检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2025年第2期65卷 524-536页

作者：唐雅碧吴佳玲李晓谢宁深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳

丝状真菌的衰老是一个涉及多种生理生化变化的复杂过程,受外部环境和遗传的共同影响,且伴随细胞功能退化与生理损伤。丝状真菌因其遗传操作容易、生命周期短、便于量化的衰老特征等优势被广泛用于衰老机制研究。本研究对丝状真菌的衰老... 详细信息

丝状真菌的衰老是一个涉及多种生理生化变化的复杂过程,受外部环境和遗传的共同影响,且伴随细胞功能退化与生理损伤。丝状真菌因其遗传操作容易、生命周期短、便于量化的衰老特征等优势被广泛用于衰老机制研究。本研究对丝状真菌的衰老特征进行综述,并归纳环境因素、线粒体稳定性、氧化应激和代谢水平等影响衰老的因素,解析衰老过程的调控机制,进一步挖掘丝状真菌在工业应用中的应用价值,期望能为人类衰老的研究提供新的研究思路。

关键词：丝状真菌衰老线粒体DNA(mtDNA)稳定性自噬遗传调控机制

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基于酶反应显色的产纤维素酶真菌筛选方法

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深圳大学学报（理工版） 2023年第4期40卷 407-414页

作者：马学坤谢燕萍王娟刘刚深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518071

刚果红显色法及革兰氏碘液显色法是进行产纤维素酶真菌筛选的常用方法,但存在显色不够明显和易受培养基成分干扰等缺点.建立方便、灵敏的产纤维素酶真菌筛选新方法,有助于快捷准确地筛选产纤维素酶真菌的菌株.基于真菌产生的纤维素酶会... 详细信息

刚果红显色法及革兰氏碘液显色法是进行产纤维素酶真菌筛选的常用方法,但存在显色不够明显和易受培养基成分干扰等缺点.建立方便、灵敏的产纤维素酶真菌筛选新方法,有助于快捷准确地筛选产纤维素酶真菌的菌株.基于真菌产生的纤维素酶会导致培养基中的纤维素底物水解,产生纤维寡糖,且寡糖产量与纤维素酶活力正相关.利用寡糖氧化酶-辣根过氧化物酶显色方法对寡糖浓度及纤维素酶活力进行分析,发现在一定浓度范围内,光密度值与寡糖浓度及纤维素酶浓度均存在良好的线性关系.将在中国深圳塘朗山的林地采样、浸提的菌液稀释,涂布到改良的马丁氏培养基平板.待长出单菌落后,将这些单菌落在含改良马丁氏培养基的24孔板中培养72 h,离心后取培养上清液加入到寡糖氧化酶-辣根过氧化物酶纤维素体系中进行显色,根据颜色深浅对产纤维素酶菌株进行初筛.采用纤维素酶产酶培养基对初筛菌株进行复筛和初步鉴定,共获得15株具有较高产纤维素酶能力的真菌.研究可为产纤维素酶真菌的筛选提供了一种明确而简单的方法.

关键词：酶工程纤维素酶丝状真菌寡糖氧化酶辣根过氧化物酶滤纸酶活力

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转录因子PaPho与丝状真菌Podospora anserina中磷元素的吸收和利用研究

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微生物学报 2023年第3期63卷 1072-1087页

作者：陈绮艺李晓杜文珍申令刘刚谢宁深圳大学生命与海洋科学学院、深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518071 深圳大学《深圳大学学报(理工版)》编辑部广东深圳518060

作为生物体必需的营养元素之一,磷在物质代谢、信号传导和能量储存中起着关键作用。【目的】研究丝状真菌Podospora anserina中调控磷酸盐代谢相关转录因子的作用,可进一步阐明真核微生物中磷元素吸收的调控机制。【方法】利用同源重组... 详细信息

