检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2012年第12期32卷 1795-1798页

作者：吕建强杨俊兴宗卉张彩虹花群义曹琛福陶虹何云蔚阮周曦深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518045 创世纪转基因技术有限公司广东深圳518048

为了建立鉴别检测小反刍兽疫疫苗毒与野毒的快速分子生物学检测方法,通过对自行测序的疫苗毒基因组序列及GenBank中登录的野毒基因组序列进行比对分析,设计了2套引物和TaqMan荧光探针,对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了小反刍兽... 详细信息

为了建立鉴别检测小反刍兽疫疫苗毒与野毒的快速分子生物学检测方法,通过对自行测序的疫苗毒基因组序列及GenBank中登录的野毒基因组序列进行比对分析,设计了2套引物和TaqMan荧光探针,对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性试验证实,该检测方法只能检测到目的病毒核酸,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,检测疫苗株的最低检测限可达1.38 mg/L的总RNA,检测野毒株的最低检测限为0.16 mg/L的核酸。对同一样品进行重复性检测,检测的荧光扩增曲线阈值完全重合,证明其重复性极好。从180份临床样品中,检测出2份疫苗病毒株阳性样品,其余均为阴性。结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR方法能对小反刍兽疫疫苗毒及野毒进行鉴别检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性极好的优点,是开展小反刍兽疫疫情监测的有力工具。

关键词：小反刍兽疫实时荧光PCR 鉴别检测方法

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以缘脊楔天牛为例评估北美地区楔天牛属(非中国种)的传入风险

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中国植保导刊 2016年第9期36卷 70-72页

作者：汪莹向才玉龙海程颖慧余道坚陈志粦徐浪深圳出入境检验检疫局深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518045

楔天牛属(非中国种)是我国的检疫性有害生物。其中,缘脊楔天牛于2015年4月为我国口岸首次截获。从分类地位、寄主范围、地理分布、为害情况、形态特征、生物学特性及传播途径等方面对缘脊楔天牛进行综述,并以缘脊楔天牛为例,用多指标综... 详细信息

楔天牛属(非中国种)是我国的检疫性有害生物。其中,缘脊楔天牛于2015年4月为我国口岸首次截获。从分类地位、寄主范围、地理分布、为害情况、形态特征、生物学特性及传播途径等方面对缘脊楔天牛进行综述,并以缘脊楔天牛为例,用多指标综合评判法和专家评估法两种评估方法对北美地区楔天牛属(非中国种)的传入风险进行评估,评估结果分别为高和中。

关键词：缘脊楔天牛楔天牛属(非中国种) 传入风险

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美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立

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动物医学进展 2010年第12期31卷 22-27页

作者：曾少灵孙洁秦智锋阮周曦林庆燕花群义曹琛福杨俊兴吕建强张彩虹陈兵陈书琨深圳出入境检验检疫局动植中心深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518001

设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好... 详细信息

设计两套反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了检测美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株的RT-LAMP方法。采用RT-LAMP方法与实时荧光RT-PCR方法检测58份病料,结果一致,但RT-LAMP方法的灵敏度大约高出10倍。RT-LAMP方法特异性良好,检测猪瘟、伪狂犬病和细小病毒等均未出现交叉反应。结果表明,建立的美洲型猪蓝耳病病毒及其高致病性变异株RT-LAMP检测方法具有特异、灵敏、高效和简便的特点,在我国猪蓝耳病快速检测领域将有广阔的应用前景。

关键词： RT-LAMP 猪蓝耳病猪蓝耳病病毒高致病性变异株

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我国公布的进境植物检疫性线虫名录及其演变

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中国植保导刊 2015年第9期35卷 62-65页

作者：李芳荣龙海程颖慧谢泳桂冯建军李一农深圳出入境检验检疫局广东深圳518045 深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518045

对农业部历年来先后5次公布的进境植物检疫性有害生物名录中的植物检疫性线虫名录的演变进行了分析,重点介绍了植物检疫性线虫鉴定与复核的相关内容,归纳了植物检疫性线虫的检疫鉴定标准,为植物检疫性线虫研究工作提供参考。

关键词：线虫名录检疫鉴定标准

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植物检疫性线虫非中国种简介及国内截获概况

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中国植保导刊 2015年第12期35卷 67-69页

作者：李芳荣龙海向才玉谢泳桂李一农深圳出入境检验检疫局广东深圳518045 深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518045

目前我国公布的20种(属)进境植物检疫性线虫名录中,只有根结线虫属和短体线虫属的非中国种是进境植物检疫性线虫。非中国种的鉴定必须按照国家相关法规和标准的规定,经进境植物检疫国家主管部门授权的鉴定专家鉴定、复核,才能最后确认... 详细信息

目前我国公布的20种(属)进境植物检疫性线虫名录中,只有根结线虫属和短体线虫属的非中国种是进境植物检疫性线虫。非中国种的鉴定必须按照国家相关法规和标准的规定,经进境植物检疫国家主管部门授权的鉴定专家鉴定、复核,才能最后确认。随着进境种苗的逐年增加,植物检疫性非中国种线虫传入扩散的风险也越来越大,防止其传入的检疫工作变得更为重要。

