用设计的特异性引物,通过一步法RT-PCR扩增出5个毒株的897bp片段,对其中的3株病毒cDNA分析表明:各毒株的半胱胺酸位点和个数及糖基化位点基本没有改变。各毒株在抗原决定簇氨基酸位点HN基因346～353处的碱基突变甚多,且氨基酸也出现了部分的突变。针对HN基因897bp片段构建了相应的系统发育树,系统发育分析表明:中国(华南)地区NDV各毒株与欧美国家的Ⅱ至Ⅴ基因群明显分离,遗传规律较远;NDV WS1和NDV HY与台湾省NDV各毒株归属为一组,与中国毒株的遗传距离较近,均属新近出现的基因型Ⅶ型,NDⅦ型在远东和西欧(Ⅶb)和及中东和南非(Ⅶa)广泛存在,可能形成了ND的第4次大流行。这些一方面说明NDV的变异可能已突破种源屏障,在鸡与鹅之间进行相互传播;另一方面说明中国古老的NDV毒株仍然持续存在,并逐渐向强毒株突变,与其他新出现的基因型毒株"共循环"。

关键词：华南地区新城疫地方强毒株新城疫病毒 HN基因 RT-PCR 系统发育测序

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鸭病毒性肝炎实验室诊断方法的研究

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中国预防兽医学报 2002年第4期24卷 310-313页

作者：秦智锋李环玲贺东生刘福安深圳出入境检验检疫局动植食中心动检室广东深圳518000 香港英特威有限公司广州办事处华南农业大学动物医学系广东广州510642

将鸭病毒性肝炎病毒 (duckhepatitisvirusDHV) (ATCC株 )用鸡胚传一代后 ,测出此病毒的鸡胚半数致死量 (ELD50 )为10 -5.5。通过多次重复试验 ,建立了利用鸡胚中和试验和雏鸭中和试验检测鸭病毒性肝炎 (DVH)的诊断方法。 7株DHV毒株在... 详细信息

将鸭病毒性肝炎病毒 (duckhepatitisvirusDHV) (ATCC株 )用鸡胚传一代后 ,测出此病毒的鸡胚半数致死量 (ELD50 )为10 -5.5。通过多次重复试验 ,建立了利用鸡胚中和试验和雏鸭中和试验检测鸭病毒性肝炎 (DVH)的诊断方法。 7株DHV毒株在鸡胚中和试验中的结果是 :胚传一代尿囊液死亡率为 2 / 8～ 5 / 8,1∶10血清中和保护率为 8/ 8,1∶10 0 0肝病料死亡率为 3/ 8～8/ 8,1∶10血清中和保护率为 8/ 8,正常对照全部存活。雏鸭中和试验的结果是 :2 4小时内 1∶10肝病料死亡率为 3/ 8～ 8/ 8,1∶5血清中和保护率为 8/ 8。

关键词：鸭病毒性肝炎鸡胚中和试验雏鸭中和试验

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饲料中马、驴源性成分的分子生物学检测技术

饲料中马、驴源性成分的分子生物学检测技术

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深圳市科协2005年年会

作者：宗卉曾少灵林庆燕温艳辉深圳出入境检验检疫局动植中心动检室

本研究根据马、驴线粒体DNA中的保守区段设计了一对引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增,可以专一地扩增出马、驴源性成分的DNA片段,再经限制性内切酶S... 详细信息

本研究根据马、驴线粒体DNA中的保守区段设计了一对引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)采取马、驴、牛、羊、猪、鸡、兔、鹿、火鸡等实验材料进行扩增,可以专一地扩增出马、驴源性成分的DNA片段,再经限制性内切酶Sau 3A和Alu Ⅰ的酶切鉴定可以区分马源性成分和驴源性成分,PCR扩增产物的测序结果验证了酶切鉴定结果的正确性.引物灵敏度测试结果表明该方法的检测低限均达0.3％,该对引物可以成为检测马、驴源性成分高效准确的检测工具.

关键词：线粒体DNA 聚合酶链式反应驴源性成分马源性成分饲料成分

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鱼病毒性神经坏死病病毒(VNNV)不同基因型鉴别方法的建立及在VNN检疫和监测中的应用

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水产学报 2004年第6期28卷 695-702页

作者：刘荭史秀杰高隆英何俊强江育林陈焕春华中农业大学动物医学院动物病毒室深圳出入境检验检疫局动植食中心水生动物病重点实验室华中农业大学动物医学院动物病毒室湖北武汉　430070深圳出入境检验检疫局动植食中心水生动物病重点实验室广东深圳　518001