作为生物体必需的营养元素之一,磷在物质代谢、信号传导和能量储存中起着关键作用。【目的】研究丝状真菌Podospora anserina中调控磷酸盐代谢相关转录因子的作用,可进一步阐明真核微生物中磷元素吸收的调控机制。【方法】利用同源重组的方法定点敲除***中2个磷代谢相关转录因子PaPho1和PaPho2,遗传杂交构建双重突变体ΔPaPho1ΔPaPho2;通过表型分析、无机磷含量测定和酸性磷酸酶活性测定分析各突变菌株的变化;利用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)分析磷代谢相关基因的表达情况。【结果】在无机磷作为唯一磷来源的培养基上,ΔPaPho1ΔPaPho2无法生长;在添加有机磷的培养基中,ΔPaPho1ΔPaPho2和野生型菌株生长无显著性差异。在同时添加有机磷和无机磷的培养基中,ΔPaPho1ΔPaPho2的无机磷含量和酸性磷酸酶活性比野生型菌株的分别下降了25.0%和61.9%,ΔPaPho1ΔPaPho2中无机磷酸盐转运蛋白基因的表达水平显著降低。【结论】在***中,PaPho1和PaPho2作为调控磷酸盐代谢信号通路转录因子,对无机磷的吸收起到关键作用,但并不参与有机磷的代谢调控。该研究可为阐释丝状真菌***对无机磷吸收的调控机制提供参考。

关键词：丝状真菌 Podospora anserina 转录因子基因敲除磷代谢无机磷

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丝状真菌Podospora anserina AA11家族裂解多糖单加氧酶基因的鉴定和功能研究

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遗传 2023年第12期45卷 1128-1146页

作者：杜文珍李元敬吴佳玲陈思羽姜亮刘刚谢宁深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室深圳518060 华南师范大学材料与新能源学院汕尾516622

辅助活性蛋白家族(auxiliary activity family,AA family)中的裂解多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenase,LPMO)能催化纤维素、几丁质和淀粉等多种难降解碳水化合物的氧化解聚。尽管目前对LPMO的酶学研究较多,但对LPMO基因... 详细信息

辅助活性蛋白家族(auxiliary activity family,AA family)中的裂解多糖单加氧酶(lytic polysaccharide monooxygenase,LPMO)能催化纤维素、几丁质和淀粉等多种难降解碳水化合物的氧化解聚。尽管目前对LPMO的酶学研究较多,但对LPMO基因失活的研究却鲜有报道。本研究利用同源重组方法定点敲除丝状真菌Podospora anserina中AA11家族的5个LPMO基因PaLPMO11A(Pa_4_4790)、PaLPMO11B(Pa_1_5310)、PaLPMO11C(Pa_2_7840)、PaLPMO11D(Pa_2_8610)和PaLPMO11E(Pa_3_9420),分别构建了单突变体ΔPaLPMO11A(ΔA)、ΔPaLPMO11B(ΔB)、ΔPaLPMO11C(ΔC)、ΔPaLPMO11D(ΔD)和ΔPaLPMO11E(ΔE),然后通过遗传杂交构建所有多基因突变体。通过在不同碳源培养基上的表型分析、DAB和NBT染色以及纤维素酶活测定分析野生型菌株与突变型菌株在生长速率、有性生殖、氧化应激和纤维素降解能力等方面的差异,揭示LPMO11基因在***菌株的生长发育和木质纤维素降解过程中的作用。实验结果表明,在不同纤维素碳源上,ΔBΔCΔE、ΔAΔBΔCΔE、ΔAΔCΔDΔE和ΔAΔBΔCΔDΔE突变型菌株的有性生殖能力降低,其余突变型菌株的孢子萌发效率、生长速率和生殖能力几乎没有差异。PaLPMO11家族5个基因的同时缺失,会导致菌株利用各种碳源的能力明显降低、生长速率降低、孢子萌发率降低、子实体数减少、部分子实体发育异常、寿命缩短和降解纤维素的能力显著下降,但仍有野生型45%以上的总纤维素酶活力。上述结果表明,LPMO11基因可能参与***的生长发育、有性生殖、衰老和纤维素降解过程。本研究为系统阐述丝状真菌***中木质纤维素降解的调控机制提供参考。

关键词：丝状真菌 Podospora anserina LPMO11 基因敲除木质纤维素降解

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丝状真菌Podospora anserina中光敏色素基因的鉴定及功能分析

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微生物学报 2024年第2期64卷 443-460页

作者：陈思羽李晓杜文珍耿月华刘刚谢宁深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518071 深圳大学《深圳大学学报(理工版)》编辑部广东深圳518060 河南农业大学植物保护学院河南郑州450002