关键词：进境植物检疫性线虫非中国种鉴定检疫

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从日本进境罗汉松中截获移去剑线虫

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植物保护 2017年第3期43卷 228-232页

作者：龙海齐小峰谢泳桂李一农李芳荣深圳出入境检验检疫局深圳518001 深圳市检验检疫科学研究院深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室深圳518045

2016年11月,深圳口岸从日本进境罗汉松中截获一种剑线虫。采用贝曼漏斗法分离线虫,结合形态学、28S rRNA基因序列测定以及构建系统发育树,对分离的线虫进行鉴定。该线虫的28SrRNA基因序列和GenBank数据库中的移去剑线虫Xiphinema elonga... 详细信息

2016年11月,深圳口岸从日本进境罗汉松中截获一种剑线虫。采用贝曼漏斗法分离线虫,结合形态学、28S rRNA基因序列测定以及构建系统发育树,对分离的线虫进行鉴定。该线虫的28SrRNA基因序列和GenBank数据库中的移去剑线虫Xiphinema elongatum(登录号分别为EF140790、KF430803、KF430802和KF430801)的序列同源性高达99%;其形态特征和测计值与***最为吻合;系统发育树表明该线虫和***聚为一组。通过以上结果判定截获的线虫为移去剑线虫。剑线虫是一种重要的植物外寄生线虫,我国口岸曾经多次截获剑线虫,剑线虫入侵我国的风险较高。本文首次对日本罗汉松中的移去剑线虫进行了详细的描述,提供了该线虫新的地理分布信息。

关键词：移去剑线虫罗汉松形态学分子鉴定

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MALDI-TOF质谱技术鉴定植物病原体研究进展

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植物检疫 2014年第6期28卷 13-18页

作者：冯建军龙海刘新娇李秋枫刘杰陈冬美章桂明深圳市检验检疫科学研究院深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518010 深圳出入境检验检疫局

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术具有快速和高通量特点,适合分析微量蛋白质、多肽、多糖和核酸,该技术已在生命科学领域广泛应用。本文综述了MALDI-TOF MS技术原理以及近年来在植物病原真菌和细菌鉴定方面的研究进... 详细信息

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术具有快速和高通量特点,适合分析微量蛋白质、多肽、多糖和核酸,该技术已在生命科学领域广泛应用。本文综述了MALDI-TOF MS技术原理以及近年来在植物病原真菌和细菌鉴定方面的研究进展。MALDI-TOF MS作为一种简便和快捷的检测技术,必将在植物病原菌鉴定领域发挥更大的作用。

关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱植物病原菌鉴定

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PMA结合实时荧光PCR进行玉米细菌性枯萎病菌细胞活性检测初步研究

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植物检疫 2014年第2期28卷 27-32页

作者：冯建军刘杰王飞李秋枫刘新娇李一农章桂明深圳出入境检验检疫局广东深圳518045 深圳市检验检疫科学研究院深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室

本文将DNA染料PMA选择渗透性和实时荧光PCR特异性相结合,建立了一种快速灵敏检测玉米细菌性枯萎病菌细胞活性的新方法。结果表明,当菌悬液浓度不高于104 CFU/mL时,终浓度为1μg/mL或更高PMA渗透处理后,可以完全抑制死菌DNA的扩增,而活菌... 详细信息

本文将DNA染料PMA选择渗透性和实时荧光PCR特异性相结合,建立了一种快速灵敏检测玉米细菌性枯萎病菌细胞活性的新方法。结果表明,当菌悬液浓度不高于104 CFU/mL时,终浓度为1μg/mL或更高PMA渗透处理后,可以完全抑制死菌DNA的扩增,而活菌DNA的实时荧光PCR检测仍有荧光信号;当菌悬液浓度为105 CFU/mL时,20μg/mL的PMA也可以完全抑制死细胞DNA扩增。该方法能有效区分玉米细菌性枯萎病菌死活细胞,并有助于监测玉米种子中该病菌的活性。

关键词：叠氮碘化丙锭玉米细菌性枯萎病 TaqMan探针活性

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牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

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动物医学进展 2013年第5期34卷 11-16页

作者：杨俊兴曹琛福曾少灵卢体康孙洁张彩虹唐金明陶虹吕建强花群义深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518045

为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9)。选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA... 详细信息

为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9)。选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA板,用HRP标记的单克隆抗体2F4作为夹心抗体,建立了检测BVDV的双单克隆抗体夹心ELISA方法。通过对BVDV阳性样品、其他病毒阳性样品和阴性对照样品及系列稀释的阳性样品检测,表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。用ELISA检测326份临床样品,结果表明该方法与RT-PCR和商品化ELISA试剂盒检测结果符合率分别为98.8%和99.0%。该方法可以用于BVDV抗原快速检测和对大量样本的筛选。

关键词：牛病毒性腹泻病毒酶联免疫吸附试验单克隆抗体

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非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立

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动物医学进展 2013年第1期34卷 1-6页

作者：曾少灵廖立珊唐金明杨俊兴阮周曦张彩虹曹琛福吕建强秦智锋林庆燕孙洁叶弈优谢晓露花群义深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳市外来有害生物检测技术研发重点实验室广东深圳518045

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合... 详细信息

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 VP73蛋白间接ELISA

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