从GenBank中查找出乙型野田村病毒组中海水鱼类各病毒的序列,并用Sequencher多重序列比较软件将其分到条纹神经坏死病毒(stripedjacknervousnecrosisvirus,SJNNV)组、条纹星鲽神经坏死病毒(barfinfloundernervousnecrosisvirus,BFNNV)组、红点石斑鱼神经坏死病毒(redspottedgroupernervousnecrosisvirus,RGNNV)组和虎斑东方神经坏死病毒(tigerpuffernervousnecrosisvirus,TPNNV)组4个基因型的组别中。用DNAsis序列比较软件比较同一基因型各基因序列之间的同源性,均在85%以上;不同基因型之间序列的同源性,均在66%以下。结合Premier引物设计软件和Sequencher序列多重比较软件,设计了4对引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)来鉴别这4个不同的基因型。对从深圳口岸进境的产地为台湾的海水鱼苗和广东、福建两省养殖的主要海水鱼类进行检疫和监测,结果在进境的海水鱼苗中检出有RGNNV基因型的VNNV,在福建和广东省养殖的石斑鱼成鱼和鱼苗的病鱼体内均检测到RGNNV基因型的VNNV,对上述扩增产物基因序列进行比较,相似性均在96.5%以上,推导出的氨基酸序列与玛拉巴石斑鱼神经坏死病毒(MNNV)序列相似性均为100%。

关键词：病毒性神经坏死病病毒基因型鉴别

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鲤春血症病毒中国分离株糖蛋白基因和氨基酸序列的初步解析

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中国病毒学 2005年第6期20卷 647-651页

作者：刘荭付峰黄倢何俊强史秀杰高隆英杨锦舜江育林深圳出入境检验检疫局动植食中心水生动物病重点实验室广东深圳518001 中国科学院黄海水产研究所水产病害控制研究室山东青岛266071

2002～2004年间从国内养殖鲤科鱼类和观赏鱼类中分离出8株鲤春血症病毒(SVCV)。根据SVCV参考株全序列,设计引物,用逆转录聚合酶链式反应扩增出8株SVCV糖蛋白编码基因片段,并对扩增产物进行了克隆和序列测定。用生物信息学方法对测得... 详细信息

2002～2004年间从国内养殖鲤科鱼类和观赏鱼类中分离出8株鲤春血症病毒(SVCV)。根据SVCV参考株全序列,设计引物,用逆转录聚合酶链式反应扩增出8株SVCV糖蛋白编码基因片段,并对扩增产物进行了克隆和序列测定。用生物信息学方法对测得的序列进行分析,结果8个国内分离株的糖蛋白基因序列与参考株的基因序列相似性均在92％以上,8个国内分离株之间基因序列相似性均在97．7％以上;8个国内分离株之间糖蛋白推导出的氨基酸序列相似性均在94．5％以上,与参考株氨基酸序列相似性在92．9％-94．9％之间。系统发育树分析结果表明,SVCV国内分离株与USA株、980451株、980528株和970469株的进化方向一致,与其它SVCV毒株在进化方向上不同。8个毒株有19个共同的酶切位点,推导出的氨基酸序列中有10个亲水区、10个可能的抗原位点和10个跨膜蛋白区域,其峰值基本一致。对SVCV国内分离株的糖蛋白6个功能位点(天冬酰胺糖基化位点、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸磷酸化位点和肉豆蔻酰基化位点)进行了初步分析。

关键词：鲤春血症病毒糖蛋白序列解析

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锦鲤疱疹病毒的检测与人工感染试验

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武汉大学学报（理学版） 2005年第S2期51卷 249-252页

作者：周永灿袁军法任武泽刘荭江育林石正丽海南大学海洋学院海南海口570228 中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室湖北武汉430071 深圳出入境检验检疫局动植食中心水生动物病重点实验室广东深圳518001

基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测... 详细信息

基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测序,结果表明与GenBank登记序列完全一致.用组织匀浆上清人工感染健康锦鲤,并从试验感染鱼组织中检测到KHV病毒DNA.该结果表明KHV或CNGV已经传播到我国,应引起重视.

关键词：锦鲤疱疹病毒(KHV) 鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV) 人工感染 PCR检测

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鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的初步表达

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海洋水产研究 2007年第4期28卷 72-76页

作者：付峰刘荭范万红江育林黄倢农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所深圳出入境检验检疫局动植食中心水生动物病重点实验室 518001

根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。... 详细信息

根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。获得的重组质粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521经线性化后,电击法转化毕赤酵母SMD1168菌株,构建分泌型表达SVCV糖蛋白的重组酵母菌株。酵母菌落PCR法检测表明,已成功构建分泌表达SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达。

关键词：鲤春病毒血症病毒糖蛋白克隆毕赤酵母分泌表达

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