光敏色素在细菌和植物发育中起着关键作用,但它们在真菌中的生物学功能尚不完全清楚。【目的】探究光敏色素基因PaPhy1和PaPhy2在Podospora anserina有性生殖和无性发育中的作用及其调控机制。【方法】利用同源重组方法对***中2个光敏... 详细信息

光敏色素在细菌和植物发育中起着关键作用,但它们在真菌中的生物学功能尚不完全清楚。【目的】探究光敏色素基因PaPhy1和PaPhy2在Podospora anserina有性生殖和无性发育中的作用及其调控机制。【方法】利用同源重组方法对***中2个光敏色素基因PaPhy1和PaPhy2进行定点敲除,获得光敏色素基因缺失菌株ΔPaPhy1和ΔPaPhy2,并通过遗传杂交构建双重突变体ΔPaPhy1ΔPaPhy2;分析突变型菌株和野生型菌株在不同光照下有性生殖、无性发育、生长速率和活性氧代谢等方面的差异,明确光敏色素基因在***中的主要功能。【结果】白光和蓝光诱导***子实体的形成,ΔPaPhy在光照下产生子实体的数量减少,ΔPaPhy的生命周期延长。【结论】光敏色素基因与***有性生殖密切相关;ΔPaPhy的衰老延迟和活性氧代谢有关。本研究的结果为进一步探索光照对丝状真菌繁殖调控机制以及抗衰老研究提供了新的思路。

关键词：丝状真菌 Podospora anserina 光敏色素基因敲除有性生殖衰老活性氧代谢

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微生物学“小规模限制性在线开放课程+对分课堂”混合教学模式的探索与实践

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微生物学通报 2022年第4期49卷 1255-1263页

作者：徐芳芳谢宁深圳大学生命与海洋科学学院广东省植物表观遗传学重点实验室深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518055

互联网时代下新兴技术推陈出新,传统讲授型课堂面临诸多挑战。秉承“教”与“学”并重的理念,深圳大学微生物学课程探索并初步实践了“小规模限制性在线开放课程(smallprivate online course,SPOC)+对分课堂”混合教学模式。综合两种教... 详细信息

互联网时代下新兴技术推陈出新,传统讲授型课堂面临诸多挑战。秉承“教”与“学”并重的理念,深圳大学微生物学课程探索并初步实践了“小规模限制性在线开放课程(smallprivate online course,SPOC)+对分课堂”混合教学模式。综合两种教学方法的优势,对微生物学课程的教学内容按照“课前、课中、课后”三大模块进行了系统重构,将每个教学单元设计为讲授(presentation,P)-内化吸收(assimilation,A)-温故知新(review,R)-讨论(discussion,D)-讲授(presentation,P),即P-A-R-D-P这5个环节,其中课前P-A环节采用线上SPOC、课中R-D-P采用对分课堂形式。这样的混合教学模式既不忽视传统课堂中教师系统传授知识的重要性,也不完全让学生自学,打造了教师充分设计、学生充分参与的良性互动课堂氛围,有利于实现教师与学生两个主体达到“教”与“学”及“权”与“责”上的动态平衡,获得了学生的充分肯定,达到了较高的教学满意度。

关键词：小规模限制性在线开放课程对分课堂混合式教学微生物教学

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活性污泥中群体感应淬灭菌的分离纯化及功能验证

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微生物学通报 2021年第10期48卷 3532-3542页

作者：廖家龙郑雪漫黎双飞徐芳芳深圳大学生命与海洋科学学院广东省植物表观遗传学重点实验室深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518055

【背景】近年来,群体感应淬灭(Quorum Quenching,QQ)技术在膜生物污堵防控中的应用研究受到了广泛关注。然而,目前已成功分离纯化的高效QQ菌有限,更多高效QQ菌资源亟待挖掘。【目的】从实际运行的膜生物反应器(MembraneBioreactor,MBR)... 详细信息

【背景】近年来,群体感应淬灭(Quorum Quenching,QQ)技术在膜生物污堵防控中的应用研究受到了广泛关注。然而,目前已成功分离纯化的高效QQ菌有限,更多高效QQ菌资源亟待挖掘。【目的】从实际运行的膜生物反应器(MembraneBioreactor,MBR)活性污泥中采样,分离并富集高效QQ菌。【方法】以根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) A136为报告菌株,使用指示琼脂平板法测定各菌株的N-辛酰基高丝氨酸内酯(N-Octanoyl-DL-Homoserine Lactone,C8-HSL)降解能力。以紫色色杆菌(Chromobacterium violaceum) VIR24为报告菌株,定量测定所得QQ菌降解N-己酰高丝氨酸内酯(N-Hexanoyl-DL-Homoserine Lactone,C6-HSL)信号分子的能力。通过微生物形态、生理生化及16SrRNA基因序列测定、构建系统发育树、扫描电子显微镜形态观测等方法对菌株进行分类学鉴定。用共培养法分析QQ菌对生物膜形成的抑制能力,通过聚乙烯醇和海藻酸钠包埋固定化QQ菌。【结果】筛选出了6株高效QQ菌,其中对C8-HSL分解能力最强的为杆状、革兰氏阴性戴尔福特菌属(Delftia sp.) JL5。定量分析结果表明菌株JL5能在10 h内完全降解C6-HSL。菌株JL5显著抑制铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) PAO1和菠萝泛菌(Pantoea ananatis) SK-1生物膜的形成。固定化后的JL5微球仍具有高效的C6-HSL和C8-HSL信号分子分解能力,而且分解速度较被广泛报道的红球菌(Rhodococcussp.)BH4更快。【结论】研究分离得到了高效的QQ菌,能够有效抑制N-酰基高丝氨酸内酯(N-Acyl-HomoserineLactones,AHL)型群体感应菌生物膜的形成,固定化后仍然具有强QQ活性,具备广泛的应用前景,为后续QQ膜生物污堵防控技术的实践应用奠定了基础。

关键词：群体感应群体感应淬灭细菌分离膜防污

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敲除里氏木霉hkmt基因可增强纤维素酶的酶活性和表达水平

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第2期36卷 174-181页

作者：张珂珂周娇娇佘炜怡高云雨邓嘉雯谢宁田生礼深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518052

表观遗传是不涉及DNA序列变化的可遗传变化,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和miRNA调控等。在组蛋白甲基化修饰中,主要是组蛋白赖氨酸甲基转移酶(histone lysine methyltransferase,HKMT)参与调控。有文献报道,HKMT蛋白的催化核心为SET结构... 详细信息

表观遗传是不涉及DNA序列变化的可遗传变化,包括DNA甲基化、组蛋白修饰和miRNA调控等。在组蛋白甲基化修饰中,主要是组蛋白赖氨酸甲基转移酶(histone lysine methyltransferase,HKMT)参与调控。有文献报道,HKMT蛋白的催化核心为SET结构域,它具有促进或抑制基因表达的作用。在里氏木霉(Trichoderma reesei)中,HKMT对纤维素酶基因的表达调控的机制尚不明确。本文阐述了以里氏木霉为研究对象,利用Split-Maker技术构建了组蛋白赖氨酸甲基转移酶基因敲除表达盒,并转化了里氏木霉*** QM9414。经PCR及Southern印迹验证正确后,显微镜观察到***Δhkmt菌株菌丝较长,分支较多。检测到突变体菌株连续7d滤纸酶活(filter paper enzyme activity,AFP)和羧甲基纤维素钠酶活(carboxymethyl cellulose sodium enzyme activity,CMCA)。结果分别比野生型菌株高出5.00 IU·mL-1、15.00 IU·mL-1。利用RT-qPCR检测到突变菌株纤维素酶及其相关基因cbh1、egl1和xyr1的表达分别高出野生型4.51、3.87和2.51倍。通过对野生型菌株和突变菌株形态特征、纤维素酶酶活性、纤维素酶相关基因表达量的探索,为进一步研究里氏木霉表观遗传调控对纤维素酶表达的影响提供了新思路和实验资料。

关键词：表观遗传组蛋白赖氨酸甲基转移酶里氏木霉基因敲除突变体

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敲除组蛋白去乙酰化酶基因hdac对里氏木霉纤维素酶表达的调控作用

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微生物学通报 2020年第1期47卷 88-96页

作者：张珂珂周娇娇佘炜怡高云雨邓嘉雯谢宁田生礼深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室

[背景]里氏木霉(Trichoderma reesei)是木霉属中产纤维素酶最具代表性的真菌之一,表观遗传调控是不涉及DNA序列变化的可遗传变化,组蛋白去乙酰化是其中一种。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)负责脱乙酰化,敲除去乙酰化酶基... 详细信息

[背景]里氏木霉(Trichoderma reesei)是木霉属中产纤维素酶最具代表性的真菌之一,表观遗传调控是不涉及DNA序列变化的可遗传变化,组蛋白去乙酰化是其中一种。组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)负责脱乙酰化,敲除去乙酰化酶基因可引起菌株孢子、菌丝及纤维素酶活性等的一系列改变。[目的]通过敲除里氏木霉组蛋白去乙酰化酶基因(histone deacetylase,hdac)建立了里氏木霉hdac缺失突变株(***△hdac),以研究对纤维素酶基因表达的调控作用。[方法]利用Split-Maker技术构建了组蛋白去乙酰化酶基因敲除表达盒,并转化了里氏木霉*** QM9414。经PCR及Southern blotting验证正确后,对突变体***△hdac连续7 d检测滤纸酶活(filter paper activity,AFP)、羧甲基纤维素钠酶活(carboxymethyl cellulase activity,CMCA),利用RT-qPCR检测纤维素酶及其相关基因cbh1、egl1和xyr1的表达。[结果]突变体***△hdac两种酶活力均显著高于出发菌株,分别高出8.00、30.00 IU/mL。突变体***△hdac纤维素酶及其相关基因cbh1、egl1和xyr1的转录水平分别为出发菌株*** QM9414的6.50、6.01和4.51倍。[结论]里氏木霉中纤维素酶的基因表达明显受到组蛋白去乙酰化酶基因(hdac)的调控,这为研究里氏木霉表观遗传调控对纤维素酶的影响提供了新的证据。

关键词：里氏木霉组蛋白去乙酰化酶基因敲除突变体

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多靶向沉默里氏木霉碳代谢阻遏物对纤维素酶活性和表达的调控研究

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微生物学报 2019年第4期59卷 730-743页

作者：邓嘉雯高云雨刘旭坤张珂珂钟路遥田生礼深圳大学生命与海洋科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518052

【目的】构建多靶向siRNA表达载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1、CRE2、CRE3和CRE4进行同时多靶向siRNA干扰,以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。【方法】根据此前研究筛选出沉默cre1、cre2、cre3和cre4基因的4个最佳siRN... 详细信息

【目的】构建多靶向siRNA表达载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1、CRE2、CRE3和CRE4进行同时多靶向siRNA干扰,以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。【方法】根据此前研究筛选出沉默cre1、cre2、cre3和cre4基因的4个最佳siRNA序列,设计并构建了A多靶向表达载体,另根据cre1、cre2、cre3和cre4基因中所含有的5个共有序列设计并构建了B多靶向表达载体,将两者转化至里氏木霉QM9414。经筛选后分别在48 h和120 h对各转化子进行纤维素酶酶活力测试(CMC活力测试和滤纸酶酶活力测试)及利用qPCR检测相关基因的表达。【结果】通过RT-qPCR测定结果表明,两种表达载体均可同时抑制里氏木霉的分解代谢物阻遏基因cre1、cre2、cre3和cre4的表达,纤维素酶活力比出发菌株明显升高,多靶向抑制菌株的CMC酶活和滤纸酶活比出发菌株平均提高了1.95倍和2.66倍。纤维素酶基因cbh1和egl1的表达水平比出发菌株也有明显提升,平均提高了3.83倍和3.95倍。纤维素酶相关基因xyr1的表达水平与出发菌株相比也明显上升,平均提高了2.78倍。【结论】多靶向沉默里氏木霉的碳代谢阻遏蛋白有利于解除葡萄糖效应,提高非还原糖的利用,从而提高纤维素酶的产量,使纤维素酶的表达得到更大的提升,为里氏木霉表达纤维素酶在分解代谢物阻遏基因调控方面提供了实验依据和新的技术思路。

关键词：里氏木霉 RNA干扰碳代谢阻遏物纤维素酶

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